常見的幾種禽病毒病采樣技術(shù)

/常見的幾種禽病毒病采樣技術(shù)在防治畜禽疾病中，很多畜禽傳染病的臨床癥狀不明顯，單憑臨床經(jīng)驗(yàn)是難以做到確切診斷、準(zhǔn)確用藥，往往因此而貽誤了病情。為此，需要通過從病畜或尸體采取病料，進(jìn)一步做微生物學(xué)和血清學(xué)化驗(yàn)，查清病原，進(jìn)而有針對性地采取相應(yīng)的防治措施，以達(dá)到預(yù)防、控制和撲滅傳染病的目的，同時(shí)減少臨床工作的盲目性，提高獸醫(yī)人員的技術(shù)水平，保護(hù)養(yǎng)殖戶的利益。而病料采集、保存、送檢的方法是否正確，直接影響到檢驗(yàn)的結(jié)果和防治工作的開展，故采集檢測樣品是診斷檢測工作的重要內(nèi)容，另外采樣的時(shí)機(jī)是否適宜，樣品是否具有代表性，樣品處理、保存、運(yùn)送是否與時(shí)等，都會(huì)影響到檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。下面就如何正確地采集、保存、送檢病料等進(jìn)行歸納和整理，希望能夠?qū)鶎荧F醫(yī)和養(yǎng)殖戶提供一些借鑒。一、采集原則1，新鮮、具代表性，且足量：采集死禽樣本，夏天6小時(shí)之內(nèi)完成，冬天在24小時(shí)之內(nèi)完成；采集樣品的數(shù)量要滿足診斷檢測的需要，并留有余地，以備必要時(shí)復(fù)檢使用。2，減少對病料的污染：在做尸體剖檢時(shí)，應(yīng)將尸體浸泡在消毒劑溶液中，防止羽毛與皮屑飛揚(yáng)對病料造成的污染；病料采集時(shí)，對采集病料的器械與容器必須提前消毒，減少因器械或盛放病料的容器對病料的污染；尸體剖開腹腔時(shí)，第一時(shí)間采取病料，減少病料因暴露于空氣中而造成的污染。3，典型采樣：選取未經(jīng)藥物治療、癥狀最典型或病變最明顯的樣品，如有并發(fā)癥，還應(yīng)兼顧采樣。4，合理采樣：根據(jù)診斷檢測的要求，須嚴(yán)格按照規(guī)定采集各種足夠數(shù)量的樣品外，不同疫病的需檢樣品各異，應(yīng)按可能的疫病側(cè)重采樣。對未能確定為何種疫病的，應(yīng)全面采樣。5，安全采樣：既要保護(hù)采樣人員，以要防止病原外泄，還要防止樣品受到污染。6，迅速送檢：應(yīng)盡快送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測，延誤送檢時(shí)間，會(huì)影響到檢測質(zhì)量和結(jié)果的可靠性。二、病料的采集方法1，組織和實(shí)質(zhì)器官的采集：剖開腹腔后，必須注意腸管的完整。如需進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)，要以燒紅的手術(shù)刀片燙烙臟器表面，使用經(jīng)火焰滅菌的接種針插入燙烙的部位，提取少量的組織或液體，作涂片鏡檢或接種于培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)。2，液體病料的采集：采集血液、膽汁、膿腫液、滲出物等液體病料，使用滅菌吸管或注射器，經(jīng)燙烙部位吸取病變組織的液體，將病料注入滅菌的試管中，塞好棉塞送檢。3，全血的采集方法：用滅菌注射器自雞的心臟或翅靜脈采血2-5毫升，注入滅菌試管中。建議加入少量的抗凝劑（3.8%枸櫞酸鈉0.1-0.5毫升或檸檬酸鈉液，配制方法：葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.8g、檸檬酸0.055g、氯化鈉0.42g，加蒸餾水至100ml高壓滅菌10磅/10分鐘。）4，血清的采集方法：用滅菌注射器自禽的心臟或翅靜脈采血2毫升，注入滅菌的1.5ml離心管中擺成斜面，待血液凝固血清析出后，將血清吸出注入另一個(gè)滅菌試管中，備用。