藥物分析課件芳酸及其酯類藥物的分析

藥物分析課件芳酸及其酯類藥物的分析

一、水揚酸類

(一)典型藥物結(jié)構(gòu)第一節(jié)典型藥物分類與理化性質(zhì)水楊酸(salycylicacid)阿司匹林(aspirin)

對氨基水楊酸鈉(sodiumaminosalicylate)雙水楊酯(salsalate)貝諾酯(benorilate)1、酸性SA(PKa2、95)、ASA(PKa3、49)、雙水楊酯均有酸性。2、溶解性:均為固體,有一定溶點。除鈉鹽溶于水,其余不溶。3、UV和IR光譜特性:分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。4、芳伯氨基和酚羥基特性:5、水解特性:ASA、雙水楊酯及其制劑應檢查水楊酸,對氨基水楊酸鈉和貝諾酯檢查間氨基酚和對氨基酚。(二)主要理化性質(zhì)

(一)典型藥物結(jié)構(gòu)苯甲酸及其鈉鹽(benzoicacid)二、苯甲酸類羥苯乙酯(ethylparoben)丙磺舒(probenecid)甲芬那酸(mefenamicacid)12大家應該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流(二)主要理化性質(zhì)

1、溶解性:均為固體,有一定溶點。除鈉鹽溶于水,其余不溶。2、UV和IR光譜特性:分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。3、具有酚羥基特性:4、分解反應特性:苯甲酸鈉分解為苯甲酸;丙磺舒分解為SO25、酸性:苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游離得羧基,可用NaOH直接滴定測定其含量。三、其她芳酸類

(一)典型藥物結(jié)構(gòu)氯貝丁酯(clofibrate)布洛芬(ibuprofen)

(二)主要理化性質(zhì)

1、溶解性:水中不溶,有機溶劑溶解,氯貝丁酯為液體;布洛芬為固體,有一定熔點。2、UV和IR特征吸收光譜:基于分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán)和特征基團。返回

一、與三氯化鐵反應

含有酚羥基藥物可與FeCl3反應;能與FeCl3反應不一定含酚羥基、第二節(jié)鑒別試驗Ar-OH+FeCl3紫堇色鐵配位化合物pH4~61、直接反應SA在中性或弱酸性條件下,與FeCl3生成紫堇色配位化合物赭色苯甲酸（中性或堿性水溶液）+FeCl3丙磺舒與NaOH成鈉鹽后,在pH5、0~6、0中與FeCl3生成米黃色布洛芬與高氯酸羥胺,N,N’-雙環(huán)基己羧二亞胺及高氯酸鐵反應,即顯紫色[JP(14)方法]?；诜肿又?COOH得結(jié)構(gòu)。2、水解或分解后與三氯化鐵反應ASA水解成SA后與FeCl3

反應,成紫堇色二、重氮化-偶合反應凡就是分子結(jié)構(gòu)中含有芳伯氨基或潛在芳伯氨基得藥物均可反應。

1、直接反應對氨基水楊酸鈉2、水解后反應貝諾酯具有潛在芳伯氨基3、甲芬那酸與對-硝基苯重氮鹽在NaOH介質(zhì)中偶合產(chǎn)生橙紅色。+K2Cr2O7

深藍色棕綠色甲芬那酸+H2SO4

黃色綠色熒光[JP(14)△三、氧化反應

1、ASA酸水解生成SA和CH3COOH:SA得mp為156℃～161℃。2、雙水楊酯水解生成SA:SA得mp為158℃。3、氯貝丁酯堿水解后與鹽酸羥胺生成異羥肟酸鹽,在弱酸條件下再與三氯化鐵反應生成紫色得異羥肟酸鐵。四、水解反應

1、苯甲酸鹽加熱分解生成苯甲酸升華物,可用于鑒別。2、丙磺舒與NaOH熔融分解成Na2SO3,經(jīng)硝酸氧化成Na2SO4。3、丙磺舒加熱分解,生成SO2氣體,有臭味五、分解產(chǎn)物反應1、測定λmax;λmin。

例如:布洛芬用0、4%NaOH溶液制備0、25mg/ml;λmax;265nm,273nm;λmin。245nm,271nm。2、在λmax處測定一定濃度供試液得吸收度A。

例如:羥苯乙酯,5μg/mlλmax=295nm;A=0、483、在λmax處測定供試液得百分吸收系數(shù)。例如:貝諾酯在λmax=240nm;E1%1cm=730~760

