長沙健路醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司-九項(xiàng)遺傳性耳聾基因檢測試劑性能驗(yàn)證報(bào)告(全血修改)

長沙健路醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司九項(xiàng)遺傳性耳聾基因檢測試劑性能驗(yàn)證報(bào)告目錄驗(yàn)證目的驗(yàn)證內(nèi)容和方法對象內(nèi)容與方法設(shè)備實(shí)驗(yàn)要求操作程序驗(yàn)證結(jié)果陽性符合率陰性符合率空白驗(yàn)證檢測重復(fù)性檢測靈敏度結(jié)果說明驗(yàn)證結(jié)論

驗(yàn)證目的本實(shí)驗(yàn)室計(jì)劃使用北京博奧生物集團(tuán)有限公司晶芯?九項(xiàng)遺傳性耳聾基因檢測試劑盒（微陣列芯片法）[國食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2013第3401518號]開展相關(guān)檢測項(xiàng)目，根據(jù)《ISO15189：醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力的專用要求》，為保證實(shí)驗(yàn)室按照廠家所提供的試劑盒或檢測系統(tǒng)說明書使用時(shí)，能復(fù)現(xiàn)生產(chǎn)廠家所宣稱的檢測性能，按照實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理計(jì)劃，對生產(chǎn)廠家提供的試劑盒和檢測系統(tǒng)進(jìn)行了性能驗(yàn)證，報(bào)告如下。驗(yàn)證內(nèi)容與方法對象晶芯?九項(xiàng)遺傳性耳聾基因檢測試劑盒（微陣列芯片法）基因組DNA提取試劑盒為北京康為世紀(jì)有限公司血液基因組非柱式提取試劑盒（CW0544）樣本：人全血，適用抗凝劑為EDTA或枸櫞酸鈉等，不得以肝素抗凝。不分病種、檢測目的、性別、年齡。質(zhì)控品：該試劑盒中均包含正常野生型質(zhì)控品，同時(shí)實(shí)驗(yàn)室提供4個已知突變的陽性質(zhì)控品，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。內(nèi)容與方法根據(jù)產(chǎn)品說明書標(biāo)示的性能指標(biāo)，驗(yàn)證以下內(nèi)容：陽性符合率：已經(jīng)測序確定為特定突變的核酸4（4例，每種類型突變一例）例，由本實(shí)驗(yàn)室使用待評價(jià)試劑盒進(jìn)行測試，結(jié)果應(yīng)與已知結(jié)果一致，陽性符合率應(yīng)達(dá)到100%。陰性符合率：已經(jīng)測序確定為野生型的核酸2（2例，正常人）例，由本實(shí)驗(yàn)室使用待評價(jià)試劑盒進(jìn)行測試，結(jié)果應(yīng)與已知結(jié)果一致，陽性符合率應(yīng)達(dá)到100%?？瞻昨?yàn)證：用實(shí)驗(yàn)室常用滅菌純水代替樣本，由本實(shí)驗(yàn)室使用待評價(jià)基因檢測試劑盒進(jìn)行1次測試，結(jié)果應(yīng)均為未檢出。檢測重復(fù)性：取已知結(jié)果樣本2（2例，涵蓋已知陽性一例，陰性一例）份，未知結(jié)果樣本2（2例，正常人標(biāo)本）份，由本實(shí)驗(yàn)室使用待評價(jià)基因檢測試劑盒分別進(jìn)行3次測試，3次檢測結(jié)果應(yīng)一致。檢測靈敏度：測量試劑盒中自帶核酸濃度，由本實(shí)驗(yàn)室使用待評價(jià)基因檢測試劑盒進(jìn)行3次測試，結(jié)果應(yīng)正確。設(shè)備臺式高速離心機(jī)恒溫金屬浴渦旋振蕩器分光光度計(jì)PCR擴(kuò)增儀水浴鍋晶芯?SlideWasher24芯片洗干儀晶芯?LuxScan10K-B微陣列芯片掃描儀實(shí)驗(yàn)要求實(shí)驗(yàn)室要求：嚴(yán)格按照臨檢中心要求進(jìn)行分區(qū)，保證實(shí)驗(yàn)的規(guī)范操作和結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。實(shí)驗(yàn)室設(shè)備：各項(xiàng)性能指標(biāo)應(yīng)在參考范圍之內(nèi)，經(jīng)工程師調(diào)試安裝后方可進(jìn)行常規(guī)實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)操作人員：應(yīng)熟悉方法原理與操作，能對樣本進(jìn)行正確處理，并按流程順利進(jìn)行DNA抽提、PCR擴(kuò)增、芯片雜交、洗片與掃描操作。實(shí)驗(yàn)前，本實(shí)驗(yàn)室需按照待評價(jià)產(chǎn)品說明書要求建立實(shí)驗(yàn)檢測條件，并通過陽性對照和陰性對照試驗(yàn)。嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求保存產(chǎn)品及全血樣本。操作程序檢測流程：全血標(biāo)本編號標(biāo)記→檢測前準(zhǔn)備→提取DNA→PCR擴(kuò)增→芯片雜交→洗片與掃描→輸出結(jié)果。檢測步驟嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

