藥典翻譯USP29-1225　法定方法的驗證　中文譯稿已校

USP29-1225藥典操作法的驗證6-PAGE6USP29-1225藥典操作法的驗證7-PAGE7藥典操作法的驗證<1225>藥典操作法的驗證用于評價藥品質(zhì)量水平的實驗操作法需滿足各種要求。按照聯(lián)邦食品、藥品與化妝品法案的501部分，USP正文中的含量分析以及質(zhì)量標準，以用國家處方集組分的合法要求，cGMP21CFR211.194(a)要求：用于評估藥典產(chǎn)品是否符合已制訂的質(zhì)量標準的實驗方法，必須滿足適當?shù)臏蚀_度及可靠性的要求。根據(jù)這些條例21CFR211.194(a)(2)：使用USP-NF中所描述的分析方法無需驗證其準確度及可靠性，僅需要在實際操作條件下證實其系統(tǒng)適用性。認識到USP-NF標準的合法性，因此，提議吸納新的或修訂藥典的分析操作法，需要由充分的實驗數(shù)據(jù)支持，以證實其有效性。本文內(nèi)容盡可能與三方的ICH指南（分析操作法的驗證以及方法學擴充的內(nèi)容）保持協(xié)調(diào)一致，這些指南與分析操作法有關，包括作為在歐盟、日本、美國范圍內(nèi)所提交的注冊申報材料的部分。提交到藥典向藥典提交新的或修訂的分析操作法應包括充分的信息，使USP專家理事會及其專家委員會的成員能用這些信息評價所提議的操作法的相對優(yōu)越性。在大多數(shù)情況下，評價內(nèi)容包括：分析方法描述的clarity和完整性，確定是否需要此操作法，以及這些操作法已被適當驗證的證明文件。根據(jù)所涉及的方法的類型，這些信息可能會有所不同。但是，在多數(shù)情況下，一份提交的材料應包括以下內(nèi)容：基本原理——這一部分應確定操作法的必要性，并且闡明所提議的專屬性方法的檢測能力，及與其它類型的檢測相比，它是首選的方法。對于修訂的操作法，應提供對當前藥典操作法的局限性與所提議的方法的優(yōu)越性的比較材料。提議的分析操作法——這一部分應包含分析操作法的完整的描述，這些描述應充分詳細，應可使“具備一定技能”的人能夠重復此操作法。這份敘述還應包括所有重要的操作參數(shù)以及特殊的說明，例如試劑的制備、系統(tǒng)適用性的性能、所用的空白對照的描述、注意事項及清楚的檢驗結(jié)果的計算公式。數(shù)據(jù)要素——這一部分應提供分析操作法驗證的完整的證明文件。應包括實驗數(shù)據(jù)的總結(jié)及證實每一個所用的驗證項目的計算。這些驗證項目在以下部分中敘述。驗證一個分析操作法的驗證是一個程序，通過此程序，可由實驗室研究制訂操作法的性能特征能達到預期要求。在本章節(jié)中描述的常見的分析的驗證項目被列于表1中。考慮到對術語的理解及使用可能有所不同，在本章節(jié)的后續(xù)部分給出了每個驗證項目的定義，以及常見方法的線性。表1.方法驗證中使用的常見的驗證項目準確度精密度專屬性檢測限定量限線性范圍耐受性robustness就藥典操作法來說，在以下情況下可能需要再驗證：向USP提交修訂的分析操作法；(theuseofanestablishedgeneralprocedurewithanewproductorrawmaterial)應用于新產(chǎn)品及或新原材料而建立的一般方法（參見分析驗證所需數(shù)據(jù)項下）ICH指南給出了在以下情況下關于再驗證必要性的指導：原料藥合成方面的改變；以藥物制劑組成方面的改變；以及在分析操作法方面的改變。分析方法驗證項目準確度定義——分析操作法的準確度是指由此方法所得到的測定值與真實值的接近程度。一個分析操作法的準確度應在一定范圍內(nèi)被制訂。測定——在分析原料藥時，可通過分析已知純度的被分析物（如：標準品）進行測定，或同那些已建立準確度的另一種方法測得的結(jié)果進行比較而得。