2025屆上海市閘北區(qū)高三5月仿真卷生物試題含解析

2025屆上海市閘北區(qū)高三5月仿真卷生物試題注意事項(xiàng)：1．答題前，考生先將自己的姓名、準(zhǔn)考證號填寫清楚，將條形碼準(zhǔn)確粘貼在考生信息條形碼粘貼區(qū)。2．選擇題必須使用2B鉛筆填涂；非選擇題必須使用0．5毫米黑色字跡的簽字筆書寫，字體工整、筆跡清楚。3．請按照題號順序在各題目的答題區(qū)域內(nèi)作答，超出答題區(qū)域書寫的答案無效；在草稿紙、試題卷上答題無效。4．保持卡面清潔，不要折疊，不要弄破、弄皺，不準(zhǔn)使用涂改液、修正帶、刮紙刀。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項(xiàng)符合題目要求）1．如圖為生態(tài)系統(tǒng)能量流動示意圖，下列敘述錯誤的是（）A．流經(jīng)該生態(tài)系統(tǒng)的總能量是圖中的N2B．N3是生產(chǎn)者用于生長和繁殖的能量C．蜣螂所利用的能量N6屬于初級消費(fèi)者同化的能量D．第一和第二營養(yǎng)級之間的能量傳遞效率為N5/N2×100%2．下列關(guān)于細(xì)胞呼吸的敘述，正確的是（）A．糖酵解過程產(chǎn)生的還原氫均與氧氣結(jié)合生成水B．糖酵解過程中葡萄糖的大部分能量以熱能形式散失C．細(xì)胞需氧呼吸產(chǎn)生的CO2中的氧來自葡萄糖和水D．骨骼肌細(xì)胞呼吸產(chǎn)生的CO2來自線粒體和細(xì)胞溶膠3．螺旋現(xiàn)象普遍存在于多種物質(zhì)或生物結(jié)構(gòu)中。下列敘述正確的是（）A．染色體解螺旋形成染色質(zhì)的同時，DNA分子的雙鏈也隨之解螺旋B．藤本植物的卷須常螺旋狀纏繞在攀附物上，從根本上是由于多種植物激素對生命活動調(diào)控的結(jié)果C．蛋白質(zhì)常螺旋形成一定的空間結(jié)構(gòu)，在其溶液中加入食鹽后會看到有白色絮狀物出現(xiàn)，此時蛋白質(zhì)的螺旋結(jié)構(gòu)并未被破壞D．單鏈RNA的局部區(qū)域會形成螺旋結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)中的堿基互補(bǔ)配對方式與雙鏈DNA相同4．甲圖為種群數(shù)量增長的“S”型曲線，乙圖為種群增長速率曲線。下列敘述正確的是（）A．T時刻，對應(yīng)的甲曲線中種群數(shù)量為KB．防治害蟲時，應(yīng)控制其數(shù)量，使之保持在K/2處C．漁民捕魚時，應(yīng)將某種魚類種群數(shù)量控制在A點(diǎn)左右D．利用性外激素引誘雄蟲，可直接影響昆蟲出生率5．對如圖所示實(shí)驗(yàn)的分析，正確的是（）A．子代A系鼠的漿細(xì)胞裂解了移植的B系鼠皮膚B．C系鼠的皮膚沒有引起子代A系鼠的免疫應(yīng)答C．B系鼠和C系鼠的皮膚對于子代A系鼠是抗體D．注射淋巴細(xì)胞使子代A系鼠的基因型發(fā)生改變6．圖為膝反射示意圖，下列說法正確的是（）A．膝反射的反射中樞是脊髓中的中間神經(jīng)元②B．膝反射活躍時，中間神經(jīng)元②興奮，神經(jīng)元④受到抑制C．膝反射的反射弧只有兩個神經(jīng)元組成，不包含其它結(jié)構(gòu)D．刺激③，肌肉甲收縮，完成一次反射活動二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）青蒿素能夠讓胰島A細(xì)胞“變身”為胰島B細(xì)胞，這一研究有望成功治愈Ⅰ型糖尿病。請回答下列問題：（1）Ⅰ型糖尿病即胰島素依賴型糖尿病，致病原因可能是病毒感染誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生異常的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致胰島B細(xì)胞損傷，引起機(jī)體胰島素含量顯著______，使血糖濃度______。（2）為了驗(yàn)證青蒿素的作用，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)如下：①甲組用含適量青蒿素的動物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)適量胰島A細(xì)胞，乙組用與甲組等量的不含青蒿素的動物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)等量胰島A細(xì)胞，為了使該實(shí)驗(yàn)更準(zhǔn)確更有說服力，還設(shè)置了丙組，即用________________________________________________________；②將甲、乙、丙三組實(shí)驗(yàn)均放在37℃恒溫條件下培養(yǎng)；③培養(yǎng)一段時間后，檢測各組培養(yǎng)液中的胰島素含量。預(yù)期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是_________________________________________________。8．（10分）食用泡菜是四川人的傳統(tǒng)飲食習(xí)慣，在自貢幾乎家家都備有泡菜壇子自制泡菜。請回答下列問題：(1)制作泡菜時，所用鹽水需煮沸，其目的是___________；在冷卻后的鹽水中加入少量陳泡菜水是為了_______________(2)泡菜腌制過程中若泡菜壇有沙眼，常導(dǎo)致腌制的蔬菜臭而不酸，其原因可能是___________(3)泡菜美味但卻不宜多吃，因?yàn)樵陔缰婆莶说倪^程中，蔬菜中的硝酸鹽會被微生物還原成_。