驗(yàn)證結(jié)果陽性符合率：結(jié)果見下表。操作者徐圳，何婕審核者石堅(jiān)操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號測序結(jié)果本實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果（基因型）1235delC雜合突變235delC雜合突變2538C>T雜合突變538C>T雜合突變3299_300delAT雜合突變299_300delAT雜合突變42168A>G雜合突變2168A>G雜合突變陽性樣本號1原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本號2原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本號3原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本號4原始數(shù)據(jù)顯示：本實(shí)驗(yàn)室4個樣本分別檢測1次，結(jié)果與測序完全一致，陽性符合率100%。陰性符合率：結(jié)果見下表。操作者徐圳，何婕審核者石堅(jiān)操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號測序結(jié)果本實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果（基因型）5試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生6試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生陰性樣本號5原始數(shù)據(jù)顯示：陰性樣本號6原始數(shù)據(jù)顯示：本實(shí)驗(yàn)室2個樣本分別分別檢測1次，結(jié)果與測序完全一致，陰性符合率100%?？瞻讓φ眨航Y(jié)果見下表操作者徐圳，何婕審核者石堅(jiān)操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號本實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果（基因型）NC只有QC、PC、MC質(zhì)控探針信號空白對照樣本原始數(shù)據(jù)顯示：本實(shí)驗(yàn)室1個空白檢測1次，結(jié)果與理論結(jié)果完全一致，。檢測重復(fù)性：結(jié)果見下表。操作者徐圳，何婕審核者石堅(jiān)操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號本實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果（基因型）1235delC雜合突變5試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生7試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生8試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生陽性樣本1重復(fù)性第一次原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本1重復(fù)性第二次原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本1重復(fù)性第三次原始數(shù)據(jù)顯示：本實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果重復(fù)3次結(jié)果完全一致，重復(fù)率100%。檢測靈敏度：結(jié)果見下表。操作者徐圳，何婕審核者石堅(jiān)操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號本實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果（基因型）試劑盒自帶核酸稀釋（80ng/ul）試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生試劑盒自帶核酸稀釋（40ng/ul）試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生試劑盒自帶核酸稀釋（20ng/ul）試劑盒范圍內(nèi)的九個位點(diǎn)均野生樣本濃度為80ng/ul樣本原始數(shù)據(jù)顯示：樣本濃度為40ng/ul樣本原始數(shù)據(jù)顯示：樣本濃度為20ng/ul樣本原始數(shù)據(jù)顯示：本實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果分別檢測1次結(jié)果完全一致。檢測結(jié)果說明本試劑盒用于檢測人全血基因組DNA中與遺傳性耳聾相關(guān)的9個突變位點(diǎn)，檢測結(jié)果可以輔助臨床診斷，也可用于流行病學(xué)調(diào)查及產(chǎn)前篩查、新生兒篩查等領(lǐng)域，試劑盒檢測指標(biāo)如下表：表1試劑盒檢測指標(biāo)基因名稱突變位點(diǎn)突變位點(diǎn)描述GJB23535delG176176del16235235delC299299delATSLC26A4IVS7-2IVS7-2A>G21682168A>G線粒體12SrRNA15551555A>G14941494C>TGJB3538538C>TGJB2基因編碼縫隙連接蛋白26，縫隙連接蛋白調(diào)控細(xì)胞間的離子交換，耳蝸毛細(xì)胞中高表達(dá)。GJB2基因突變相關(guān)的耳聾為隱性遺傳方式，當(dāng)發(fā)生純合突變時(shí)，影響離子通道正常功能，患者出生即表現(xiàn)出耳聾癥狀，此突變導(dǎo)致的耳聾預(yù)示良好的人工耳蝸移植效果。SLC26A4基因編碼pendrin蛋白，pendrin蛋白屬于離子轉(zhuǎn)運(yùn)體家族，調(diào)節(jié)細(xì)胞膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)。SLC26A4基因突變相關(guān)的耳聾為隱性遺傳方式，當(dāng)發(fā)生純合突變時(shí)，患者腦部抗壓力變化能力降低，患感冒、頭部受打擊時(shí)，聽力急劇下降。此突變個體應(yīng)避免顱壓增大和使用耳毒性藥物，建議使用改善微循環(huán)藥物和神經(jīng)營養(yǎng)藥治療。12SrRNA基因編碼產(chǎn)物結(jié)構(gòu)類似細(xì)菌16S核糖體RNA，該基因突變攜帶者使用氨基糖苷類藥物會引起耳蝸的ATP合成障礙，導(dǎo)致重度耳聾的發(fā)生，因此檢出此類突變的個體應(yīng)終身慎用氨基糖苷類抗生素藥物。同時(shí)，由于該基