在分析制劑中的藥物時，準確度可用含有已知量被分析物的各組分混合物進行測定，如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定，或與另一已建立準確度的另一種操作法比較結(jié)果。在雜質(zhì)定量分析時，可向樣品（原料藥或制劑）中加入已知量的雜質(zhì)進行測定。如果不能得到某些雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可將用本法測得的結(jié)果與另一獨立的方法測得的結(jié)果進行比較。在缺乏一些信息時，可以通過比較雜質(zhì)與原料藥的響應值來計算雜質(zhì)含量。如果等量的雜質(zhì)與原料藥的響應值之比（相對響應因子）可知，則應使用。準確度用樣品中已知量的被分析物的含量的回收率來計算，或者用平均值與可接受的真實值（二者組成置信區(qū)間）之間的差值來計算。ICH指南建議計算準確度最少用3個濃度水平（包括所規(guī)定的范圍），9個結(jié)果來議價，（也就是：3個濃度，每個濃度重復3次）。準確度的評估可以用不同的方式來完成，包括評估含量范圍內(nèi)被分析物的回收率（回收百分數(shù)），或評估所估計的濃度與實際濃度之間關聯(lián)的線性。統(tǒng)計學上首選的標準是斜率的置信區(qū)間被包含在1.0的區(qū)間內(nèi)，或者，可以選擇替代的，斜率接近于1.0。無論在哪種情況下，應在驗證方案中規(guī)定區(qū)間或接近程度的定義。合格標準將取決于含量及其變異性以及產(chǎn)品。根據(jù)斜率為1的零假設的實驗的統(tǒng)計學上的顯著性，制訂一個合格標準不是一個可以接受的方法。精密度定義——一個分析操作法的精密度是指同樣的操作法，同一均質(zhì)樣品，經(jīng)多次取樣檢測，所得結(jié)果之間的接近程度。分析操作法的精密度通常用一系列檢測結(jié)果的標準偏差或相對標準偏差（變異系數(shù)）來表示。精密度也是評價正常操作條件下分析操作法的重現(xiàn)性或重復性的手段。這里，重現(xiàn)性指的是在不同實驗室用相同的操作法。中間精密度（也稱為ruggedness）指同一實驗室內(nèi)，不同天或不同分析人員，或不同設備進行測定。重復性是指同一實驗室，在短時期內(nèi)，同一分析人員用同一設備進行測定。測定——分析操作法的精密度是通過測定足夠的等份的均質(zhì)樣品，統(tǒng)計其標準偏差或相對標準偏差（變異系數(shù)）而得。在本文中，含量分析是單獨的樣品分析，此樣品貫穿于從樣品制備到最終測試結(jié)果的整個分析過程。ICH指南要求，在操作法規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果進行評價（如：制備3個不同濃度的樣品，各測定3次，或把被測物濃度當作100%，用至少測定6次的結(jié)果進行評價）。專屬性定義——ICH指南中定義專屬性是指在期望的成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、矩陣組分matrixcompenent）存在的情況下，方法能夠準確測定出被測物的能力。缺乏專屬性的分析操作法可以用其他分析手段來彌補。[說明——其他著名的國際權威組織（IUPAC、AOAC－=1\*ROMANI）傾向于用“選擇性”，保留“專屬性”特定用于那些具有完全選擇性的操作法。]對于下述所討論的實驗來說，上述定義有如下含義：鑒別實驗——確保對被分析物的鑒別能力。純度實驗——確保所做的所有的分析操作法可準確檢出被分析物中雜質(zhì)的含量（如：有關物質(zhì)檢測、重金屬限度、有機溶劑雜質(zhì)）。含量分析——提供樣品中被分析物的含量或效價的準確結(jié)果。