規(guī)?；i場(chǎng)非洲豬瘟環(huán)境樣品監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范

1規(guī)?；i場(chǎng)非洲豬瘟環(huán)境樣品監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了規(guī)模化豬場(chǎng)非洲豬瘟環(huán)境監(jiān)測(cè)樣品采集的術(shù)語與定義、樣品采集方法、樣品采集要求、檢測(cè)方法、處置方案、數(shù)據(jù)的分析整理與記錄留檔。本文件適用于規(guī)?；i場(chǎng)非洲豬瘟環(huán)境樣品監(jiān)測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T17824.1規(guī)模豬場(chǎng)建設(shè)GB/T18648非洲豬瘟診斷技術(shù)GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求NY/T4319-2023洗消中心建設(shè)規(guī)范NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范NY/T1948獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全要求通則NY/T2074無規(guī)定動(dòng)物疫病區(qū)高致病性禽流感監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范NY/T4034規(guī)?；i場(chǎng)生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估規(guī)范3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1監(jiān)測(cè)Surveillance通過系統(tǒng)持續(xù)地收集、整理和分析動(dòng)物衛(wèi)生相關(guān)數(shù)據(jù)和信息，了解規(guī)定動(dòng)物疫病狀況、發(fā)展趨勢(shì)，并為相關(guān)部門采取動(dòng)物衛(wèi)生措施提供依據(jù)。[來源：NY/T2074-2011]3.2環(huán)境樣品EnvironmentalSample取自生豬養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部及場(chǎng)區(qū)外1公里范圍內(nèi)的環(huán)境，擬通過持續(xù)性檢測(cè)反映環(huán)境中病毒污染情況的非動(dòng)物源性樣品。3.3規(guī)?；i場(chǎng)IntensiveSwineFarm采用現(xiàn)代養(yǎng)殖技術(shù)與設(shè)施設(shè)備，實(shí)行批次化、全進(jìn)全出生產(chǎn)工藝，存欄基礎(chǔ)母豬100頭以上或年出欄商品豬500頭以上的自繁自養(yǎng)場(chǎng)、專業(yè)母豬場(chǎng)、專業(yè)育肥豬場(chǎng)[來源：GB/T17824.1規(guī)模豬場(chǎng)建設(shè)]。3.4預(yù)處理中心PreprocessingCenter2對(duì)進(jìn)出畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)的人員、物料及食材進(jìn)行集中清洗、消毒的場(chǎng)所。3.5洗消中心DecontaminationCenter對(duì)進(jìn)出畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)、飼料加工廠、屠宰加工廠及無害化處理廠的車輛及人員進(jìn)行集中清洗、消毒的場(chǎng)所[來源：NY/T4319-2023洗消中心建設(shè)規(guī)范]。4環(huán)境樣品監(jiān)測(cè)的目的通過連續(xù)性、科學(xué)性的環(huán)境樣品監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)生物安全漏洞，達(dá)到規(guī)避疫情風(fēng)險(xiǎn)的作用。5環(huán)境樣品的采集處理與檢測(cè)方法5.1采樣前準(zhǔn)備5.1.1人員準(zhǔn)備采樣人員經(jīng)洗手消毒，穿戴好一次性手套、防護(hù)服、口罩、鞋套，攜帶采樣所需物品。5.1.2物品準(zhǔn)備采樣拭子、裝有PBS的離心管、商品化的環(huán)境采樣紗布、記號(hào)筆、剪刀、鑷子、75%酒精棉、密封袋、樣品箱、冰袋等，可根據(jù)實(shí)際需要增減采樣物品。5.2豬場(chǎng)環(huán)境監(jiān)測(cè)樣品采集5.2.1環(huán)境樣品的采集原則生產(chǎn)工作中高頻率、易污染的接觸點(diǎn)或區(qū)域、不易清洗或消毒的點(diǎn)或區(qū)域等高風(fēng)險(xiǎn)位點(diǎn)是環(huán)境監(jiān)測(cè)的重點(diǎn)采樣對(duì)象。