TGDPHA 004-2023 Rh血型抗原檢測(cè)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)

ICS11.040.20CCSC05StandardsofIdentificationandApplicationforRhBloodGroupAntigensIT/GDPHA004—2023 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4Rh血型檢測(cè)臨床應(yīng)用范圍 25樣本要求 6Rh血型檢測(cè)方法 27檢測(cè)結(jié)果解釋與說明 8Rh血型相容性血液選擇方案 7 參考文獻(xiàn) T/GDPHA004—2023本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省醫(yī)院協(xié)會(huì)輸血醫(yī)學(xué)發(fā)展管理專業(yè)委員會(huì)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省醫(yī)院協(xié)會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：廣州市第一人民醫(yī)院、深圳市人民醫(yī)院、深圳大學(xué)總醫(yī)院、中山大學(xué)腫瘤防治中心、南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院、廣東省第二人民醫(yī)院、佛山市第一人民醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院、東莞市厚街醫(yī)院、南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院、深圳市愛康生物科技股份有限公司、長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：魏亞明、孟慶寶、張印則、苑召虎、林文前、周華友、莫建坤、蔡葵、羅冰、章小東、徐國勝、彭永正、張傳國、邵雪琛。T/GDPHA004—2023Rh血型系統(tǒng)（ISBT004）是最復(fù)雜的紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，在臨床輸血中的重要性僅次于ABO血型系統(tǒng)。Rh血型系統(tǒng)抗原（Rh抗原）均為蛋白質(zhì)類抗原，由位于1p36.11的RHD和RHCE基因控制編碼，RHD基因編碼RhD抗原，RHCE基因編碼RhC/c和RhE/e抗原。目前共發(fā)現(xiàn)56種Rh抗原，包括15種多態(tài)性抗原、17種高頻抗原及24種低頻抗原，而本標(biāo)準(zhǔn)主要涉及與臨床關(guān)系較為密切的5種抗原，即C、c、D、E、e五種抗原。Rh血型系統(tǒng)抗原發(fā)育較早，在胎齡為8周的胎兒紅細(xì)胞上即可檢出。Rh抗原具有不同強(qiáng)度的免疫原性，臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，Rh抗原以RhD抗原性最強(qiáng)，其次為E、C、c、e，且C/c、E/e具有劑量效應(yīng)。Rh抗原的臨床意義不僅體現(xiàn)在某一抗原是否相合，更重要的是不同抗原組合，即單倍型是否相合。Rh抗原單倍型呈偏態(tài)分布，在中國漢族RhD陽性人群中，不同單倍型表現(xiàn)頻率由高至低依次為CCDee（約51.82%）、CcDEe（約32.45%）、CcDee（約7.71%）、ccDEE（約3.98%）、ccDEe（約2.18%）、CCDEe（約1.24%）、ccDee（約0.39%）、CcDEE（約0.21%）、CCDEE（約0.01%）。在中國漢族RhD陰性人群中，不同單倍型表現(xiàn)頻率由高至低依次為ccdee（75～80%）、Ccdee（15%）及ccdEe（5～7%）。單倍型的表現(xiàn)頻率是產(chǎn)生Rh血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體及尋找相合血液的基礎(chǔ)。通過妊娠、輸血等免疫途徑產(chǎn)生的Rh血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體在人群中亦呈偏態(tài)分布。在臨床檢出的不規(guī)則抗體中，Rh血型系統(tǒng)抗體約占60%，中國漢族RhD陽性人群產(chǎn)生的不規(guī)則抗體的頻率由高至低依次為抗-E、抗-C、抗-c、抗-e。Rh血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體可引起急性或遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)、胎兒新生兒溶血?。╤emolyticdiseaseofthefetusandnewborn，HDFN），醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展Rh血型相容性輸血具有重要臨床意義。鑒于此，由廣東省醫(yī)院協(xié)會(huì)輸血醫(yī)學(xué)發(fā)展管理專業(yè)委員會(huì)組織專家制定Rh血型抗原檢測(cè)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)，為臨床輸血提供專業(yè)的指導(dǎo)意見，對(duì)進(jìn)一步提高我省臨床輸血安全、輸血療效，預(yù)防免疫性溶血性輸血反應(yīng)及減少Rh血型抗體引起的HDFN具有重要的指導(dǎo)意義。1T/GDPHA004—2023本文件規(guī)定了Rh抗原檢測(cè)常用血清學(xué)和分子生物學(xué)方法及其臨床應(yīng)用范圍。