測定——在定性分析中（鑒別實驗），專屬性實驗要求證明能與可能共存的結(jié)構(gòu)相似的化合物區(qū)分，需確定含被分析物的樣品呈正反應（可與已知對照物比較），而不含被測成分的樣品呈負反應，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關化合物也應呈負反應。在雜質(zhì)分析中，專屬性可以通過以下方法建立：向原料藥或制劑中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)能被測定出，并具適當?shù)臏蚀_度和精密度。在含量分析中，專屬性的確證要求分析過程不受雜質(zhì)及輔料的影響。在實際操作中，可向原料藥或制劑中加入一定量的雜質(zhì)或輔料，證明含量分析的結(jié)果不受這些外來物的影響。如果雜質(zhì)或降解產(chǎn)物標品不可獲得，可通過與另一個藥典的方法或經(jīng)驗證了的方法測定含雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的樣品得到的結(jié)果進行比較來確證專屬性。這些對比實驗應包括貯存于破壞性條件（如：強光照射、高溫、高濕、酸堿水解及氧化）下的樣品。在含量分析時應比較主成分結(jié)果。在色譜雜質(zhì)測定中，應比較雜質(zhì)情況。ICH指南指出：當使用色譜分析方法時，應提供能說明方法選擇性的代表性色譜圖，且圖中的峰應適當?shù)貥俗?。為表明被分析物色譜峰未受到多個組分的影響，峰純度檢查（采用二極管陣列或質(zhì)譜）可能是很有用的。檢測限定義——檢測限是一種限度實驗，是指在實驗條件下，樣品中被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量。因此，限度實驗僅證實的是被測物的量高于或低于某一水平。檢測限通常用樣品中被分析物的濃度表示（如：%、ppb）。測定——非儀器分析方法，檢測限是通過對一系列含已知濃度被分析物的樣品進行分析來測定，并建立被測物能被可靠地檢出的最低水平。對于儀器分析方法，同樣的方法也可用于非儀器分析方法。當所采用的操作法被作為是官方法定的操作法時，不必測定實際的檢測限。通過分析含已知濃度（在所要求的檢測限之上和之下）被分析物的一系列樣品來說明檢測限足夠低。例如：如果要求檢測的某一雜質(zhì)水平是0.1%，則應保證分析操作法在這一水平能可靠地檢測出該雜質(zhì)。對于能顯示基線噪音的儀器分析操作法，ICH指南描述了一種通用的方法，即把含已知低濃度的被分析物的樣品與空白樣品測出的信號進行比較，算出被分析物能被可靠地檢測出的最低濃度。一般可接受的信噪比是2∶1或3∶1。其他方法是依據(jù)校正曲線的斜率及計算響應值的標準偏差的測定來確定定量限。無論采用哪種方法，均應用一定數(shù)量的樣品，其濃度為近于或等于檢測限，進行分析，以可靠地驗證檢測限。定量限定義——定量限是指樣品中的被分析物能夠被定量分析的最低水平，如：原料藥中的雜質(zhì)，成品中的降解產(chǎn)物。它是，在規(guī)定的實驗條件下，具有可接受的精密度和準確度時測定的樣品中被分析物的最低量。定量限用樣品中被分析物的濃度表示（如：%，ppb）。測定——對于非儀器的操作法，定量限一般通過對一系列含有已知濃度被分析物的樣品進行分析，在準確度和精密度都可接受的情況下，來確定被分析物能被定量的最小量。對于儀器分析的操作法，同樣的方法也可用于非儀器分析方法。當所采用的操作法被作為是官方法定的方法時，不必測定實際的定量限。通過分析含已知濃度（在規(guī)定的濃度之上或之下）被分析物的一系列樣品來說明定量限足夠低。例如：如果要求分析的某一被分析物水平是0.1mg/片，則應保證在分析方法這一水平能可靠地定量被分析物。