維生素B1鑒別(趙云騰制作)

維生素B1的質(zhì)量分析組長(zhǎng)：趙云騰組員：閆雪娜齊云環(huán)

1.維生素B1概述

2.維生素B1理化性質(zhì)

3.維生素B1鑒別試驗(yàn)4.維生素B1片含量測(cè)定維生素B1概述維生素B1主要存在于種子的外皮核賠亞種，如米糠和麩皮中含量很豐富，在酵母菌中含量也極豐富。瘦肉、白菜和芹菜中含量也較豐富。缺乏維生素B1時(shí)，可引起多種神經(jīng)炎癥，如腳氣病菌。維生素B1理化性質(zhì)維生素B1（鹽酸硫胺）：

氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿)氨基嘧啶環(huán)噻唑環(huán)維生素B1為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；有微弱的特臭；味苦；干燥在空氣中訊即吸收約4﹪的水分。易溶于水，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。水溶液顯酸性，且在酸性溶液中穩(wěn)定。維生素B1中的噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可開環(huán)，在與嘧啶環(huán)上的氨基環(huán)合，經(jīng)鐵氰化鉀等氧化劑氧化生成具有熒光的硫色素。維生素B1分子結(jié)構(gòu)中含有雜環(huán)，可與硅鎢酸等生物堿沉淀試劑反應(yīng)生成沉淀。維生素B1分子結(jié)構(gòu)中具有共軛雙鍵，對(duì)紫外光有吸收。維生素B1理化性質(zhì)維生素B1鑒別試驗(yàn)氯化物反應(yīng)硫色素反應(yīng)沉淀反應(yīng)紅外光譜硝酸鉛反應(yīng)紫外吸收光譜方法維生素B1（5mg）氫氧化鈉（2.5mL）鐵氰化鉀（0.5mL）正丁醇（5mL）藍(lán)色熒光熒光消失溶解＋強(qiáng)力振搖H＋OH－放置分層硫色素反應(yīng)鑒別方法：維生素B1＋NaOHNa2S共熱黃經(jīng)棕Na2S＋Pb(NO3)2PbS2黑色硝酸鉛反應(yīng)紫外吸收光譜紫外分光光度計(jì)光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示紫外吸收光譜基本組成：（動(dòng)畫）1.光源

在整個(gè)紫外光區(qū)或可見光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。

可見光區(qū)：鎢燈作為光源，其輻射波長(zhǎng)范圍在320～2500nm。

紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射185～400nm的連續(xù)光譜。紫外吸收光譜

2.單色器將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器；準(zhǔn)光裝置：透鏡或返射鏡使入射光成為平行光束；

色散元件：將復(fù)合光分解成單色光；棱鏡或光柵；

聚焦裝置：透鏡或凹面反射鏡，將分光后所得單色光聚焦至出射狹縫；⑤出射狹縫。紫外吸收光譜3.樣品室

樣品室放置各種類型的吸收池（比色皿）和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。在紫外區(qū)須采用石英池，可見區(qū)一般用玻璃池。4.檢測(cè)器

利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變成可測(cè)的電信號(hào)，常用的有光電池、光電管或光電倍增管。5.結(jié)果顯示記錄系統(tǒng)

檢流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng)控制和結(jié)果處理紫外吸收光譜分光光度計(jì)的類型:1.單光束

簡(jiǎn)單，價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。2.雙光束

自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。紫外吸收光譜3.雙波長(zhǎng)將不同波長(zhǎng)的兩束單色光(λ1、λ2)快束交替通過(guò)同一吸收池而后到達(dá)檢測(cè)器。產(chǎn)生交流信號(hào)。無(wú)需參比池?！?/p>

=1～2nm。兩波長(zhǎng)同時(shí)掃描即可獲得導(dǎo)數(shù)光譜。紫外吸收光譜分光光度計(jì)原理：

物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量。

紫外吸收光譜操作步驟及使用方法：準(zhǔn)備工作：

將以裝好的儀器接入220V的市電，開機(jī)，同時(shí)開啟所需光源（鎢燈和氘燈，不需要用氘燈時(shí)請(qǐng)不要打開氘燈開關(guān)）。開機(jī)后儀器顯示800-3，表示主機(jī)進(jìn)入預(yù)熱十分鐘。

預(yù)熱完畢后，顯示器將顯示HELLO，表示儀器可以進(jìn)入工作狀態(tài)。（在預(yù)熱過(guò)程中，如果想直接進(jìn)入工作狀態(tài)，可以按STOP鍵進(jìn)入HELLO工作狀態(tài)。儀器要求開機(jī)后預(yù)熱十分鐘以使儀器工作更穩(wěn)定。）儀器進(jìn)入工作狀態(tài)后，首先根據(jù)實(shí)際測(cè)量的需求調(diào)節(jié)好光源、波長(zhǎng)、狹縫、濾色片。選擇后即可準(zhǔn)備好樣品進(jìn)行各種測(cè)量。根據(jù)所需的測(cè)量進(jìn)入相應(yīng)的測(cè)量功能（T、A、C）。測(cè)量工作：1.確定工作波長(zhǎng)2.建立工作曲線3.測(cè)試帶測(cè)樣品紫外吸收光譜測(cè)量樣品透射比（T）：

