義翹講堂《納米抗體開發(fā)策略及案例分享》

納米抗體開發(fā)策略及案例分享北京義翹神州科技股份有限公司義翹神州CONTENT納米抗體簡介1納米抗體開發(fā)流程2義翹神州納米抗體開發(fā)案例分享3納米抗體人源化改造案例分享4納米抗體簡介01義翹神州義翹神州首次發(fā)現重鏈抗體1993200120072016201820212022Ablynx成立納米抗體首次進入臨床KN-035進入臨床第一個納米抗體藥物在歐盟獲批KN-035中國獲批上市首款納米抗體CAR-T細胞獲得FDA批準上市；首款雙抗納米抗體藥物在日本獲批CaplacizumabKN-035Ozoralizumabcilta-cel納米抗體藥物開發(fā)代表性歷程義翹神州150kD80kD15kD常規(guī)抗體駱駝納米抗體鯊魚納米抗體1.Mini-antibodiesdiscoveredinsharksandcamelscouldleadtodrugsforcancerandotherdiseases2.Int.J.Mol.Sci.2022,23,50093.

(1994)JMolBiol

243:767-7814.(1996)NatStructBiol

3:803-8115.

(2004)Science

305:1770-1773納米抗體特征和優(yōu)勢義翹神州臨床診斷、分子成像、藥物遞送靶向載體單抗、雙抗、多抗治療性抗體CAR-T、CAR-NK細胞治療VHHVHHVHHVHHVHHVHHVHH納米抗體應用前景義翹神州DOI：10.3867/j.issn.1000-3002.2021.09.001DOI：10.3389/fimmu.2021.838082納米抗體發(fā)展趨勢多功能納米抗體在治療領域的發(fā)展趨勢納米抗體文獻每年發(fā)文量全球納米藥物市場規(guī)模預測納米抗體開發(fā)流程02義翹神州義翹神州VHHhingeCH2VHHVHHHisgIIIVHHVHH

②③④⑤PhageLibraryWashingTargetBindingPhageElutionPhageAmplification①羊駝免疫取外周血分離PBMC提取RNA一次PCR巢式PCR噬質粒納米抗體制備實驗流程VHHVHH義翹神州羊駝免疫流程免疫劑量0.5-1mg/只次免疫間隔2~3周免疫次數3~6次自三免起，血清效價檢測效價合格PBMC建庫效價不合格追加免疫羊駝的選擇：免疫背景空白、健康；免疫方式：可選擇同時免疫1-3種抗原；免疫部位：皮下、皮內、淋巴結附近；免疫效價：>1:10萬；義翹神州28S18S5S1000bp700bp400bpRNA提取第一輪PCR第二輪PCR插入率驗證原庫CDR3多樣性納米抗體噬菌體文庫構建義翹神州淘洗輪數Input(pfu)Output(pfu)Recovery(Output/Input)富集度

1st2.10E+124.23E+052.01E-07-

2nd1.85E+129.70E+065.24E-0626.09

3rd1.20E+123.55E+072.96E-055.654th1.07E+121.78E+071.66E-050.56

4輪篩選后的噬菌體富集程度噬菌體庫ELISA檢測Absorbance(OD450nm)納米抗體噬菌體文庫淘洗義翹神州

Absorbance(OD450nm)噬菌體單克隆ELISA特異結合檢測噬菌體單克隆ELISA競爭檢測納米抗體噬菌體單克隆鑒定競爭抑制率%受體/抗原摩爾比=2/1受體/抗原摩爾比=5/1受體/抗原摩爾比=20/1義翹神州

義翹神州噬菌體展示平臺篩選方法多樣：固相、液相、細胞篩選；篩選策略靈活：差減、競爭、交叉、夾心；克隆上清介入評價：流式、ELISA、競爭。3000+株單抗產品；支持多種應用：FACS、WB、IHC、IF抗體；保證高親和力、特異性抗體。天然庫和免疫庫，多種免疫方案；多種屬，小鼠、兔子、羊駝、雞、人；免疫庫的庫容高達109以上，序列插入正確率高達100%。建庫淘篩產品服務豐富的CRO服務經驗：500+服務；5~6周完成建庫、篩選和分子構建；提供多種抗體服務：抗獨特型抗體、中和抗體、納米抗體、抗體親和力成熟。納米抗體開發(fā)案例分享03義翹神州義翹神州

Ag-1Ag-2Ag-3Ag-4Ag-5Ag-6DilutionAg-1Ag-2Ag-3Ag-4Ag-5Ag-6庫容交付1:1.0E+050.20.61.71.81.01.92.7*10910unique/Ag與Ag-1特異結合與Ag-2特異結合與Ag-3特異結合與Ag-4特異結合與Ag-5特異結合與Ag-6特異結合案例1-多種抗原共免疫的特異性納米抗體篩選義翹神州

案例2-TROP2納米抗體篩選與HUVEC結合與細胞系Colo205結合流式內吞檢測內吞效率（%）義翹神州

案例2-TROP2納米抗體篩選0h1h對照抗體11h對照抗體20h0h1h對照抗體3Nh0410h1hNh0630h1hNh0640h1hSampleIDKD(M)Kon(1/MS)Koff(1/S)對照抗體11.95E-082.59E+055.06E-03對照抗體15.01E-102.60E+051.30E-04對照抗體31.29E-072.16E+042.78E-03TROP2-N,h0411.83E-081.49E+052.72E-03TROP2-N,h0637.61E-095.49E+054.17E-03TROP-N,h0647.24E-096.30E+054.56E-03對照抗體1對照抗體2對照抗體3Nh041Nh063Nh064CancerRes.2011March15;71(6):2250–2259免疫熒光內吞檢測親和力檢測SampleIDIC50（ug/mL）EC50（ug/mL）對照抗體10.144260.38對照抗體20.14190.33PD-L1-Nh3940.083440.23PD-L1-Nh4840.107230.51SampleIDKD(M)Kon(1/MS)Koff(1/S)對照抗體16.60E-096.96E+044.59E-04對照抗體26.37E-101.82E+051.16E-04PD-L1-Nh3941.44E-091.01E+051.45E-04PD-L1-Nh4843.42E-091.75E+055.98E-04案例3-PD-L1納米抗體開發(fā)對照抗體1對照抗體2Nh394Nh484義翹神州親和力檢測阻斷活性

細胞活性納米抗體人源化改造案例分享04義翹神州義翹神州納米抗體結構特點DOI：10.1146/annurev-biochem-063011-092449義翹神州IDEC50（nM)NetOD450Nb-WT998.21.8799hNb-1798.11.9205hNb-2930.62.4716hNb-3433.42.0546hNb-4522.12.2649hNb-5210.62.3138hNb-6683.62.5368納米抗體人源化案例-結合檢測義翹神州IDKon(1/MS)Koff(1/S)KD(M)人源化程度Nb-WT1.327E+051.379E-031.04E-08—hNb-11.292E+051.072E-038.3E-0993.2%hNb-20.781E+057.381E-049.45E-0995%hNb-31.373E+058.311E-046.051E-0995.8%hNb-41.347E+057.336E-045.448E-0995%hNb-52.139E+051.126E-035.266E-0995%hNb-62.078E+059.535E-044.589E-0995.8%Nb-WThNb-1hNb-2hNb-3hNb-4hNb-5hNb-6納米抗體人源化案例–親和力檢測關于“北京義翹神州”堅持自主研發(fā)生產打造中國生命科學研究“一站式”試劑與服務支撐平臺人才與設施榮譽資質設施：---25,000+平米研發(fā)中心

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