六、紫外吸收光譜法

4、在規(guī)定得波長測定吸收度比值(即雙波長吸收度比值法)例如:對氨基水楊酸鈉10μg/ml;A265/A299=1、56~1、56

再例如:甲芬那酸14μg/ml;A278~280/A348~352=1、15~1、30

七、紅外吸收光譜法水楊酸得紅外吸收圖譜3700~2900cm-1

N-H、

O-H1660cm-1

C=O1610,15701480,1440

C=C775cm-1

Ar-H返回3700~2900cm-1

N-H、

O-H1640cm-1

N-H1580cm-11500cm-1

C=C1300cm-1

C-N1188cm-1

C-O對氨基水楊酸鈉得紅外吸收圖譜第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、ASA中特殊雜質(zhì)得檢查

1、溶液得澄清度主要檢查Na2CO3中不溶物,有苯酚;醋酸苯酯;水楊酸苯酯;乙酰水楊酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶液應澄清。2、游離水楊酸檢查利用SA可與FeCl3呈色,用比色法檢查。3、易炭化物檢查主要檢查ASA中能被硫酸炭化顯色得低分子有機雜質(zhì)。采用與標準比色液比色得方法檢查。

主要檢查成品藥物中可能殘留得間氨基酚。間氨基酚易氧化呈色,而且有毒性,因此要嚴格控制。雙向滴定法:利用間氨基酚溶于乙醚,取3、0g樣品用乙醚提取0、02mol/LHCl測定方法滴定V＜0、3ml。HPLC法:采用內(nèi)標法,以磺胺作內(nèi)標(USP)二、對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)得檢查三、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)得檢查BP收載得方法,由于雜質(zhì)得結(jié)構(gòu)不清,故采用TLC法中得供試品自身對照法:固定相:GF254C18化學鍵合硅膠展開劑:甲醇-水-冰醋酸反相TLC法

甲芬那酸就是以鄰-氯苯甲酸和2,3-二甲基苯胺在Cu得催化下縮合而成,因此成品藥物中要檢查銅鹽及有關(guān)物質(zhì)。分光光度法:利用Cu2+與Na-DDC呈色后測定A1、銅鹽檢查法原子吸收分光光度法:BP(2000)2、有關(guān)物質(zhì)得檢查主要檢查得就是酰胺、二甲基苯胺和鄰氯苯甲酸各國藥典均采用TLC法中得自身高低濃度對照法。四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)得檢查五、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)得檢查

主要檢查成品藥物中殘留得對氯酚原料和揮發(fā)性雜質(zhì)GC-FID法HPLC法:以對-羥乙基酚作內(nèi)標,用正相HPLC2、揮發(fā)性雜質(zhì)得檢查方法GC法1、對氯酚檢查返回

一、酸堿滴定法(一)直接滴定法基于本類藥物-COOH;可用堿直接滴定,如ASA得含量測定,其原理如下:第四節(jié)

含量測定1、原理:2、條件:在中性乙醇中,以酚酞作指示劑;摩爾比為1:1。3、應用:多國藥典用于雙水楊酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬測定;USP和BP還用于甲芬那酸得測定。(二)水解后剩余滴定法

1、ASA含量測定原理:條件:水溶液

具體試驗:I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相當于ASA消耗

硫酸得ml數(shù)ASA%=(Vo–V)×F×T/W×100%2、羥苯乙酯得含量測定(三)兩步滴定法

1、ASA片得含量測定第一步為中和ASA+NaOHASA-Na+H2O水解產(chǎn)物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性穩(wěn)定劑+NaOH中性鹽第二步為水解與測定2、氯貝丁酯含量測定

第一步:中和酸性雜質(zhì)第二步:水解與測定

二、亞硝酸鈉滴定法對氨基水楊酸鈉有芳伯氨基,在HCl中與NaNO2發(fā)生重氮化反應Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O因此可用亞硝酸鈉滴定法測定其含量,此法在下章重點討論。三、雙相滴定法

就是指在水相和有機相中得滴定。如苯甲酸鈉得含量測定:生成得苯甲酸不溶于水,終點pH突躍不明顯,不易觀察。苯甲酸在乙醚中易溶,在水相中加入乙醚將滴定中產(chǎn)生得苯甲酸萃取入醚層。因此用雙相滴定可使反應完全終點明顯。(一)直接紫外分光光度法丙磺舒片得測定:Ch、P(2000)在HCl中,采用百分吸收系數(shù)法。