將參比、樣品放入樣品池，拉動(dòng)樣品池拉桿使參比的比色皿對(duì)準(zhǔn)光線通道，按100%T鍵（調(diào)百），待顯示ｔ100.0，然后打開樣品池蓋，按Clear鍵（調(diào)零），待顯示ｔ0000，蓋上樣品池蓋再次按100%T鍵，待顯示ｔ100.0，拉動(dòng)樣品池拉桿使樣品的比色皿對(duì)準(zhǔn)光線通道，按Enter鍵后等待顯示結(jié)果。

紫外吸收光譜測(cè)量樣品吸光值（A）：

將參比、樣品放入樣品池，拉動(dòng)樣品池拉桿使參比的比色皿對(duì)準(zhǔn)光線通道，按ABSO鍵，待顯示A0.000，然后打開樣品池蓋，按Clear鍵，待顯示A0000，蓋上樣品池蓋再次按ABSO鍵，待顯示A0.000，拉動(dòng)樣品池拉桿使樣品的比色皿對(duì)準(zhǔn)光線通道，按Enter鍵后等待顯示結(jié)果。紫外吸收光譜測(cè)量樣品濃度（C）：

在測(cè)量濃度之前，必須建立標(biāo)準(zhǔn)曲線才能進(jìn)行濃度測(cè)量。如沒(méi)有建立標(biāo)準(zhǔn)曲線則不能進(jìn)行濃度測(cè)量，儀器會(huì)提示操作出錯(cuò)。

測(cè)量濃度應(yīng)該按以下過(guò)程操作：

A：建立標(biāo)準(zhǔn)曲線（共有三種方法選擇）；

B：工作曲線的修正（自己認(rèn)為工作曲線沒(méi)問(wèn)題可以不修正）；

C：測(cè)量濃度。紫外吸收光譜工作曲線的修正

工作曲線方程為C=K×A+B，最多測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)液的樣點(diǎn)為20個(gè)。因此在建立曲線時(shí)是選20個(gè)樣點(diǎn)的平均值建立方程，因此總有其中的樣點(diǎn)離曲線較遠(yuǎn)（壞點(diǎn)），可以剔除該樣點(diǎn)來(lái)達(dá)到修正曲線的目的，方法是在建立完曲線顯示K、B、R后按STOP鍵，則程序會(huì)自動(dòng)剔除壞點(diǎn)，按一次STOP鍵則剔除一個(gè)壞點(diǎn)，最多可以有n-1次（n個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液）。cAc0A`

配置一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以不含被測(cè)組分的溶液為參比溶液，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度，以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，繪制吸光度-濃度曲線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線。在相同條件下測(cè)定樣品溶液的吸光度，從校正曲線上找出與之相對(duì)應(yīng)的未知組分的濃度，用于單組分的定量分析。參比容液的選擇：1.溶劑參比2.試劑參比3.樣品參比4.平行操作溶液參比標(biāo)準(zhǔn)曲線法儀器的維護(hù)保養(yǎng)與注意事項(xiàng)當(dāng)顯示錯(cuò)誤信息時(shí)一定查閱錯(cuò)誤故障表，找出原因，再繼續(xù)操作。放入樣品池架時(shí)，要檢查是否定位準(zhǔn)確平穩(wěn)，不能出現(xiàn)歪斜現(xiàn)象。當(dāng)儀器執(zhí)行程序發(fā)生錯(cuò)誤時(shí)，先用STOP鍵轉(zhuǎn)出，讓顯示器顯示HELLO。如果出現(xiàn)的錯(cuò)誤比較嚴(yán)重，不能轉(zhuǎn)出的話，可以用復(fù)位鍵Reset鍵復(fù)位。儀器運(yùn)行期間，注意儀器附近電磁干擾比較嚴(yán)重的電器應(yīng)該關(guān)閉。以免儀器受到電磁干擾。儀器開電后不要用手撥保護(hù)光閘片，因?yàn)閮x器的接收器不能受強(qiáng)光的照射。為了延長(zhǎng)儀器的使用壽命，一般情況下，如果不使用氘燈，請(qǐng)最好不要開氘燈。氘燈關(guān)閉后，要等幾分鐘才能重新點(diǎn)燃。關(guān)閉儀器前，請(qǐng)先關(guān)氘燈。紅外光譜取本品適量，加水溶解，水浴蒸干，在105℃干燥2h測(cè)定。本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)應(yīng)的圖譜一致。維生素B1可與多種生物堿沉淀試劑反應(yīng)，生成不同的顏色的沉淀。如：維生素B1＋碘

紅色沉淀維生素B1＋碘化汞鉀淡黃色沉淀維生素B1＋硅鎢酸白色沉淀維生素B1＋苦味酸黃色沉淀沉淀反應(yīng)氯化物反應(yīng)維生素B1是一種鹽酸鹽，固本品水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)。鹽酸鹽維生素B1含量測(cè)定原理：本品的12.5ug/ml鹽酸液(9

1000)，在246nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度吸，收系數(shù)為421。根據(jù)吸光系數(shù)法測(cè)定維生素B1片含量.UV共軛雙鍵λmax=246nm

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于維生素B125mg），置100ml量瓶中，加鹽酸溶液(91000)約70ml，振搖15min使維生素B1

溶解，加鹽酸溶液(91000)稀釋至刻