實驗動物微生物質(zhì)量控制

實驗動物微生物質(zhì)量控制國家標(biāo)準(zhǔn)分級等級種類飼養(yǎng)條件四級無菌動物GermfreeanimalGF隔離系統(tǒng)Isolationsystem四級悉生動物GnotobioticsanimalGN隔離系統(tǒng)Isolationsystem三級無特定病原體動物SpecificpathogenfreeanimalSPF屏障系統(tǒng)Barriersystem二級清潔動物CleananimalCL屏障系統(tǒng)Barriersystem一級普通動物ConventionalanimalCV開放系統(tǒng)Opensystem各種動物國家標(biāo)準(zhǔn)分級物種分級小鼠、大鼠CL、SPF、GF地鼠、豚鼠、兔CV、CL、SPF、GF犬、猴CV、SPF第二節(jié)普通動物一、概念定義(conventionalanimalCV):不攜帶人獸共患病病原和動物烈性傳染病病原得實驗動物。特點:1、微生物控制要求最低。2、生理學(xué)特性:健康得外貌,正常得飲食,眼角、鼻腔無分泌物附著,尸檢無眼觀病灶。二、人獸共患病病毒性疾病疾病病原媒介動物人類臨床癥狀傳染途徑猴皰疹病毒感染(B-Virusinfection)cercopithecineHerpesvirusType1獼猴類肌痛、發(fā)熱、頭痛;迅速發(fā)展得上行性麻痹;感覺異常、復(fù)視、運動失調(diào)、潴尿、抽搐、吞咽困難,直至死亡唾液(咬傷)、抓傷馬爾堡病毒癥

(Marburg-Viresdisease)Marburg-Virus

非洲綠猴、

肌痛、發(fā)熱、頭痛、器官壞死、出血性休克、眼結(jié)膜溢血、惡心、嘔吐、嚴(yán)重下痢、白細(xì)胞減少,急性死亡接觸、空氣傳染;人類之間可經(jīng)由血液、分泌物或精液傳染

痘病毒癥

(PoxMrusdisease)Poxvirus其她靈長類

類似天花癥狀,如發(fā)熱、皮疹、頭痛、咽喉痛、虛脫、偶有腹痛,嚴(yán)重致死接觸傳染或呼吸道感染猴痘(Monkeypox)Poxvirus獼猴類

眼瞼、臉部、身體或生殖器有局部得卵圓形或圓形隆起紅斑接觸傳染續(xù)表疾病病原媒介動物人類臨床癥狀傳染途徑

麻疹(Measles;Rubeola)Paramyxovirus

自然宿主為人群,靈長類患病后可感染人類發(fā)熱、結(jié)膜炎、鼻炎、咳嗽、有紅暈小白點于頰部黏膜,在臉部及其她部位出現(xiàn)皮疹空氣傳染、呼吸道分泌物接觸能傳染甲型肝炎(HepatitisA)HepatitisAvirus

黑猩猩、械猴、石蟹獼猴、梟猴

發(fā)熱、身體不適、厭食、惡心、腹部不適、黃疸糞便排毒、經(jīng)口或胃腸道外途徑感染出血熱(Koreanhemorrhagicfever)

HantaanVirus

大鼠、小鼠肌痛、咳嗽,發(fā)熱、腹瀉、出血、蛋白尿、腎臟損害,嚴(yán)重致死吸入感染、嚙齒類動物咬傷、傷口污染淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染癥(Lyphocyticchoriomeningitisvirusinfection)

Lyphocyticchoriomeningitisvirus

小鼠、倉鼠類似流行性感冒得癥狀,頭痛、肌痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、喉痛、畏光。接觸感染(接觸小鼠糞便和尿液);吸入;咬傷,或由節(jié)肢動物如蚊子、蟑螂傳播狂犬病

(Rabies)Rhabdovirus

所有哺乳類頭痛、肌痛、發(fā)熱、恐水、狂妄、抽搐、昏厥、死亡

咬傷、皮膚傷口或黏膜感染含狂犬病毒得唾液

細(xì)菌性疾病

疾病病原媒介動物人類臨床癥狀傳染途徑全身性感染(Systemicinfections)

布氏桿菌病

(Brucellosis)犬BrucdlaCanis、豬Brucellasuis

犬、牛、豬、羊發(fā)熱、頭痛、惡心、體重減輕。有可能發(fā)生菌血癥,睪丸炎、不育等由接觸感染,可經(jīng)口、皮膚、呼吸道、尿液、黏膜感染鉤端螺旋體病(Leptospirosis)Leptospirosisinterro-gans各種脊椎動物得哺乳類、兩棲類、爬行類

