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實驗二細(xì)菌形態(tài)和結(jié)構(gòu)觀察(Ⅰ)(細(xì)菌的簡單染色和革蘭氏染色)一、實驗?zāi)康?、觀察細(xì)菌菌落征。2、掌握細(xì)菌簡單染色、革蘭氏染色技術(shù)。3、在油鏡下觀察細(xì)菌個體形態(tài)。二、實驗原理1、細(xì)菌菌落特征2、細(xì)菌基本形態(tài)3、細(xì)菌革蘭氏染色機(jī)理共有特征:濕潤,較光滑,較透明,較粘稠,易挑取,質(zhì)地均勻,顏色多樣,菌落正反面及邊緣與中央顏色一致。特有特征:有鞭毛:菌落大而平坦,邊緣多缺刻、不規(guī)則有糖被:菌落大,透明,呈蛋清狀有芽孢:菌落外觀粗糙,“干燥”,不透明且表面多褶基本形態(tài):球狀,桿狀,螺旋狀。其它形態(tài):
星形,方形,帶柄狀,畸形,衰退形G+:細(xì)胞壁厚,內(nèi)肽聚糖含量高,且交聯(lián)度大,網(wǎng)孔小,不含脂類。G-
:細(xì)胞壁薄,內(nèi)肽聚糖含量低,交聯(lián)度小,網(wǎng)孔大,脂類含量高。革蘭氏染色過程:初染→媒染→脫色→復(fù)染。三、實驗材料1、菌種:大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、金黃色葡萄球菌(S.aureus)(培養(yǎng)18~24h的菌落平板各一個)。2、染液(1)簡單染色:呂氏美藍(lán)染液或齊氏石炭酸復(fù)紅染液。(2)革蘭氏染液:草酸銨結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、95%乙醇、番紅染液。3、其他物品:普通光學(xué)顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、無菌水、吸水紙、香柏油、香柏油、二甲苯、擦鏡紙。細(xì)菌革蘭氏染色過程涂片→干燥→固定→初染(草酸銨結(jié)晶紫染色1min)→水洗→媒染(碘液沖洗后覆蓋1min)→水洗→脫色(95%乙醇脫色至流下乙醇無色為止)→立即用水沖洗→復(fù)染(番紅染色2~3min)→水洗→干燥→鏡檢染色結(jié)果金黃色葡萄球菌革蘭氏染色結(jié)果染色結(jié)果大腸桿菌革蘭氏染色結(jié)果染色結(jié)果金黃色葡萄球菌和大腸桿菌混合菌樣的革蘭氏染色結(jié)果染色結(jié)果枯草芽孢桿菌革蘭氏染色結(jié)果實驗要求每個同學(xué)必須做枯草芽孢桿菌簡單染色涂片。每組同學(xué)必須做金黃色葡萄球菌或大腸桿菌革蘭氏染色涂片。每組同學(xué)必須做枯草芽孢桿菌革蘭氏染色涂片。五、實驗報告1、記錄三種菌的革蘭氏染色結(jié)果,繪出菌體細(xì)胞形態(tài)。2、要得到正確的革
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