人表皮生長(zhǎng)因子受體2（Her2）ELISA試劑盒說(shuō)明書

第第頁(yè)人表皮生長(zhǎng)因子受體2（Her2）ELISA試劑盒說(shuō)明書人表皮生長(zhǎng)因子受體2（Her2）ELISA試劑盒說(shuō)明書本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人表皮生長(zhǎng)因子受體2（Her2）的含量試驗(yàn)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人表皮生長(zhǎng)因子受體2（Her2）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人表皮生長(zhǎng)因子受體2（Her2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清：將收集于血清分別管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?0℃或80℃保管，但應(yīng)躲避反復(fù)凍融。2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑手記標(biāo)本，并將標(biāo)本在手記后的30分鐘內(nèi)于28℃1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?0℃或80℃保管，但應(yīng)躲避反復(fù)凍融。3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS（0.01M,pH=7.4）沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，譬如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可依據(jù)試驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。介紹在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲碎裂，或反復(fù)凍融。最終將勻漿液于5000×g離心5～10分鐘，取上清檢測(cè)。4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?0℃或80℃保管，但應(yīng)躲避反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最終檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。需要而未供應(yīng)的試劑和器材1.酶標(biāo)儀（450nm）2.高精度加樣器及槍頭：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒溫箱4.蒸餾水或去離子水試劑盒構(gòu)成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無(wú)樣本稀釋液6mL3mL無(wú)檢測(cè)抗體HRP10mL5mL無(wú)20×洗滌緩沖液25mL15mL按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無(wú)底物B6mL3mL無(wú)停止液6mL3mL無(wú)封板膜2張2張無(wú)說(shuō)明書1份1份無(wú)自封袋1個(gè)1個(gè)無(wú)備注：1.標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：16、8、4、2、1、0.5ng/mL2.經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒供應(yīng)的檢測(cè)范圍內(nèi)，試驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超出最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)。注意事項(xiàng)1.嚴(yán)格依照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。全部試劑都必需在使用前實(shí)現(xiàn)室溫2025℃。使用后趕忙冷藏保管試劑。2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。3.除掉板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。4.底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。5.躲避試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。6.在儲(chǔ)存和溫育時(shí)躲避強(qiáng)光直接照射。7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝集在冷板條上。8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的猛烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。9.不能使用過(guò)期產(chǎn)品。10.假如可能傳播疾病，全部的樣品都應(yīng)管理好，依照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。試劑準(zhǔn)備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入停止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定各孔的OD值。試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。試劑盒性