TGDSF 0003-2024 花鱸苗種質(zhì)量檢驗技術(shù)規(guī)范

ICS65.150CCSB50GDSF廣 東 水 產(chǎn) 學 會 團 體 標 準T/GDSF0003—2024花鱸苗種質(zhì)量檢驗技術(shù)規(guī)范Specificationforexaminationofqualityinspectionforseedingsofspottedseabass2024-06-27發(fā)布 2024-12-27實施廣東水學會 發(fā)布T/GDSF0003T/GDSF0003—2024IIII前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由廣東水產(chǎn)學會歸口。本文件主要起草人：王鵬飛、邱麗華、趙超，馮娟、張博1、張博2、閆路路、姜志勇、吳郁麗、楊鏗、張曉陽、鄭鎮(zhèn)雄、鄭少華、趙艷飛、李慶。注：張博1與張博2同名，張博11987年10月出生，張博21987年12月出生。T/GDSF0003T/GDSF0003—2024PAGEPAGE1花鱸苗種質(zhì)量檢驗技術(shù)規(guī)范范圍Lateolabraxmaculatus本文件適用于花鱸苗種的質(zhì)量檢驗。（GB/T15805GB/T18654.33GB/T22213SC/T7103水生動物產(chǎn)地檢疫采樣技術(shù)規(guī)范GB/T22213界定的術(shù)語和定義適用于本文件。外觀可量指標30mm0.40g可數(shù)指標全長合格率≥95%，體重合格率≥95%，傷殘率≤3%，畸形率≤1%。疫病不攜帶病毒性神經(jīng)壞死病毒及真鯛虹彩病毒。在光線充足環(huán)境下，肉眼逐項觀察體形、體色、活力等指標。按照GB/T18654.3規(guī)定的方法測量全長和體重。30mm0.40g按照SC/T7103PCRPCR抽樣時應選擇能代表整批苗種群體水平的樣品，隨機抽取。每個樣品的抽樣量應不少于150尾。附錄A（規(guī)范性）花鱸苗種神經(jīng)壞死病毒（NNV）巢式PCR檢疫方法RNARNAStoreRNARNAcDNARNAcDNAPCR1511PCR引物NNV-F1和NNV-R1PCR1017bp；引物NNV–F2和NNV–R2777bpNNV-F1：5′-ATGGTACGCAAAGGTGAGAAG-3′NNV-R1：5′-TTAGTTTTCCGAGTCAACCCTG-3′NNV-F2：5′-AGCCGGGACAGGAACAGAC-3′NNV-R2：5′-CCAACAGGCAGCAGGATTT-3′PCR在PCRNNVRNAcDNANNVRNAcDNANNVRNAcDNADEPCPCR25μL0.25μLTaqDNA（5U/μL）；各1.0μL（10（NNV-F1（NNV-R1或者μLDNA（20ng/μL）；2.0μLdNTPMix（2.5mol/L），2.5μL10×PCRMg2+25μL將轉(zhuǎn)錄好的NNVcDNA進行第一輪PCR擴增，程序為：95℃5min，98℃10s，60℃30s，72℃65s，35個循環(huán)；72℃10min；4℃保存。將一擴產(chǎn)物作為模板進行第二輪擴增，擴增程序為：95℃5min；98℃10s，55℃30s，72℃45s，35個循環(huán)；72℃10min；4℃保存。一擴和二擴PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，在紫外檢測儀下觀察結(jié)果。PCR1017bpPCR777bp樣品的第一輪PCR擴增在1017bp附近有特異性目的條帶，或第二輪PCR擴增在777bp附近有特異性目的條帶，且擴增產(chǎn)物序列測定結(jié)果符合神經(jīng)壞死病毒的序列（見附錄B），判定檢測結(jié)果為陽性。樣品的第一輪PCR擴增在1017bp附近無特異性目的條帶，且第二輪PCR擴增在777bp附近無特異性目的條帶，判定檢測結(jié)果為陰性。附錄B（規(guī)范性）引物NNV-F1和NNV-R1擴增的花鱸NNV基因組的序列(1017bp)1ATGGTACGCAAAGGTGAGAAGAAATTGGCAAAACCCGCGACCACCAAGGCCGCGAATCCG61CAACCCCGCCGACGTGCTAACAATCGTCGGCGTAGTAACCGCACTGACGCACCTGTGTCA121AAGGCCTCGACTGTGACCGGATTTGGACGTGGGACCAATGACGTCCATCTCTCAGGTATG181TCGAGAATCTCCCAGGCCGTCCTCCCAGCCGGGACAGGAACAGACGGATACGTTGTTGTT241GACGCAACCATCGTCCCCGACCTCCTGCCACGACTGGGACACGCTGCTAGAATCTTCCAG301CGATACGCTGTTGAAACACTGGAGTTTGAAATTCAGCCAATGTGCCCCGCAAACACGGGC361GGTGGTTACGTTGCTGGCTTCCTGCCTGATCCAACTGACAACGACCACACCTTCGACGCG421CTTCAAGCAACTCGTGGTGCAGTCGTTGCCAAATGGTGGGAAAGCAGAACAGTCCGACCC481CAGTACACCCGCACGCTCCTCTGGACCTCGTCGGGAAAGGAGCAGCGTCTCATGTCACCT541GGTCGGCTGATACTCCTGTGTGTCGGCAACAACACTGATGTGGTCAACGTGTCAGTACTG601TGTCGCTGGAGTGTTCGACTGAGCGTTCCATCTCTTGAGACACCTGAGGAGACAACCGCT661CCCATCATGACACAAGGTTCCCTGTACAACGATTCCCTTTCCACAAATGACTTCAAGTCC721ATCCTCCTAGGATCCACACCACTGGACATTGCCCCTGATGGAGCAGTCTTCCAGCTGGAC781CGTCCGCTGTCCATTGACTACAGCCTTGGAACTGGAGATGTTGATCGAGCTGTCTATTGG841CACCTCAAGAAGTTTGCTGGAAATGCTGGCACACCTGCAGGCTGGTTTCGCTGGGGCATC901TGGGACAACTTCAACAAGACGTTCACAGATGGCGTTGCCTACTACTCTGATGAGCAGCCC961CGTCAAATCCTGCTGCCTGTTGGCACTGTCTGCACCAGGGTTGACTCGGAAAACTAA引物NNV-F2和NNV-R2擴增的花鱸NNV基因組的序列(777bp)1AGCCGGGACAGGAACAGACGGATACGTTGTTGTTGACGCAACCATCGTCCCCGACCTCCT61GCCACGACTGGGACACGCTGCTAGAATCTTCCAGCGATACGCTGTTGAAACACTGGAGTT121TGAAATTCAGCCAATGTGCCCCGCAAACACGGGCGGTGGTTACGTTGCTGGCTTCCTGCC181TGATCCAACTGACAACGACCACACCTTCGACGCGCTTCAAGCAACTCGTGGTGCAGTCGT241TGCCAAATGGTGGGAAAGCAGAACAGTCCGACCCCAGTACACCCGCACGCTCCTCTGGAC301CTCGTCGGGAAAGGAGCAGCGTCTCATGTCACCTGGTCGGCTGATACTCCTGTGTGTCGG361CAACAACACTGATGTGGTCAACGTGTCAGTACTGTGTCGCTGGAGTGTTCGACTGAGCGT421TCCATCTCTTGAGACACCTGAGGAGACAACCGCTCCCATCATGACACAAGGTTCCCTGTA481CAACGATTCCCTTTCCACAAATGACTTCAAGTCCATCCTCCTAGGATCCACACCACTGGA541CATTGCCCCTGATGGAGCAGTCTTCCAGCTGGACCGTCCGCTGTCCATTGACTACAGCCT601TGGAACTGGAGATGTTGATCGAGCTGTCTATTGGCACCTCAAGAAGTTTGCTGGAAATGC661TGGCACACCTGCAGGCTGGTTTCGCTGGGGCATCTGGGACAACTTCAACAAGACGTTCAC721AGATGGCGTTGCCTACTACTCTGATGAGCAGCCCCGTCAAATCCTGCTGCCTGTTGG附錄C（規(guī)范性）花鱸苗種真鯛虹彩病毒（RSIV）普通PCR檢疫方法DNAPBS10KDNA1511引物IV-F1和IV-R1是第一輪PCR引物，目的產(chǎn)物大小為570bp；引物IV-F2和IV-R2是第二輪PCR引物，目的產(chǎn)物大小為567bp。序列如下：IV-F1：5′-CTCAAACACTCTGGCTCATC-3′IV-R1：5′-GCACCAACACATCTCCTATC-3′IV-F2：5′-CGGGGGCAATGACGACTACA-3′IV-R2：5′-CCGCCTGTGCCTTTTCTGGA-3′PCR在PCRRSIVDNARSIVRSIV25μL0.25μLTaqDNA（5U/μL）；各1.0μL（10μ（IV-F1或者（IV-R1μL2.0μLdNTPMix（2.5mol/L），2.5μL10×PCR緩沖液[含Mg2+25μLDNAIV-F1/R1IV-F2/R2進行PCR95℃5min；98℃10s，58℃30s，72℃1min，共3572℃10min；4PCR陽性對照PCR擴增在570bp附近有特異性目的條帶，同時陰性對照和空白對照均無上述特異性目的條帶，實驗有效；否則實驗無效，應重新進行實驗。IV-F1/R1的PCR570bpIV-F2/R2PCR567bpRSIVIV-F1/R1的PCR570bpIV-F2/R2PCR567bp（ISKNV）IV-F2/R2。樣品的PCR擴增在570bp附近無特異性目的條帶，判定檢測結(jié)果為陰性。附錄D（規(guī)范性）引物IV-F1和IV-R1擴增花鱸RSIV基因組的序列(570bp)1CTCAAACACTCTGGCTCATCTATGTCATCGTAGTCGTCCATTCCGCTGCCCCCATCGTCA61AGCAGTGTAGGCGGTGGAGTAACATTATCGGLGTCTGTTGGCAGCTCACATGAGACACCT121ACACAAGGCTGACTGTCAGATGAGATGCGGCLGGCGTGGCATGTGACGGTCTGCACAGGG181TGAGGTTTCAGCTTGATGACAGACAAGATGGTACCGTCATACAGCACCACTCCATGCTTC241AGGACTTCACTGCTGTTGCGGCCTACATGGACCACCTCGCCATGTACAACATGCTCCGCC301AAGAGGCTGTTGCTGTCGCTTGACCAAACAATCTTCACATCCGTCTCTCGAGGTACCCCG361CAGCTGAGGGTGGTCGTCTGGTTGTCGATTTCCAGGTTATAGAAGGTGGTGGCGTGAGTA421CACGCCACAGTCAGCAACAGAAGAAGTAGCAGGGTCGCCATTGCTCATGTAGCTATGATT481CACAGTAGTCACCTATGACATGAGGATATTCAAAATTTTTATACAAGTAAAAGATGTTCA541CTGTGCTTGAGATAGGAGATGTGTTGGTGC引物IV-F2和IV-R2擴增花鱸RSIV基因組的序列(567bp)1CGGGGGCAATGACGACTACATACTGCGGCCGCAAGCTGATTGAGAAAGCCGCTCATCTCC61TCAAGA