對于能顯示基線噪音的儀器分析操作法，ICH指南描述了一種通用的方法，即把含已知低濃度的被分析物的樣品與空白樣品測出的信號進行比較，算出被分析物能被可靠地定量的最低濃度。一般可接受的信噪比是10∶1。其他方法是依據(jù)校正曲線的斜率及計算響應值的標準偏差的測定來確定定量限。無論采用哪種方法，均應用一定數(shù)量的樣品，其濃度為近于或等于定量限，進行分析，以可靠地驗證定量限。線性和范圍線性的定義——分析操作法的線性是指在設定的范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與樣品中被分析物的濃度直接或通過數(shù)學轉(zhuǎn)換呈比例關系的能力。因此，在這部分中，“線性”指的是濃度與含量測定之間的關系。在某些情況下，為得到線性，濃度和/或測量值可能被轉(zhuǎn)換。（注：在應用轉(zhuǎn)換時，在回歸分析中所用的加權因子可能會有變化）?？赡艿霓D(zhuǎn)換包括：對數(shù)、平方根、或倒數(shù)，雖然其它的轉(zhuǎn)換也可能會被使用。如果不能得到線性，也可以用非線性模型。目的是要有一個描述濃度-響應值關系的模型，無論是線性還是非線性，范圍的定義——分析操作法的范圍是指由被分析物的高限和低限組成的一個區(qū)間，此區(qū)間已被能夠達到一定的精密度、準確度和線性的書面的分析操作法所證實。范圍通常用與分析操作法的測定結(jié)果相同的單位（如：%，ppm）表示。線性與范圍的測定——應在分析操作法規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性。最初建立線性是測定含有被分析物濃度系列，觀察信號值。如果這些值呈線性關系，檢測結(jié)果應進行適當?shù)慕y(tǒng)計（如：用最小二乘法進行線性回歸）。線性回歸的數(shù)據(jù)可用于評價線性相關程度。應提供相關系數(shù)、Y軸截距、線性相關的斜率及剩余平方和。通過確證當含被分析物在一定范圍（超出范圍和在范圍內(nèi)）時，分析方法能夠達到一定的精密度、準確度和線性來確定操作法的范圍。ICH指南指出：建立線性，通常至少用5個濃度。同時也提出，應考慮以下最小的特定范圍：原料藥（或成品）含量分析：測試濃度的80%~120%某一雜質(zhì)的測定：合格標準的50%~120%含量均勻度：最低范圍是測試濃度的70%~130%，依據(jù)劑型特點，如定量吸入劑，必要時范圍可適當放寬，或調(diào)整至一個合適的范圍。溶出度實驗：規(guī)定范圍的±20%（如，某一控釋產(chǎn)品的合格標準是從1小時后20%增至24小時后90%，則驗證的范圍應標示的0%~110%）。耐用性定義——分析操作法的耐用性是指操作法文件中所列的方法參數(shù)發(fā)生細小的但是故意造成的變化時，測定結(jié)果保持不受影響的承受程度，也是在正常使用過程中，方法可靠性的指標。耐受性可以在分析操作法的研究期間被制定。系統(tǒng)適用性如果在分析條件下，實驗條件容易變化，則應對這些條件適當控制，或在操作法中包括預防實驗。根據(jù)粗放度（中間精密度）和耐用性評價的結(jié)果應建立一系列的系統(tǒng)適用性參數(shù)，以確保在分析過程中分析方法的有效性。典型的變動因素是分析溶液的穩(wěn)定性、不同的設備和不同的分析人員。在液相色譜法中，典型的變動因素是流動相的pH值，流動相的組成，不同供應商或不同批號的色譜柱，溫度，流速。在氣相色譜法中，典型的變動因素是不同批號或不同供應商的色譜柱，溫度及流速。系統(tǒng)適用性要將設備、電子儀器、實驗操作、被測試的樣品等一起當作完整的系統(tǒng)進行評估。對于一個特定的操作法來說，系統(tǒng)適用性參數(shù)的設置需根據(jù)將被評估的操作法的類型而定。對于色譜方法，這些參數(shù)尤為