5.2.2環(huán)境監(jiān)測(cè)樣品采集方法根據(jù)不同的采樣位置、采樣對(duì)象及空間限制等問題選擇適合的采樣方式：a)紗布采樣法：戴一次性的PE手套，取含有樣品保護(hù)液的專用環(huán)境采樣紗布，用生理鹽水完全浸濕的紗布，在物體表面涂抹3～5次后，將紗布中的水分?jǐn)D入含有1～2ml保護(hù)劑的離心管中；b)拭子采樣法：戴一次性的PE手套，用生理鹽水將無菌采樣拭子頭完全浸濕，在物體表面涂抹3～5次后，將拭子頭折入含有1～2ml的滅菌PBS的離心管中。5.2.3豬場(chǎng)外環(huán)境監(jiān)測(cè)樣品采集豬場(chǎng)外環(huán)境監(jiān)測(cè)樣品采集按照表1執(zhí)行。3表1豬場(chǎng)外環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測(cè)樣品采集份數(shù)及采樣頻率份份份5.2.4豬場(chǎng)內(nèi)部環(huán)境監(jiān)測(cè)樣品采集豬場(chǎng)內(nèi)部環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測(cè)樣品采集按照表2執(zhí)行。4表2豬場(chǎng)內(nèi)部環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測(cè)樣品采集份數(shù)及采樣頻率5.2.5豬舍內(nèi)環(huán)境監(jiān)測(cè)樣品采集豬舍內(nèi)部環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測(cè)樣品采集按照表3執(zhí)行。表3豬場(chǎng)內(nèi)部環(huán)境流調(diào)排查監(jiān)測(cè)樣品采集份數(shù)及采樣頻率55.2.6人車物進(jìn)場(chǎng)采樣監(jiān)測(cè)樣品采集人、車、物進(jìn)場(chǎng)采樣監(jiān)測(cè)樣品采集按照表4執(zhí)行。表4人車物進(jìn)場(chǎng)采樣監(jiān)測(cè)樣品采集份數(shù)及采樣頻率測(cè)5.3樣品處理、保存與運(yùn)輸樣品處理、保存及運(yùn)輸，應(yīng)符合NY/T541中的規(guī)定。5.4檢測(cè)方法按GB/T18648中的非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法檢測(cè)非洲豬瘟病毒核酸。陽性對(duì)照的FAM通道Ct值小于等于30，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，呈典型的S型曲線；陰性提取對(duì)照及無模板對(duì)照FAM通道均無Ct值，無明顯指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期判定為實(shí)驗(yàn)成立。否則實(shí)驗(yàn)不成立，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。符合15中的條件，被檢樣品Ct值≤45且出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，則判為ASFV核酸陽性；當(dāng)無Ct值或Ct值≥45，則判為ASFV核酸陰性。6數(shù)據(jù)收集整理分析反饋6對(duì)5.2.3—5.2.6中規(guī)定頻率進(jìn)行監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)應(yīng)按周或按月進(jìn)行收集整理，及時(shí)發(fā)現(xiàn)生物安全風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，規(guī)避疫情發(fā)生，對(duì)發(fā)現(xiàn)異常監(jiān)測(cè)情況應(yīng)及時(shí)上報(bào)相關(guān)單位。同時(shí)應(yīng)按照NY/T4034的規(guī)定，定期對(duì)本場(chǎng)生物安全現(xiàn)狀進(jìn)行評(píng)估。7廢棄物處理按照本文件采樣方案檢測(cè)樣品中如非洲豬瘟病毒核酸出現(xiàn)陽性，及時(shí)上報(bào)相關(guān)單位，同時(shí)按照國(guó)家現(xiàn)行非洲豬瘟疫情處置方案處理。采樣中應(yīng)做好場(chǎng)地、物品、操作人員防護(hù)用品等消毒或無害化處理。廢棄物處置應(yīng)符合GB19489和NY/T1948中的規(guī)定。陽性樣品及檢測(cè)余樣均按GB19489要求做無害化處理。8記錄留檔檔案應(yīng)包括采樣記錄表、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)原始記錄表、檢測(cè)報(bào)告、樣品處置記錄，其中采樣記錄表中應(yīng)包含