精神萎靡、體重減輕、嘔吐、下痢、發(fā)熱、黃疸、突發(fā)性死亡接觸感染動物得尿液,由創(chuàng)傷、皮膚或口腔感染鼠疫(Plague)Yersinia(Pasteurella)pestis

鼠類、貓、犬、兔、山羊

淋巴結(jié)型鼠疫:發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大與發(fā)炎?；撔褪笠?全身性尤其就是肺、腦膜化膿由蚤傳染。另外,接觸受感染得動物,或吸入帶菌得空氣感染。皮膚傷口或黏膜亦可感染鸚鵡熱

(Psittacosis)Chlamydiapsittaci

多種鳥類(鸚鵡科、火雞、鴿、鴨等)

呈急性或隱性感染,包括發(fā)熱、厭食、肌痛、干咳。與帶病原得滲出物、分泌物、排泄物接觸傳染,或經(jīng)呼吸道感染鼠咬熱(Rat-BiteFever)Streptobacillusmonili-fonnisspirillumminus

大鼠等嚙齒類

發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大、發(fā)抖、頭痛、肌痛

被帶菌得大鼠、小鼠、犬、貓咬傷,由空氣、灰塵或飲用污染得牛乳感染

續(xù)表疾病病原媒介動物人類臨床癥狀傳染途徑呼吸道感染(Respiratorylnfections)結(jié)核病(Tuberculosis)Mycobacteriumtu-berculosis犬、貓、猴

咳嗽、生痰、咳血、體重減輕、無力疲倦、發(fā)熱、發(fā)冷、惡病質(zhì)

吸入傳染,或經(jīng)口腔、傷口及消化道感染

腸道感染

(Entericlnfections)沙門氏菌病

(Salmonellosis)Salmonellatyphimu-riumS、enteritidis鼠類、犬、貓、靈長類急性腸胃炎,腹痛、腹瀉、惡心、發(fā)熱、厭食經(jīng)由食物、飲水感染

志賀氏菌病

(Shigellosis)S、flexneri,S、Sonnei,及S、dysenteriae

豚鼠、鼠類、犬、靈長類

急性下痢、發(fā)熱、惡心、有時伴有嘔吐、先急后重、痛經(jīng)與毒血癥

接觸或口腔感染

腸道耶氏癥

(EntericYersiniosis)YersiniaEnterocolitica犬、貓、豚鼠、兔、靈長類發(fā)熱、下痢、腹痛。后遺癥有關(guān)節(jié)炎,虹膜炎、皮膚潰瘍、肝脾膿腫

接觸感染動物或其糞便,亦可經(jīng)口感染

三、動物烈性傳染病疾病病原癥狀傳播方式控制小鼠脫腳病(ectromelia)Mousepoxvirus腳、尾、鼻出現(xiàn)皮疹和潰瘍,嚴(yán)重出現(xiàn)尾壞死脫落。皮膚傷口、呼吸道、消化道兔出血癥RabbithemorrhagicdiseaseRabbithemorrhagicdiseasevirus11大家應(yīng)該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流第三節(jié)清潔級動物與無特定病原體動物一、概念Cleananimal:

除普通動物應(yīng)排除得病原外,不攜帶對動物危害大和對科學(xué)研究干擾大得病原。來源于SPF動物或剖腹產(chǎn)動物。血清病毒抗體檢測可檢測出一定滴度得抗體,病理切片應(yīng)無病變。小鼠病原菌應(yīng)排除10種,病毒5種;大鼠病原菌應(yīng)排除10種,病毒2種。Specificpathogenfree(SPF)animal:

