dsc2在食管癌中的表達(dá) 功能與分子調(diào)控機(jī)制的研究

1/1dsc2在食管癌中的表達(dá)功能與分子調(diào)控機(jī)制的研究摘要迄今，作為一種常見的消化道惡性腫瘤，食管癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制在許多方面依然不甚清楚。

Desmocollin2（DSC2）是橋粒膠糖蛋白家族的成員之一，在正常上皮細(xì)胞間的粘附中發(fā)揮重要作用。

有研究報(bào)道，DSC2在結(jié)直腸癌等腫瘤組織中表達(dá)下降，推測會(huì)直接破壞細(xì)胞間的橋粒連接，有損組織結(jié)構(gòu)與功能的完整性。

關(guān)于食管癌中DSC2的表達(dá)、功能及其分子調(diào)控機(jī)制，至今未見研究報(bào)道。

本課題組在前期實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在食管癌細(xì)胞，敲降Fascin基因表達(dá)，伴隨著癌細(xì)胞的移動(dòng)侵襲能力減弱與粘附能力增強(qiáng)，DSC2的表達(dá)顯著上調(diào)。

提示DSC2在食管癌的發(fā)生發(fā)展中可能扮演著某種重要角色。

因此，有必要把該基因在食管癌中的表達(dá)、功能及其分子調(diào)控機(jī)制等重要科學(xué)問題研究清楚。

基于此，在本論文中，我們通過綜合運(yùn)用組織芯片、免疫組化、免疫熒光、Westernblotting、RT-PCR、RNA干擾和真核基因表達(dá)等系列實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段，就上述科學(xué)問題展開深入研究，結(jié)果詳見下述。

首先，通過RT-PCR、免疫組化、免疫印跡等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢測DSC2以及橋粒鈣粘素家族其它成員在食管癌組織中的表達(dá)情況。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，①與配對(duì)的正常食管上皮組織相比，在食管癌組織中，DSC2mRNA表達(dá)明顯下調(diào)，而DSC3mRNA表達(dá)無顯著差異；對(duì)DSC1，無論食管癌組織，還是正常食管上皮組織，表達(dá)水平均很低。

②與配對(duì)的正常食管上皮組織相比，在食管癌組織中，DSC2蛋白表達(dá)水平也顯著下調(diào)，并表現(xiàn)出由胞膜異位到胞漿的特點(diǎn)。

統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，DSC2蛋白表達(dá)，與食管癌組織分化顯著正相關(guān)（Plt;0.05），與臨床分期顯著負(fù)相關(guān)（Plt;0.05），與食管癌患者的生存期顯著正相關(guān)。

提示DSC2表達(dá)下調(diào)可能在食管癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著某種重要作用，檢測DSC2表達(dá)可以警示食管癌患者的預(yù)后。

其次，通過正反兩種實(shí)驗(yàn)策略，探討了DSC2對(duì)食管癌細(xì)胞的分裂增殖與移動(dòng)能力的影響。

①實(shí)時(shí)定量RT-PCR和細(xì)胞免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同的食管癌細(xì)胞系DSC2的表達(dá)水平存在差異，SHEEC等食管癌細(xì)胞表達(dá)DSC2的水平較高，EC109和KYSE150等食管癌細(xì)胞表達(dá)DSC2的水平相對(duì)較低，因此，為后續(xù)研究DSC2功能，提供了良好的對(duì)比細(xì)胞模型。

②在EC109和KYSE150細(xì)胞，通過基因轉(zhuǎn)染建立穩(wěn)定高表達(dá)DSC2食管癌細(xì)胞株。

分裂增殖與移動(dòng)能力檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與轉(zhuǎn)染空載體的對(duì)照細(xì)胞相比，DSC2高表達(dá)的KYSE150細(xì)胞的移動(dòng)能力顯著降低，但分裂增殖能力未見明顯變化；而DSC2高表達(dá)的EC109細(xì)胞的移動(dòng)能力有所降低，但差異不