測定其含量的原理是：在鹽酸酸化條件下，該物質(zhì)和對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N一1一萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成_________________。(4)某同學(xué)欲用新鮮的泡菜液分離純化乳酸菌，應(yīng)首先用_____________對泡菜液進(jìn)行梯度稀釋，須進(jìn)行梯度稀釋的原因是____________________。9．（10分）在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以放出熒光。熒光素酶及其合成基因在生物研究中有著廣泛的應(yīng)用。請回答下列問題：（1）熒光素酶基因可以從基因文庫中獲取，也可以通過________方法得到，再利用PCR技術(shù)擴(kuò)增即可，擴(kuò)增熒光素酶基因利用的原理是__________________。（2）在基因工程操作過程中，需要用________酶和________酶構(gòu)建基因表達(dá)載體，基因表達(dá)載體要有________，以便篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞。（3）熒光素酶基因也可以作為目的基因轉(zhuǎn)入某些動植物細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生熒光素酶。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，目前常用的目的基因載體是農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，目的基因需插入到該基因載體的________上，然后再轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞中。將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞的技術(shù)中，應(yīng)用最多的是_______。10．（10分）基因打靶技術(shù)是建立在基因同源重組技術(shù)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)的基礎(chǔ)上而發(fā)展起來的一種分子生物學(xué)技術(shù)。請結(jié)合圖示回答下列有關(guān)問題：注：neor是新霉素抗性基因；tk基因的表達(dá)可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。（1）將目的基因和與細(xì)胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到__________上，構(gòu)建打靶載體（基因表達(dá)載體）。（2）打靶載體測序驗(yàn)證正確后，利用__________酶，將之線性化，以提高重組率。通過__________技術(shù)將打靶載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，這樣打靶載體和與細(xì)胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有機(jī)會發(fā)生同源重組。（3）為了篩選發(fā)生同源重組的細(xì)胞，可在培養(yǎng)液中加入__________。最后還需要通過__________技術(shù)鑒定同源重組的細(xì)胞（去除靶基因），將這樣的細(xì)胞通過動物細(xì)胞培養(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細(xì)胞。其中，暫時不用的細(xì)胞進(jìn)行__________保存。（4）將打靶成功的細(xì)胞注射入小鼠囊胚，移植到同種、__________的母鼠體內(nèi)，一段時間后對受體母鼠進(jìn)行妊娠檢查，確保其生下嵌合體小鼠。這種嵌合體小鼠長大后，體內(nèi)同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因。如果某些小鼠的__________（填“體細(xì)胞”或“生殖細(xì)胞”）恰巧被“修飾”過了，則它們的雜交后代中，就可能出現(xiàn)基因完全被“修飾”過的小鼠。11．（15分）某草原中有野生黃羊和草原鼠，也有它們的天敵草原狼。近年來，由于人類的獵殺，狼的數(shù)量銳減，野生黃羊的數(shù)量開始上升，但同時草原鼠泛濫成災(zāi)，草場極度退化，結(jié)果又使得野生黃羊數(shù)量驟降。請回答下列問題：（1）草原狼的存在，在客觀上對野生黃羊的進(jìn)化起促進(jìn)作用，理由是________________________。（2）草原鼠和野生黃羊的種間關(guān)系是_______________。草原狼的存在對該草原群落的穩(wěn)定起到了重要作用，原因是______________________________________________________。（3）草原狼一般不會將所有的野生黃羊和草原鼠吃掉，否則自己也無法生存，這就是“精明的捕食者”策略。該策略對人類利用野生生物資源的啟示是_____________________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項(xiàng)符合題目要求）1、C【解析】

