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34TechnicalregulationfornestedPCRdetectionmethodforporcinecircovirustypI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定蕭縣畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)服務(wù)中心、岳西縣畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)服務(wù)中心、望江縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣1豬圓環(huán)病毒3型套式PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)程GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范《病死及病害動(dòng)物無(wú)害化處理技術(shù)規(guī)范》(農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2013.1豬圓環(huán)病毒屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬,根據(jù)其致病性、抗原性及基因組序列分為1型、2型和3型等基因型,豬圓環(huán)病毒3型是2015年發(fā)4主要儀器設(shè)備4.2臺(tái)式高速冷凍離心機(jī):可控溫至4℃,離心力12000g以上4.3全自動(dòng)組織快速碾磨儀。4,4渦旋振蕩器4.5冰箱:2℃~8℃、-20℃、-70℃三種。4.7水平電泳槽。4.8凝膠成像系統(tǒng)2):5.7無(wú)水乙醇:分析純。5.9DNA分子量標(biāo)準(zhǔn):DL2000MaCapCap按照NY/T541的規(guī)定執(zhí)行。病死g~10g活豬采集EDTA抗凝全血(5m7.2運(yùn)輸與保存3),8.2抗凝血樣品8.3糞便、口鼻拭子樣品10.1反應(yīng)體系配制Mix8811410.2反應(yīng)條件設(shè)定第1輪、第2輪PCR反應(yīng)條件均為:95℃預(yù)變性5min后,35個(gè)循環(huán)擴(kuò)增(95℃變性30s、58℃),10.3電泳10.4結(jié)果觀察);11.2結(jié)果判定在試驗(yàn)成立的條件下,如果檢測(cè)樣品PCR產(chǎn)物電泳后未出現(xiàn)412bp大小特異性目的條帶,判為陰12.2實(shí)驗(yàn)廢棄物處理56A.7加入20
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