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15I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定相比，除了結(jié)構(gòu)調(diào)整和編輯性改動(dòng)外，主要技術(shù)變化1綿羊肺腺瘤病毒雙抗體夾心ELISA檢測(cè)技術(shù)本文件規(guī)定綿羊肺腺瘤病毒雙抗體夾心ELISA檢測(cè)技術(shù)的試劑、材料與設(shè)備、樣品前處理、操作方GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范跨膜蛋白胞質(zhì)尾區(qū)transmembraneproteincytoplasmicta2HRP:辣根過(guò)氧化物酶(Hydrogen-peroxidepH:酸堿度(PondusHydrogenii)TMB:3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺(3,3′,5,5′-Tetraethylbenzidine)6.34℃、-20℃冰箱。6.596孔酶標(biāo)板。37.1動(dòng)物血液按照NY/T541中要求進(jìn)行采集和保存。取待檢羊新鮮抗凝血5mL,3000r/min離心15min,棄上清，按1:5的比例向細(xì)胞沉淀中加入4℃冰箱預(yù)冷的紅細(xì)胞裂解液混勻，4℃靜置10min,期間上下顛倒混勻5次，1000r/min離心5min,離心棄去上層紅色液體，收集沉淀部分。如果沉淀還有紅色，可重新加入紅細(xì)胞裂解液，重復(fù)1遍；向沉淀中加入樣品稀釋液200μL,反復(fù)凍融或室溫靜置1h使細(xì)胞破裂，期間在旋渦振蕩器上振蕩3～5次充分混合；1000r/min離心5min,取上清液進(jìn)7.2鼻拭子按照NY/T541中要求進(jìn)行采集和保存。將采集的羊鼻拭子放到含有1mL青霉素-鏈霉素PBS溶液(2000IU/mL)的10mL離心管(EP)中，低溫運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室或者-70℃保存、待檢。將鼻拭子樣品自然解凍之后，通過(guò)渦旋振蕩器振蕩3～5次，在無(wú)菌環(huán)境中，將EP管內(nèi)液體轉(zhuǎn)移到2mLEP管中，4℃條件下12000r/min離心3min,吸取上清液進(jìn)行檢測(cè)。8操作方法8.1包被96孔酶標(biāo)板每孔加100μL包被抗體(按照附錄A.4),48.3封閉8.4洗滌8.5加待檢樣品45試劑配制A.1紅細(xì)胞裂解液A.2

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