BP(1998)再鹽酸-乙醇,采用百分吸收系數(shù)法、

USP(24)用氯仿提取后,采用對照品比較法。四、紫外分光光度法(二)離子交換-紫外分光光度法氯貝丁酯及其制劑Ch、P(2000)采用酸堿滴定法;當含有酸性雜質(zhì)對氯酚時,可采用強堿性陰離子交換樹脂吸附酸性雜質(zhì)后,在甲醇溶液中,226nm波長處,采用對照品比較法。具體計算:W×1000×1/100×1/100=Cu(μg/ml)Au/As=Cu/CCu=C(Au/As)W(mg)=10×Cu=10×C(Au/As)(三)柱分配色譜-紫外分光光度法USP(24)采用此法同時測定ASA膠囊中ASA和SA。

1、SA得限量測定色譜柱得制備;對照品溶液得制備;供試品溶液得制備。供試品液:CHCl3液洗脫液1:CHCl3洗脫液2:HAC-

乙醚硅藻土,FeCl3-尿素玻璃棉硅藻土,Na2CO3供試品液:CHCl3-HCl液洗脫液1:HAC-CHCl3

(1:10)10ml洗脫液2:HAC-CHCl3(1:100)85ml

1-雜質(zhì)先洗脫2-SA后洗脫

max=306nmAu＜As1-雜質(zhì)先洗脫2-ASA后洗脫

max=280nmASA(mg)=C(Au/As)2、ASA得含量測定色譜柱得制備;對照品溶液得制備;供試品溶液得制備。

Ch、P(2000)ASA得膠囊劑得含量測定采用此法。

USP(24)ASA片、對氨基水楊酸鈉、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制劑,采用此法。五、HPLC法(一)ASA栓劑得含量測定色譜條件:色譜柱ODSC18;流動相為甲醇:0、1%二乙胺:HAC(40:60:4);檢測波長280nm;內(nèi)標物為咖啡因。系統(tǒng)適用性試驗:n＞2000;ASA與SA與內(nèi)標物得R＞1、5具體計算:Cx=Rx/RR×CRW(g)×1/50×2/50=CxW測=1250×Cx標示量%=W測/W×W平/標示量×100%

=Cx×1250×W平/W×標示量×100%色譜條件:色譜柱苯基硅膠柱;流動相為NaH2PO3

0、1%HAC液-0、1%HAC乙腈液(50:50);檢測波長254nm。系統(tǒng)適用性試驗:n＞3900;T＞2、3;重復性RSD＜1、5%

具體計算:(二)丙磺舒原料得含量測定W×1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As×C

供試品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As)返回一、血清中ASA和SA濃度得HPLC法

色譜條件:色譜柱為ODS-C18(150mm×4、6mm,5μm)

流動相為甲醇-水-正丁醇(30:20:1)檢測波長為237nm;內(nèi)標物為苯甲酸。血清樣品預處理血清100μl+HClO450μl+不同濃度ASA和SA+內(nèi)標液渦旋混合2min離心5min取上清液20μl進樣。

第五節(jié)

體內(nèi)藥物分析回歸方程:以峰高比(H標/H內(nèi))對濃度回歸ASA得回歸方程:Y=5、8×10-3+5、29×10-2Xr=0、9996SA得回歸方程:Y=6、0×10-3+8、33×10-2Xr=0、9981ASA和SA得線性范圍分別為:1～20μg/ml;2～30μg/ml回收率:空白血清+五種不同濃度測定,ASA為96、0%～106、0%;SA為92、0%～119、5%;(五種不同濃度均應在線性范圍內(nèi))色譜條件:色譜柱為LiChrospher100RP(125mm×4mm,5μm)

流動相為25%乙腈溶液-醋酸緩沖溶液梯度洗脫。檢測波長為254nm;內(nèi)標物為依她尼酸。尿樣品預處理:C8固相萃取柱,100mg填料/ml用甲醇1、0ml,然后用0、5ml蒸餾水活化。2、0ml尿樣+內(nèi)標300μl(10μg/ml)上柱1、0ml水洗脫生物雜質(zhì)再用甲醇0、5ml洗脫保留在柱上得丙磺舒和內(nèi)標。洗脫液0、45μm浸濾膜濾過,取5μl直接進樣分析。

二、尿中丙磺舒得固相萃取凈化-HPLC法(運動員違禁藥物)線性關(guān)