指動物體內(nèi)無特定得微生物、寄生蟲存在,但帶有非特定得微生物、寄生蟲得動物。主要指不攜帶潛在感染、條件致病和對實驗干擾大得病原。來源于剖腹產(chǎn)動物。小鼠病原菌應(yīng)排除16種,病毒11種;大鼠病原菌應(yīng)排除16種,病毒7種。二、應(yīng)用CL動物國際上認(rèn)為僅適合短期或部分科研實驗;我國認(rèn)為適用于大多數(shù)科研實驗,可用于生物醫(yī)學(xué)研究得各領(lǐng)域。SPF動物適用于所有科研實驗,就是目前國際標(biāo)準(zhǔn)級別得實驗動物。三、微生物、寄生蟲潛在感染對實驗研究得干擾實驗動物病毒對動物和實驗得干擾鼠痘病毒實驗性結(jié)核、X射線、化學(xué)毒素、組織移植、腫瘤、運輸可使隱性感染病毒激活。大量內(nèi)毒素或切除脾臟可改變吞噬細(xì)胞功能,而增加小鼠對病毒得易感性。仙臺病毒飼養(yǎng)條件惡化、氣溫驟變或呼吸道細(xì)菌感染,可導(dǎo)致呼吸道疾病流行。嚴(yán)重影響體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答:抑制大鼠淋巴細(xì)胞對綿羊紅細(xì)胞得抗體應(yīng)答。減弱植物血凝素、刀豆素對淋巴細(xì)胞得促有絲分裂。致瘤作用得干擾:感染后得組織學(xué)改變酷似浸潤性肺癌;對化學(xué)致癌作用具有很強得影響。生殖影響:妊娠4-5天感染,胚胎被吸收;11-12天感染,妊娠期延長,新生鼠死亡率升高。小鼠肝炎病毒在應(yīng)激條件下,引起小鼠致死性肝炎、腦炎、腸炎改變機體各種免疫應(yīng)答參數(shù):降低血清免疫球蛋白水平;影響吞噬細(xì)胞數(shù)目。改變酶系統(tǒng):增高或降低一些肝臟得酶活性。乳酸脫氫酶病毒污染生物材料和移植腫瘤,影響機體免疫。嚙齒類動物病毒對生物材料、細(xì)胞系及可移植腫瘤得污染就是一個不容忽視得問題。抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答,延緩?fù)N異體排斥,抑制移植物對宿主得反應(yīng)。對腫瘤研究得影響:病毒慢性感染,抑制或延緩腫瘤得形成。對酶系統(tǒng):小鼠感染后,一些血清酶活性升高。實驗動物細(xì)菌對動物和實驗得干擾動物致病菌鼠棒狀桿菌、泰澤氏菌、鼠肺炎霉形體可引起動物嚴(yán)重疾病,使實驗中斷。條件致病菌綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、葡萄球菌在某些誘因作用下,機體抵抗力下降,導(dǎo)致動物疾病發(fā)生,干擾實驗結(jié)果。發(fā)病誘因包括免疫抑制劑、射線、營養(yǎng)失調(diào)、潮濕、擁擠、氨濃度過高、實驗處理等一切使動物處于應(yīng)激狀態(tài)得因素。耐受過感染得長期帶菌者,在實驗中受試驗因素刺激使動物發(fā)生不規(guī)律死亡,導(dǎo)致實驗失敗。正常菌群正常菌群受內(nèi)外環(huán)境變化發(fā)生菌群失調(diào),將產(chǎn)生數(shù)量和位置得改變,由非致病菌變?yōu)橹虏【?。真菌感染對動物和實驗得干擾病原真菌大多為人獸共患病原,病原性弱,為慢性過程,以慢性增生性炎癥為主。真菌孢子飛揚,污染環(huán)境,威脅動物和實驗、飼養(yǎng)人員。寄生蟲感染對動物和實驗得干擾掠奪宿主得營養(yǎng)因種類、數(shù)量、寄生部位不同,對動物影響不同。蛔蟲寄生小腸,以半消化物質(zhì)為食,導(dǎo)致動物發(fā)育緩慢、體重下降營養(yǎng)不良。螨皮下吸血,鉤蟲移位吸血導(dǎo)致動物慢性貧血。體表寄生蟲對宿主得干擾

虱、螨吸血得同時分泌有毒素得唾液,刺激宿主神經(jīng)末梢產(chǎn)生騷癢。對宿主產(chǎn)生機械損傷蟲體移行可對組織、臟器造成損傷。蛔蟲幼蟲移行,損傷腸壁、肺毛細(xì)血管和肺泡壁。腸道中,與粘液混合形成栓塞,引起腸梗阻或破裂。產(chǎn)生毒性作用

即寄生蟲分泌物、排泄物得毒性。如肝片吸蟲導(dǎo)致膽管纖維變性,肝臟萎縮硬化。對生理、生化、免疫得影響一、概念悉生生物學(xué)(gnotobiology):

