高考生物總復習 考點1 微生物的實驗室培養(yǎng)(515考)新人教版

考點1微生物的實驗室培養(yǎng)(5年15考)(新課標全國Ⅱ卷、四川理綜、江蘇卷，北京卷、浙江、山東，天津)一、培養(yǎng)基1．概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)2．營養(yǎng)構成eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(1一般都含有水、、無機鹽、碳源、氮源,2還需滿足不同微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及O2的要求))3．培養(yǎng)基的種類及用途劃分標準培養(yǎng)基的種類特點用途物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運動、鑒定固體培養(yǎng)基微生物的分離與鑒定、活菌計數(shù)、菌種保藏化學成分天然培養(yǎng)基含化學成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學成分已知的化學物質(zhì)配成)分類、鑒定用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物(如在培養(yǎng)酵母菌和霉菌時，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；在培養(yǎng)金黃色葡萄球菌時，可在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽等)鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅—美藍培養(yǎng)基檢測飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)特別提醒自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)不同：①自養(yǎng)微生物所需的碳源、氮源來自含碳、含氮的無機物，而異養(yǎng)微生物需要的碳源、氮源來自含碳、含氮的有機物，因此可根據(jù)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型。②含氮無機物不但能給自養(yǎng)微生物提供氮源，也能作為能源物質(zhì)，提供能量，如NH3既作為硝化細菌的氮源也作為能源。二、無菌技術1．消毒eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(特點：使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死,物體表面或內(nèi)部的部分微生物不包括芽孢和孢子,常用方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學藥劑消毒法))2．滅菌eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(特點：指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外,所有微生物包括芽孢和孢子,常用方法：灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌))3．消毒和滅菌比較比較項目理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強烈全部微生物能 三、微生物的純化培養(yǎng)及菌種的保藏1．原理在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。2．制備固體培養(yǎng)基的流程eq\x(計算)→eq\x(稱量)→eq\x(溶化)→eq\x(滅菌)→eq\x(倒平板)3．純化大腸桿菌的方法常用的微生物接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(1)平板劃線法：是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。(如下圖示)(2)稀釋涂布平板法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。(如下圖所示)①系列稀釋操作(如下圖所示)②涂布平板操作(如下圖所示)(3)兩種純化細菌的方法的比較項目優(yōu)點缺點適用范圍平板劃線法可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離不能計數(shù)適用于好氧菌稀釋涂布平板法可以計數(shù)，可以觀察菌落特征吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延適用于厭氧菌和兼性厭氧菌4.培養(yǎng)接種后的培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)5．菌種保藏(1)臨時保藏eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(操作：采用固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后，放入4℃冰箱中保藏，以后每3～6個月，,轉(zhuǎn)移一次新的培養(yǎng)基,缺點：保存時間不長，菌種易被污染或,產(chǎn)生變異))(2)長期保存法：甘油管藏法，放在－20_℃下保存特別提醒(1)配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的注意事項①倒平板的適宜溫度是50℃②平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。(2)平板劃線操作的注意事項①第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)。②灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。③劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。④劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。微生物培養(yǎng)與分離的考查1．(·江蘇)某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是()。A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌B．轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進行劃線C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D．培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次解析本題考查微生物的分離和培養(yǎng)過程中的操作要求和培養(yǎng)條件等相關知識，意在考查考生的知識運用能力和實驗處理能力。培養(yǎng)微生物的過程中應先滅菌再倒平板，A錯誤；每一次劃線前都要進行接種環(huán)的灼燒滅菌，B正確；接種后的培養(yǎng)皿應在恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，光照會影響溫度等條件；培養(yǎng)過程中觀察間隔的時間一般不超過24h。答案B微生物實驗室培養(yǎng)的拓展應用2．(·新課標全國Ⅱ理綜)臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性?；卮鹣铝袉栴}：(1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用____________法或____________法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。(2)取該單菌落適當稀釋，用__________法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37℃(3)為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A____________；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B____________；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明____________________________；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的____________________________________________________。(4)根據(jù)上述實驗結果，為達到抗菌目的，最好選用抗生素__________。解析(1)在微生物的培養(yǎng)過程中，常用來分離微生物的方法是稀釋涂布平板法或平板劃線法。(2)為了使微生物在培養(yǎng)基上能夠均勻分布，一般用稀釋涂布平板法將微生物接種在培養(yǎng)基上。(3)在抗藥性檢驗過程中，如果在菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明此種抗生素可抑制該細菌；透明圈的大小表示此種抗生素抗菌效果的強弱。據(jù)此可判斷抗菌效果強弱依次是A、C、B；D的透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，說明該菌落對此種抗生素具有耐藥性。答案(1)平板劃線稀釋涂布(或涂布)平板(2)稀釋涂布平板(涂布)(3)敏感不敏感該致病菌對C的敏感性比對A的弱耐藥菌(4)A歸納比較1．培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制時應根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)pH要適宜：細菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需pH不同。2．培養(yǎng)基的營養(yǎng)構成(1)各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽；(2)不同培養(yǎng)基還要滿足不同微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)