題圖分析：N2、N5分別表示生產(chǎn)者光合作用固定的能量、初級消費(fèi)者同化的能量，能量傳遞效率為該營養(yǎng)級的同化量/上一營養(yǎng)級的同化量×100%，N3為生產(chǎn)者用于生長發(fā)育繁殖的能量，N4為初級消費(fèi)者的攝入量，據(jù)此答題?！驹斀狻緼、流經(jīng)生態(tài)系統(tǒng)的總能量為生產(chǎn)者所固定的太陽能，即為圖中的N2，A正確；B、同化量等于呼吸量+生長、發(fā)育和繁殖量，因此N3是生產(chǎn)者用于生長、發(fā)育和繁殖的能量，B正確；C、蜣螂所利用的能量N6屬于生產(chǎn)者同化的能量，C錯誤；D、據(jù)分析可知，第一和第二營養(yǎng)級之間的能量傳遞效率為N5/N2×100%，D正確。故選C。2、C【解析】

（1）需氧呼吸全過程：第一階段：在細(xì)胞溶膠中，一分子葡萄糖形成兩分子丙酮酸、少量的[H]和少量能量，這一階段不需要氧的參與；第二階段：丙酮酸進(jìn)入線粒體的基質(zhì)中，分解為二氧化碳、大量的[H]和少量能量；第三階段：在線粒體的內(nèi)膜上，[H]和氧氣結(jié)合，形成水和大量能量，這一階段需要氧的參與。（2）厭氧呼吸全過程：第一階段：在細(xì)胞溶膠中，與有氧呼吸的第一階段完全相同，即一分子的葡萄糖在酶的作用下分解成兩分子的丙酮酸，過程中釋放少量的[H]和少量能量；第二階段：在細(xì)胞溶膠中，丙酮酸在不同酶的催化下，分解為酒精和二氧化碳，或者轉(zhuǎn)化為乳酸，無氧呼吸第二階段不產(chǎn)生能量?！驹斀狻緼、需氧呼吸過程中，糖酵解過程產(chǎn)生的還原氫均與氧氣結(jié)合生成水，而無氧呼吸過程中，糖酵解過程產(chǎn)生的還原氫與丙酮酸結(jié)合生成酒精和二氧化碳或乳酸，沒有水的生成，A錯誤；B、糖酵解過程中葡萄糖的大部分能量儲存在丙酮酸中，只有少部分能量以熱能形式散失，B錯誤；C、細(xì)胞需氧呼吸第二階段，丙酮酸與水反應(yīng)生成二氧化碳和[H]，而丙酮酸來自于葡萄糖的分解，因此產(chǎn)生的二氧化碳中的氧來自葡萄糖和水，C正確；D、骨骼肌細(xì)胞需氧呼吸可以產(chǎn)生二氧化碳，而厭氧呼吸只能產(chǎn)生乳酸，因此骨骼肌細(xì)胞產(chǎn)生二氧化碳的場所只有線粒體，D錯誤。故選C。3、C【解析】

染色體由DNA和蛋白質(zhì)組成，DNA含有2條脫氧核苷酸鏈?！驹斀狻緼、染色體解螺旋形成染色質(zhì)發(fā)生在分裂的末期，此時DNA分子的雙鏈不發(fā)生解螺旋，A錯誤；B、藤本植物的卷須常螺旋狀纏繞在攀附物上，從根本上是基因組在一定時間和空間上程序性表達(dá)的結(jié)果，B錯誤；C、鹽析不破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，C正確；D、單鏈RNA的局部區(qū)域會形成螺旋結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)中的堿基互補(bǔ)配對方式為A-U、G-C，雙鏈DNA中的堿基配對方式為A-T、C-G，D錯誤。故選C。4、C【解析】

根據(jù)題意和圖示分析可知：甲圖中是S型曲線的示意圖，A點(diǎn)時種群數(shù)量達(dá)到K/2，B點(diǎn)達(dá)到K值，BC段種群數(shù)量在K值附近波動，乙圖在T時刻種群增長速率達(dá)到最大，種群數(shù)量為K/2?！驹斀狻緼、T時刻，種群增長速率最快，種群數(shù)量為K/2，A錯誤；B、因?yàn)镵/2時種群增長速率最大，所以防治害蟲時要將害蟲數(shù)量控制在K/2以前，B錯誤；C、捕魚時應(yīng)該將種群數(shù)量控制在K/2（A點(diǎn)）左右，因?yàn)榇藭r種群增長速率最大，C正確；D、利用性外激素引誘雄蟲改變了昆蟲的性別比例，從而達(dá)到間接影響昆蟲出生率的目的，D錯誤。故選C。本題考查種群增長曲線和數(shù)量變化規(guī)律的相關(guān)知識，重點(diǎn)掌握K值和K/2的含義。5、B【解析】

