TAQNS 002-2023 白及多糖產(chǎn)品中多糖含量的測定

ICSCCSAQNSDeterminationofpolysaccharidecontentinBletillastriatapolysaccharidesproductsIT/AQNS002—2023 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4原理 5試驗(yàn)儀器 6試劑 7分析步驟 8分析結(jié)果的表述 9精密度 T/AQNS002—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由安慶市營養(yǎng)學(xué)會提出并歸口。本文件起草單位：安慶職業(yè)技術(shù)學(xué)院、安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院、安慶市營養(yǎng)學(xué)會、合肥工業(yè)大本文件主要起草人：劉冬、呂新霞、譚煒、汪祝華、金季也、陳瑋、葉紅玲、葉明。1T/AQNS002—2023白及多糖產(chǎn)品中多糖含量的測定本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用苯酚硫酸法測定白及多糖產(chǎn)品中多糖含量的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以蘭科白及Bletillastriata（Thunb.）Reichb.f.的地下假鱗莖為原料，用水在高溫下提取后經(jīng)乙醇沉淀制成的白及多糖產(chǎn)品中多糖的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1白及多糖Bletillastriatapolysaccharides以蘭科白及Bletillastriata（Thunb.）Reichb.f.的地下假鱗莖為原料原料，經(jīng)過水提取、乙醇沉淀、水溶解等工序而制成的白及多糖。4原理多糖在濃硫酸的作用下，水解成單糖并迅速脫水生成糖醛衍生物，糖醛酸衍生物與苯酚反應(yīng)生成橙黃色溶液，在490nm處有特征吸收。5試驗(yàn)儀器5.1分析天平：精確到0.0001g。5.2紫外分光光度計(jì)。5.3恒溫水浴鍋。5.4迷你振蕩器。5.5高速破壁機(jī)。5.6超聲波提取器。5.7離心機(jī)，4000r/min。5.8組織搗碎機(jī)。6試劑除另有規(guī)定外，僅使用分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的一級水。6.1葡萄糖（C6H12O6，CAS號：50-99-7）標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥98.0%。使用前應(yīng)于105℃恒溫干燥至恒重。2T/AQNS002—20236.2硫酸（H2SO4），ρ=1.84g/mL。6.3無水乙醇（C2H6O）。6.4苯酚（C6H6O），重蒸餾。6.5葡萄糖對照品溶液（100mg/L稱取0.1g（精確至0.001g）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品，置于100mL燒杯中，加少量水溶解，轉(zhuǎn)至1000mL棕色容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻后置于4℃冰箱中避光保存。6.680%乙醇溶液：量取無水乙醇80mL，置于100mL容量瓶中，加水定容至刻度。6.780%苯酚溶液：稱取苯酚80g（精確至0.01g置于100mL燒杯中，加水少量溶解，轉(zhuǎn)移至100mL棕色容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻后置于4℃冰箱中避光保存。6.85%苯酚溶液：量取5mL80%苯酚溶液（5.2.3），溶于75mL水中，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。7分析步驟7.1標(biāo)準(zhǔn)工作曲線準(zhǔn)確量取葡萄糖對照品溶液（6.5）0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL分別置于20mL具塞試管中，用水補(bǔ)至1.0mL。加入5%苯酚溶液1.0mL（6.8然后快速加入硫酸5.0mL（6.2）（與液面垂直加入，勿接觸試管壁，以便與反應(yīng)液充分混合靜置10分鐘。使用旋渦振蕩器使反應(yīng)液充分混合，將試管放置于30℃水浴中反應(yīng)20分鐘，在490nm處測定吸光度。以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.2試樣的測定取樣品0.03g精確到0.0001g置500mL容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，靜置2h，待用。吸取2.0mL上述溶液，置于20mL具塞試管中，加入5%苯酚溶液1.0mL（6.8），然后快速加入硫酸5.0mL（6.2與液面垂直加入，勿接觸試管壁，以便與反應(yīng)液充分混合靜置10分鐘。使用旋渦振蕩器使反應(yīng)液充分混合，將試管放置于30℃水浴中反應(yīng)20分鐘，在490nm處測定吸光度。若樣品多糖含量較高（吸光度不在0.1~0.8之間），可適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行分析測定。7.3空白試驗(yàn)與試樣的測定平行進(jìn)行，取相同量的所有試劑，采用相同的分析步驟，但不添加試樣。8分析結(jié)果的表述總多糖含量計(jì)算方法見式（1）X0.9104···········································(1)樣品中多糖含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)X計(jì)，單位以克每百克（g/100g）計(jì)；式中：m0——空白樣從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品測定液中含糖量，單位為微克(μgm1——試樣從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品測定液中含糖量，單位為微克(μg）；v1——樣品定容體積，單位為毫升（mL）；v2——比色測定時(shí)所移取樣品測定液的體積，