e.coli bl21(de3)對(duì)乙酸或氨的耐受性及其重組蛋白表達(dá)堿性ph轉(zhuǎn)換策略

1/1e.colibl21(de3)對(duì)乙酸或氨的耐受性及其重組蛋白表達(dá)堿性ph轉(zhuǎn)換策略上海交通大學(xué)博士后學(xué)位論文E.coliBL21(DE3)對(duì)乙酸或氨的耐受性及其重組蛋白表達(dá)：

堿性pH轉(zhuǎn)換策略姓名：

王恒偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：

博士后專(zhuān)業(yè)：

生物學(xué)指導(dǎo)教師：

鄧子新201005上海交通大學(xué)博士后出站報(bào)告堿性?轉(zhuǎn)換策略背景簡(jiǎn)介：

搖瓶培養(yǎng)與發(fā)酵罐培養(yǎng)的一個(gè)重要差別實(shí)際上體現(xiàn)在碳、氮源的供應(yīng)和菌體產(chǎn)乙酸程度上，這也是的放大過(guò)程經(jīng)常出現(xiàn)問(wèn)題的地方。

乙酸和氨是大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的兩類(lèi)可解離的小分子產(chǎn)物。

許多報(bào)道認(rèn)為乙酸積累通常會(huì)抑制菌體生長(zhǎng)和外源蛋白表達(dá)，這種問(wèn)題在發(fā)酵罐上高密度培養(yǎng)菌體時(shí)最易出現(xiàn)。

另有報(bào)道認(rèn)為，發(fā)酵液中較高濃度的銨離子對(duì)某些重組蛋白的表達(dá)有利。

理論基礎(chǔ)：

乙酸和銨離子發(fā)揮作用同其未解離的分子即??腫雍蚇?分子的濃度緊密相的乙酸根和銨離子的濃度。

實(shí)驗(yàn)主要結(jié)果及其討論：

????生產(chǎn)重組蛋白方面。

是指在發(fā)酵過(guò)程?以內(nèi)的乙酸鈉所造成的培養(yǎng)基滲透壓不會(huì)明顯地抑制?????納?ぃ?幸種譜饔玫氖荋?分子；?乙酸鈉會(huì)嚴(yán)重地抑制菌體細(xì)胞膜還原性電子產(chǎn)生的強(qiáng)度。

?的乙酸鈉可以使該活性降低約?．?％，尤其是低?會(huì)加重這種副作用。

這種乙酸鈉的副作用可以通過(guò)提高培養(yǎng)基?來(lái)緩解。

上海交通大學(xué)博士后出站報(bào)告乙酸抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)的機(jī)理主要有兩種解釋?zhuān)环N即未解離形式的弱酸即??腫郵且恢紙馀劑lt;粒?梢宰雜衫┥⒔?赴?ぃ?傭?斐煽縋??的崩潰；另一種是胞內(nèi)?一陰離子的高度積累所造成的后果。

我們的數(shù)據(jù)顯示，在實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的大??高，但遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于根據(jù)銨離子電離平衡和自由擴(kuò)散進(jìn)出細(xì)胞膜所得到的理論值。

子也可能參與其中。

提高培養(yǎng)基的?，可以緩解高濃度的??????騈???訣??細(xì)胞膜的電子產(chǎn)生活性的抑制作用。

上海交通大學(xué)博士后出站報(bào)告??表達(dá)系統(tǒng)目前廣泛用于多種蛋白的生產(chǎn)。

、如用于各類(lèi)蛋白的實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的純化和研究，某些藥用蛋白和工具酶工業(yè)規(guī)模的生產(chǎn)，例如干擾素、集落刺激因子、人血清白蛋白以及尿激酶、脂肪酶等等。

它是直接表達(dá)外源蛋白極為有效的模式微生物之一。

??表達(dá)外源蛋白的過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)許多工程上的問(wèn)題，尤其是在進(jìn)外源蛋白表達(dá)所帶來(lái)的菌體代謝負(fù)荷主要表現(xiàn)在：

?菌體呼吸活性或菌體平板菌落發(fā)酵液的溶氧???在誘導(dǎo)時(shí)會(huì)急劇上升。

這種情形在表達(dá)某些蛋白時(shí)經(jīng)常遇到；?菌體的重要生理代謝指標(biāo)改變。

例如電子傳遞效率降低，胞內(nèi)能荷降低以及某些代謝中間物合成功能障礙，菌體的脅迫響應(yīng)基因被激活和相應(yīng)的蛋白表達(dá)；?菌體形態(tài)發(fā)生改變，例如由快速增殖時(shí)的串珠狀菌體連絲變成單個(gè)或二