據(jù)圖分析，抽取C系鼠的淋巴細(xì)胞，注射給A系鼠的胚胎，形成的子代A系鼠，被移植C系鼠的皮膚，未出現(xiàn)免疫排斥現(xiàn)象；而移植B系鼠的皮膚，會發(fā)生免疫排斥現(xiàn)象?！驹斀狻緼、子代A系鼠的效應(yīng)T細(xì)胞裂解了移植的B系鼠的皮膚，漿細(xì)胞不能裂解移植的皮膚細(xì)胞，A錯誤；B、子代A系鼠對C系鼠的皮膚沒有發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，說明C系鼠的皮膚沒有引起子代A系鼠的免疫應(yīng)答，B正確；C、B系鼠和C系鼠的皮膚對于子代A系鼠是抗原，C錯誤；D、注射淋巴細(xì)胞使子代A系鼠出現(xiàn)了C系鼠的淋巴細(xì)胞，但沒有改變A系鼠的基因型，D錯誤。故選B。6、B【解析】

反射是神經(jīng)系統(tǒng)的基本形式，而反射弧是反射的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，反射弧由感受器、傳入神經(jīng)元、反射中樞、傳出神經(jīng)元及效應(yīng)器五大部分組成。脊髓為低級的反射中樞，大腦皮層為高級的反射中樞，產(chǎn)生感覺的部位在大腦皮層的感覺區(qū)。兩個神經(jīng)元之間或神經(jīng)元與肌肉之間的接點(diǎn)叫突觸，突觸由突觸前膜、突觸間隙和突觸后膜組成，突觸前膜可以釋放興奮性或抑制性的神經(jīng)遞質(zhì)，使得下一個神經(jīng)元或肌肉興奮或抑制?！驹斀狻緼、膝反射的反射中樞是傳入神經(jīng)元①和傳出神經(jīng)元③之間的突觸，A錯誤；B、膝反射活躍時，抑制性中間神經(jīng)元②興奮，釋放抑制性遞質(zhì)，使神經(jīng)元④受抑制，肌肉乙（屈?。┎皇湛s，從而保持運(yùn)動的協(xié)調(diào)性，B正確；C、反射弧還包括效應(yīng)器、感受器、反射中樞，膝反射的效應(yīng)器是股四頭肌，C錯誤；D、刺激③使肌肉甲收縮，沒有完整的反射弧參與，不屬于反射，D錯誤。故選B。二、綜合題：本大題共4小題7、減少升高與甲組等量的不含青蒿素的動物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)等量胰島B細(xì)胞甲組和丙組培養(yǎng)液中能檢測到胰島素，乙組培養(yǎng)液中檢測不到胰島素【解析】

1、胰島素是唯一能降低血糖的激素，其作用分為兩個方面：促進(jìn)血糖氧化分解、合成糖原、轉(zhuǎn)化成非糖類物質(zhì)；抑制肝糖原的分解和非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)化成葡萄糖。升高血糖的激素有胰高血糖素，只有促進(jìn)效果沒有抑制作用，即促進(jìn)肝糖原的分解和非糖類物質(zhì)轉(zhuǎn)化。2、本實(shí)驗(yàn)是驗(yàn)證青蒿素的作用，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)遵循等量原則，甲組為實(shí)驗(yàn)組，乙組和丙組為對照組，設(shè)置丙組的作用是作為對照，用以說明胰島素是胰島B細(xì)胞產(chǎn)生的?！驹斀狻浚?）胰島素是胰島B細(xì)胞產(chǎn)生的。I型糖尿病即胰島素依賴型糖尿病，致病原因可能是病毒感染誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生異常的免疫應(yīng)答，導(dǎo)致胰島B細(xì)胞損傷，引起機(jī)體胰島素含量顯著減少，使血糖濃度升高。（2）青蒿素能夠讓胰島A細(xì)胞“變身”為胰島B細(xì)胞，為了驗(yàn)證青蒿素的作用，應(yīng)設(shè)計(jì)三組實(shí)驗(yàn)。①根據(jù)實(shí)驗(yàn)的對照性原則和控制單一變量原則，乙組和丙組為對照組，甲組用含適量青蒿素的動物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)適量胰島A細(xì)胞，乙組用與甲組等量的不含青蒿素的動物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)等量胰島A細(xì)胞，丙組則用與甲組等量的不含青蒿素的動物細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)等量胰島B細(xì)胞，用以說明胰島素是胰島B細(xì)胞產(chǎn)生的。③預(yù)期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是甲組和丙組培養(yǎng)液中能檢測到胰島素，乙組培養(yǎng)液中檢測不到胰島素。本題考查血糖調(diào)節(jié)的相關(guān)知識，旨在考查考生的實(shí)驗(yàn)探究能力，意在考查考生理解所學(xué)知識的要點(diǎn)，把握相關(guān)知識之間的遷移能力。8、殺滅微生物和去掉鹽水中的溶氧提供乳酸菌菌種有氧條件下乳酸菌不發(fā)酵，而其它雜菌繁殖后導(dǎo)致蔬菜腐敗發(fā)臭亞硝酸鹽玫瑰紅染料無菌水泡菜液中乳酸菌的濃度較高，直接培養(yǎng)很難分離到單個菌落【解析】

