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歡迎走進現(xiàn)代生物科技專題課堂
細@胞@工@程新化上梅中學(xué)康力杰植物組織培養(yǎng)VS比較項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理細胞的全能性細胞的增殖培養(yǎng)基(半)固體、營養(yǎng)、植物激素液體、營養(yǎng)、動物血清結(jié)果培養(yǎng)成植株培育成細胞系(株)培養(yǎng)目的快速繁殖,培育無病毒植株。獲得細胞的產(chǎn)物等思考:植物細胞工程中,除了植物組織培養(yǎng)技術(shù)外,還有什么技術(shù)?過程如何?動物細胞培養(yǎng)溫故而知新——植物細胞雜交(馬鈴薯番茄)融合的原生質(zhì)體AB再生出細胞壁植物體細胞的雜交雜種細胞AB雜種植株脫分化愈傷組織再分化植物組織培養(yǎng)原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A去壁去壁人工誘導(dǎo)植物細胞A植物細胞B動物細胞可以融合嗎?如果可以,兩者相同嗎?1、無菌、無毒的環(huán)境(添加一定量的抗生素,定期更換培養(yǎng)液)2、營養(yǎng)(葡萄糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、動物血清、血漿等。)3、溫度和PH
36.5+0.5度;PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境:
O2和CO2(95%空氣和5%CO2
)補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)動物細胞培養(yǎng)條件動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液10代細胞50代細胞無限傳代單個細胞加培養(yǎng)液(分解彈性纖維)胰蛋白酶剪碎過程:細胞株細胞系遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變2.2.2動物細胞融合帶著問題走進課堂?2.2動物細胞工程自主閱讀,p52第2自然段,思考下列問題:1、什么叫動物細胞融合
cellfusion?(概念要點)兩個細胞正在融合受精作用①
兩個或多個動物細胞②
一個細胞(雜交單核細胞)動物細胞融合2、動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同?兩者的融合過程是否也一樣?提醒:有什么異同點呢?
誘導(dǎo)細胞融合物質(zhì):誘導(dǎo)劑:仙臺病毒、聚乙二醇PEG
誘導(dǎo)細胞融合的仙臺病毒必須滅活。
思考討論:為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活?不滅活行嗎?因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布,細胞膜打開,細胞發(fā)生融合,不滅活的話會感染細胞,而不能誘導(dǎo)細胞融合。比較植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合細胞融合原理細胞融合的方法誘導(dǎo)方法用途獲得雜種植株細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞的全能性去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合物理(離心、振蕩、電刺激)化學(xué)(聚乙二醇)物理、化學(xué)方法(同左)滅活的病毒
3、動物細胞融合技術(shù)的發(fā)展簡史告訴我們:科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的。那么,實現(xiàn)動物細胞融合有什么意義呢?打破生殖隔離,使遠緣雜交成為可能;廣泛應(yīng)用多個學(xué)科領(lǐng)域;重要用途:制備單克隆抗體。1、抗體1.1概念:
抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白
Ig。1.2來源:
B淋巴細胞。單克隆抗體McAb
B淋巴細胞與抗體的關(guān)系:
1.B淋巴細胞受抗原刺激后,可以產(chǎn)生抗體。
2.動物體內(nèi)的B淋巴細胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體,每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。
3.每一個淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗體。自主閱讀P52:傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么?怎樣解決這個問題?2、單克隆抗體McAb(概念)
由單個B淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖(克?。?,形成基因型相同的細胞群,這一細胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。
特點:特異性強、靈敏度高、純度高、產(chǎn)量大。
如何大量生產(chǎn)單克隆抗體?利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細胞無限增殖的特性利用細胞融合的技術(shù)將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細胞如何篩選?融合方式?生產(chǎn)單克隆抗體需要那些物質(zhì)和技術(shù)呢?
3、單克隆抗體McAb制備過程專一抗體檢驗陽性單克隆抗體
注射抗原B淋巴細胞骨髓瘤細胞細胞融合雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)篩選,繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔篩選創(chuàng)始人:米爾斯坦思考問題:1、本過程利用了哪些原理?免疫原理,細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合?這樣融合成的雜交瘤細胞,繼承了雙親細胞的遺傳物質(zhì),不僅具有B細胞分泌抗體的能力,而且還有無限增殖的本領(lǐng),因而可以獲得大量單克隆抗體?4、單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比,單克隆抗體產(chǎn)量高,特異性強,靈敏度高,優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有:1、臨床診斷、治療疾病。2、作為載體,運載抗癌藥物,形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤。課堂小結(jié)動物細胞融合過程單克隆抗體制備過程兩個過程三個“一”一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法--滅活病毒一個新細胞--雜交瘤細胞一個優(yōu)勢--單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢你記住了嗎?1、動物細胞融合的目的中最重要的是()
A.克服遠源雜交不親和
B.制備單克隆抗體
C.培育新物種
D.生產(chǎn)雜種細胞2、動物細胞融合過程中所用的誘導(dǎo)劑——滅活的病毒,抗原性和感染力的有無是(
)
A.失去抗原性,具有感染力
B.具有抗原性,也具有感染力
C.失去抗原性,也失去感染力
D.具有抗原性,失去感染力B課堂練習(xí)D3、單克隆抗體是指(
)A.單個骨髓瘤細胞增殖產(chǎn)生的抗體
B.單個B淋巴細胞增殖產(chǎn)生的抗體C.單個雜交瘤細胞增殖產(chǎn)生的高度單一的抗體D.單個抗體通過克隆化,產(chǎn)生大量抗體4、生產(chǎn)單克隆抗體時,在培養(yǎng)液中加入某種試劑能篩選出雜交瘤細胞,因為該試劑(
)A.能抑制淋巴細胞和雜交瘤細胞的DNA復(fù)制B.能阻止淋巴細胞的原癌基因被激活C.選擇性抑制骨髓瘤細胞的DNA復(fù)制D.能阻止雜交瘤細胞核糖體上所有蛋白質(zhì)的合成CC5、“生物導(dǎo)彈”是指(
)A.單克隆抗體B.雜交瘤細胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細胞
D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物D6、科學(xué)家們用小鼠骨髓瘤細胞與
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