1885年pasteur認(rèn)為宿主動物沒有腸道菌群參與,生命難以維持。無菌動物得問世,證明腸道菌群得存在,并非完全就是哺乳動物生存所必需。悉生生物學(xué)就是以無菌隔離技術(shù)提供得各種動物為實驗對象,研究實驗動物本身以及各種動物與微生物之間相互依存和制約關(guān)系得一門綜合科學(xué)。第四節(jié)無菌動物與悉生動物無菌動物(germfreeanimalGF):指用現(xiàn)有檢測技術(shù)在動物體內(nèi)外得任何部位均檢不出任何活得微生物和寄生蟲得動物。來源于剖腹產(chǎn)或無菌卵孵化,飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)中。悉生動物(gnotobioticanimalGN):或稱已知菌動物,廣義上把無菌動物、已知菌動物、無特定病原體動物統(tǒng)稱悉生動物;狹義上指已知菌動物。二、無菌動物得特點形態(tài)學(xué)改變消化系統(tǒng):盲腸膨大,腸壁菲薄,易發(fā)生盲腸扭轉(zhuǎn),導(dǎo)致破裂。循環(huán)系統(tǒng):心臟變小。免疫系統(tǒng):胸腺上皮細(xì)胞變大,胞漿泡狀結(jié)構(gòu)和溶酶體變小。生理學(xué)改變免疫功能:免疫應(yīng)答慢,過敏反應(yīng)、對異體移植物得排斥反應(yīng)以及自身免疫現(xiàn)象消失或減弱。對微生物感染非常敏感。生長率:豚鼠、兔生長率降低,大、小鼠改變不大。代謝:水分代謝周期延長,腸管對水得吸收率低。營養(yǎng):體內(nèi)不能合成VitB、VitK?？馆椛淠芰?增強。壽命:長于普通動物。三、悉生動物得特點GN動物就是動物與微生物得共生復(fù)合體。腸道存在能合成維生素和氨基酸得細(xì)菌,不會出現(xiàn)維生素缺乏癥。生活力、抵抗力明顯增強,易于飼養(yǎng)。四、GF動物得應(yīng)用微生物研究GF就是研究微生物與宿主相互作用,即微生生物與宏生生物相互關(guān)系,微生物與微生物得共生與拮(jie)抗關(guān)系得最佳動物。口服霍亂弧菌使幼齡GF豚鼠死亡,口服前感染梭狀芽胞桿菌,動物不發(fā)生死亡;口服福氏痢疾桿菌使幼齡GF豚鼠死亡,口服前接種大腸桿菌,動物不發(fā)生死亡。炎癥涉及細(xì)菌感染得多因素作用,GF可把多因素變成單因素,整體反應(yīng)變成局部反應(yīng)。老年學(xué)研究

GF大鼠壽命比CV大鼠延長1/3。雌性GF壽命比雄性動物短,雌性CV動物比雄性長。

2-3年得GF大鼠臟器均未呈現(xiàn)同齡CV大鼠所具有得各種衰老變化。腫瘤學(xué)研究在致癌因素中,微生物引起癌變得比重較大。有些病毒可通過胎盤傳播。GF動物口服蘇鐵素不出現(xiàn)腫瘤,但CV動物口服蘇鐵素出現(xiàn)腫瘤。第五節(jié)實驗動物微生物及寄生蟲監(jiān)測監(jiān)測程序:1、微生物檢測程序分離血清,檢查病毒抗體或其她病原得抗體

氣管分泌物,腸內(nèi)容物,臟器分離細(xì)菌

真菌檢查動物編號外觀檢查麻醉皮膚取樣取血無菌解剖檢測檢測報告2、寄生蟲檢測程序弓形蟲檢測

體外寄生蟲檢測體內(nèi)寄生蟲檢測

體外寄生蟲檢測動物編號外觀檢查麻醉拔毛或梳毛取血擠壓或刀片刮取皮層物取樣檢測檢測報告解剖、臟器、腸內(nèi)容物、糞便取樣取樣要求與監(jiān)測規(guī)則:1、普通動物、清潔級動物和無特定病原體動物每三個月至少檢測一次。2、無菌動物每年至少檢測一次。3、每2-4周檢測一次糞便標(biāo)本。實驗動物不同生產(chǎn)繁殖單元取樣數(shù)量群體大小，只取樣數(shù)量<100100—150>500>5只>10只>20只

每個隔離器檢測2只監(jiān)測方法:1、實驗動物病毒檢測:1)血清學(xué)診斷:血凝抑制試驗(HI);酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。2)病原學(xué)檢查:接種細(xì)胞培養(yǎng)物觀察CPE出現(xiàn)(鼠痘、鼠肝炎);血吸附試驗(仙臺病毒);免疫酶試驗(LCM病毒)。連續(xù)三次傳代未有病毒跡象為陰性。接種敏感動物,觀察發(fā)病、抗體產(chǎn)生、病理改變、接種動物病毒再分離。動物組織細(xì)胞傳代培養(yǎng)。3)病毒顆粒、抗原和核酸得檢出光鏡檢查病理改變或包涵體得存在。