制作泡菜所用微生物是乳酸菌，實(shí)驗(yàn)原理為：乳酸菌在無氧條件下，將糖分解為乳酸；利用乳酸菌制作泡菜的過程中會引起亞硝酸鹽的含量的變化；溫度過高，食鹽用量不足10%、腌制時間過短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加．一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開始下降；（3）測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量?！驹斀狻浚?）制作泡菜時，所用鹽水需煮沸，其目的是殺滅微生物和去掉鹽水中的溶氧；在冷卻后的鹽水中加入少量陳泡菜液的目的是增加乳酸菌數(shù)量。（2）乳酸菌是厭氧菌，若泡菜腌制過程中若泡菜壇有沙眼，導(dǎo)致氧氣含量增加，有氧條件下乳酸菌不發(fā)酵，而其它雜菌繁殖后導(dǎo)致蔬菜腐敗發(fā)臭。（3）蔬菜中的硝酸鹽會被微生物還原成亞硝酸鹽；亞硝酸鹽的測定原理是：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料。（4）泡菜液中乳酸菌的濃度較高，直接培養(yǎng)很難分離到單個菌落，因此需要用無菌水對泡菜液進(jìn)行梯度稀釋。9、人工合成DNA（雙鏈）復(fù)制限制DNA連接標(biāo)記基因T-DNA顯微注射技術(shù)【解析】

1、基因工程的工具：（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒2、基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣，將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）熒光素酶基因?qū)儆谀康幕?。目的基因可以從基因文庫中獲取，也可以通過人工合成方法得到，再利用PCR技術(shù)擴(kuò)增即可。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的原理是DNA雙鏈復(fù)制。（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時，需要用限制酶分別切割目的基因和載體，然后用DNA連接酶進(jìn)行連接，基因表達(dá)載體要有標(biāo)記基因，以便篩選出含有目的基因的受體細(xì)胞。（3）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，目前常用的目的基因載體是農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，目的基因需插入到該基因載體的T-DNA上，然后再轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞中。將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞的技術(shù)中，應(yīng)用最多的是顯微注射技術(shù)。本題結(jié)合基因工程的原理及技術(shù)，要求考生識記基因工程的原理、操作工具、操作步驟及相關(guān)應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查。10、載體（或質(zhì)粒）限制顯微注射新霉素和丙氧鳥苷DNA分子雜交液氮（或冷凍）生理狀態(tài)相同（或經(jīng)同期發(fā)情處理）生殖細(xì)胞【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）分析題圖可知，將目的基因和與細(xì)胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到載體（或質(zhì)粒）上，構(gòu)建打靶載體（基因表達(dá)載體）。（2）打靶載體測序驗(yàn)證正確后，利用限制酶，將之線性化，以提高重組率。通過顯微注射技術(shù)導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，這樣打靶載體與細(xì)胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有幾率發(fā)生同源重組。（3）neor是新霉素抗性基因，tk基因的表達(dá)可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，因此為了篩選發(fā)生同源重組的細(xì)胞，可在培養(yǎng)液中加入新霉素和丙氧鳥苷。最后還需要通過DNA分子雜交技術(shù)鑒定同源重組的細(xì)胞（去除靶基因），將這樣的細(xì)胞通過動物細(xì)胞（或克?。┡囵B(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細(xì)胞。其中，暫時不用的細(xì)胞進(jìn)行液氮（或冷凍）保存。（4）將打靶成功的細(xì)胞注射入小鼠囊胚，移植到同種、生理狀態(tài)相同（或經(jīng)同期發(fā)情）的母鼠體內(nèi)，一段時間后對受體母鼠進(jìn)行妊娠檢查