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1/1dsc2在食管癌中的表達(dá)功能與分子調(diào)控機(jī)制的研究摘要迄今,作為一種常見的消化道惡性腫瘤,食管癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制在許多方面依然不甚清楚。

Desmocollin2(DSC2)是橋粒膠糖蛋白家族的成員之一,在正常上皮細(xì)胞間的粘附中發(fā)揮重要作用。

有研究報(bào)道,DSC2在結(jié)直腸癌等腫瘤組織中表達(dá)下降,推測會(huì)直接破壞細(xì)胞間的橋粒連接,有損組織結(jié)構(gòu)與功能的完整性。

關(guān)于食管癌中DSC2的表達(dá)、功能及其分子調(diào)控機(jī)制,至今未見研究報(bào)道。

本課題組在前期實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在食管癌細(xì)胞,敲降Fascin基因表達(dá),伴隨著癌細(xì)胞的移動(dòng)侵襲能力減弱與粘附能力增強(qiáng),DSC2的表達(dá)顯著上調(diào)。

提示DSC2在食管癌的發(fā)生發(fā)展中可能扮演著某種重要角色。

因此,有必要把該基因在食管癌中的表達(dá)、功能及其分子調(diào)控機(jī)制等重要科學(xué)問題研究清楚。

基于此,在本論文中,我們通過綜合運(yùn)用組織芯片、免疫組化、免疫熒光、Westernblotting、RT-PCR、RNA干擾和真核基因表達(dá)等系列實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段,就上述科學(xué)問題展開深入研究,結(jié)果詳見下述。

首先,通過RT-PCR、免疫組化、免疫印跡等實(shí)驗(yàn)技術(shù),檢測DSC2以及橋粒鈣粘素家族其它成員在食管癌組織中的表達(dá)情況。

結(jié)果發(fā)現(xiàn),①與配對(duì)的正常食管上皮組織相比,在食管癌組織中,DSC2mRNA表達(dá)明顯下調(diào),而DSC3mRNA表達(dá)無顯著差異;對(duì)DSC1,無論食管癌組織,還是正常食管上皮組織,表達(dá)水平均很低。

②與配對(duì)的正常食管上皮組織相比,在食管癌組織中,DSC2蛋白表達(dá)水平也顯著下調(diào),并表現(xiàn)出由胞膜異位到胞漿的特點(diǎn)。

統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示,DSC2蛋白表達(dá),與食管癌組織分化顯著正相關(guān)(Plt;0.05),與臨床分期顯著負(fù)相關(guān)(Plt;0.05),與食管癌患者的生存期顯著正相關(guān)。

提示DSC2表達(dá)下調(diào)可能在食管癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著某種重要作用,檢測DSC2表達(dá)可以警示食管癌患者的預(yù)后。

其次,通過正反兩種實(shí)驗(yàn)策略,探討了DSC2對(duì)食管癌細(xì)胞的分裂增殖與移動(dòng)能力的影響。

①實(shí)時(shí)定量RT-PCR和細(xì)胞免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同的食管癌細(xì)胞系DSC2的表達(dá)水平存在差異,SHEEC等食管癌細(xì)胞表達(dá)DSC2的水平較高,EC109和KYSE150等食管癌細(xì)胞表達(dá)DSC2的水平相對(duì)較低,因此,為后續(xù)研究DSC2功能,提供了良好的對(duì)比細(xì)胞模型。

②在EC109和KYSE150細(xì)胞,通過基因轉(zhuǎn)染建立穩(wěn)定高表達(dá)DSC2食管癌細(xì)胞株。

分裂增殖與移動(dòng)能力檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與轉(zhuǎn)染空載體的對(duì)照細(xì)胞相比,DSC2高表達(dá)的KYSE150細(xì)胞的移動(dòng)能力顯著降低,但分裂增殖能力未見明顯變化;而DSC2高表達(dá)的EC109細(xì)胞的移動(dòng)能力有所降低,但差異不

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