5，腸道與腸內(nèi)容物的采集方法：選擇病變明顯部位的腸道，將內(nèi)容物棄掉，用滅菌生理鹽水沖洗干凈，然后將病料放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖液中送檢。亦可將腸管切開，用滅菌生理鹽水沖洗干凈，然后用燒紅的手術(shù)刀片燙烙粘膜表面，將接種針插入粘膜層，取少量病料接種于培養(yǎng)基上。采集腸內(nèi)容物則需用燒紅的手術(shù)刀片燙烙腸道漿膜層，將接種針插入腸道內(nèi)，吸取少量腸內(nèi)容，放入試管中或?qū)в心c內(nèi)容的腸道兩端扎緊，去掉其它部分送檢。6，皮膚與羽毛的采集：皮膚要選病變明顯部分的邊緣，采取少許放入滅菌的試管中送檢；羽毛也要選病變明顯部分，用滅菌的刀片刮取羽毛與根部的皮屑少許，放入滅菌的試管中送檢；采集孵化室的絨毛需用滅菌鑷子采取出雛機(jī)出風(fēng)口的絨毛3-5克，放入滅菌的試管中送檢。三、各種病料的采集部位表1雞病毒性疾病主要采集的主要部位疾病名稱病原病料采集部位雞新城疫副粘病毒腦組織、喉頭、氣管、氣囊、肝、脾、肺禽流感A型流感病毒內(nèi)臟器官、氣管粘液、肺、泄殖腔拭子、血液傳染性法氏囊病雙RNA病毒法氏囊、內(nèi)臟器官、腸道粘液、泄殖腔拭子、血液傳染性支氣管炎病冠狀病毒氣管栓子、肺組織、腎、肝、脾、淋巴組織、輸卵管、氣管泄殖腔拭子傳染性喉氣管炎A型皰疹病毒氣管滲出物、氣管、肺病毒性關(guān)節(jié)炎禽呼腸孤病毒關(guān)節(jié)、腱鞘、脾、泄殖腔、氣管禽腦脊髓炎禽腦脊髓炎病毒腦、胰淋巴白血病禽白血病病毒血液、泄殖腔拭子、腫瘤組織馬立克氏病皰疹病毒血液、腫瘤組織網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒血液、腫瘤組織、脾雞傳染性貧血病雞傳染性貧血病毒肝、皮膚、脾、心臟、胸腺、肺、法氏囊、腎、骨髓、血液產(chǎn)蛋下降綜合征禽腺病毒肝、胰、氣管、肺、空腸、盲腸扁桃體、腸內(nèi)容、輸卵管、畸形蛋、變形卵泡、糞便、血液禽痘痘病毒病變組織、口、鼻、咽、喉、食道、氣管粘膜的結(jié)節(jié)鴨病毒性肝炎鴨肝炎病毒肝、脾、病變組織、血液鴨病毒性腸炎皰疹病毒科鴨瘟病毒肝、脾、腦、肺、腎、口腔分泌物、腸道、糞便、血液小鵝瘟鵝細(xì)小病毒內(nèi)臟器官、組織、腸管、糞便、血液四、病料的保存和處理1，采集的樣品應(yīng)一種樣品一個(gè)容器，立即密封，防止樣品損壞、污染和外泄等意外發(fā)生。也可以根據(jù)表1將幾種適合檢測同種病毒的病料合并于一個(gè)容器內(nèi)。2，裝樣品的容器應(yīng)貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽要防止因凍結(jié)而脫落，標(biāo)簽標(biāo)明采集的時(shí)間、地點(diǎn)、號碼和樣品名稱，并附上發(fā)病、死亡等相關(guān)資料，盡快送實(shí)驗(yàn)室。3，根據(jù)樣品的性狀檢驗(yàn)要求的不同，作暫時(shí)的冷藏、冷凍或其它處理。4，病料采集后，應(yīng)先存放于冰箱中1-2小時(shí)后，再做微生物檢驗(yàn)。五、病料的送檢要點(diǎn)1，在沒有條件的情況下，可以采取運(yùn)送整雞、鵝或鴨尸體，運(yùn)送時(shí)用浸透消毒液的布包好，裝入塑料袋中運(yùn)送；如果需要長途運(yùn)輸，整個(gè)尸體放入冰箱冰凍過夜。2，裝在容器中的病料應(yīng)先密封，然后裝入冰桶中運(yùn)送，放入冰袋運(yùn)送。3，運(yùn)送的病料必須標(biāo)明：送檢單位、地址、送檢病料的品種、性別、日齡、種類、數(shù)量、死亡日期、送檢日期、檢驗(yàn)?zāi)康?、送檢者姓名，并附臨床病例摘要（發(fā)病時(shí)間、死亡情況、臨床癥狀、產(chǎn)蛋與飲食情況、免疫和用藥情況等）。4，運(yùn)送病料時(shí)一定注意病料要低溫保存。供病毒學(xué)檢驗(yàn)的樣品，數(shù)小時(shí)內(nèi)要