2規(guī)范性引用文件下列文件的引用構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，標(biāo)注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；未標(biāo)注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件?！吨腥A人民共和國獻(xiàn)血法》（中華人民共和國主席令1997年第93號(hào)）；《血液制品管理?xiàng)l例》（中華人民共和國國務(wù)院令1996年第208號(hào)，根據(jù)2016年2月6日國務(wù)院令第666號(hào)《國務(wù)院關(guān)于修改部分行政法規(guī)的決定》修正）；《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床用血管理辦法》（2012年6月7日原衛(wèi)生部令第85號(hào)公布，根據(jù)2019年2月28日《國家衛(wèi)生健康委關(guān)于修改<職業(yè)健康檢查管理辦法>等4件部門規(guī)章的決定》第一次修訂）；《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2000]184號(hào)）；《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)〔2006〕73號(hào)《靜脈血液標(biāo)本采集指南》（WS/T661-2020）；《全血及成分血質(zhì)量監(jiān)測(cè)指南》中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T550-2017；《輸血相容性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)》中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T794-2022；《全血和成分血使用》中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T623-2018；GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志；GB/T29791.2體外診斷醫(yī)療器械制造商提供的信息（標(biāo)示）第2部分：專業(yè)用體外診斷試劑。3術(shù)語和定義3.1Rh血型對(duì)Rh血型系統(tǒng)C、c、D、E、e抗原進(jìn)行鑒定，確定其表現(xiàn)型（表型）。3.2Rh血型相容性輸血Rh血型C、c、D、E、e抗原同型或相容的異體紅細(xì)胞輸注。3.3血型同種免疫異體紅細(xì)胞抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)同種抗體的過程。3.4Rh血型單特異性抗體針對(duì)Rh血型某單一抗原產(chǎn)生的不規(guī)則抗體，如抗-E、抗-c、抗-D、抗-C、抗-e。2T/GDPHA004—20233.5Rh血型多重抗體針對(duì)Rh血型抗原產(chǎn)生的兩種或兩種以上特異性的不規(guī)則抗體，如抗-D合并抗-E、抗-c合并抗-E等。3.6Rh血型復(fù)合抗體針對(duì)cE、Ce等復(fù)合抗原產(chǎn)生的多特異性不規(guī)則抗體，如抗-cE、抗-Ce。4Rh血型檢測(cè)臨床應(yīng)用范圍4.1已產(chǎn)生Rh血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體的患者，即使本次輸血的標(biāo)本不規(guī)則抗體篩查或鑒定為陰性。（強(qiáng)推薦）4.2預(yù)計(jì)需反復(fù)輸血的患者，如地中海貧血患者、血液系統(tǒng)疾病患者、器官組織及干細(xì)胞移植患者、慢性消化道出血患者、腎病患者、腫瘤患者等。（強(qiáng)推薦）4.3不規(guī)則抗體特異性無法確定的患者。（強(qiáng)推薦）4.4自身免疫性溶血性貧血（Autoimmunehemolyticanemia，AIHA）等自身抗體陽性患者。（強(qiáng)推薦）4.5紅細(xì)胞反復(fù)輸注無效的患者，包括無法排除的非免疫性因素。（強(qiáng)推薦）4.6育齡女性、孕產(chǎn)婦等。（強(qiáng)推薦）4.7新生兒、嬰幼兒及兒童。（強(qiáng)推薦）4.8需大量或多次輸血的外科手術(shù)患者。（強(qiáng)推薦）4.9其他接受輸注紅細(xì)胞血液成分治療的患者。（弱推薦）4.10搶救用血時(shí)按國家相關(guān)技術(shù)規(guī)范規(guī)定執(zhí)行。5樣本要求按照《輸血相容性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)》要求采集EDTA抗凝血≥2mL進(jìn)行Rh血型血清學(xué)鑒定。若血清學(xué)方法無法準(zhǔn)確鑒定Rh血型時(shí)，可使用分子生物學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。6Rh血型檢測(cè)方法目前用于Rh血型抗原檢測(cè)的常見方法有：3T/GDPHA004—2023①血清學(xué)方法，如試管法、柱凝集法、微孔板法、流式細(xì)胞術(shù)；②分子生物學(xué)方法，如PCR基因分型和基因測(cè)序等，但不限于上述檢測(cè)方法。C、c、E、e抗原檢測(cè)只需在患者配血環(huán)節(jié)的血型復(fù)核時(shí)檢測(cè)，常規(guī)血型檢測(cè)時(shí)不作要求。6.1試管法6.1.1檢測(cè)原理鹽水介質(zhì)中，IgM型抗-C、抗-c、抗-D、抗-E、抗-e分型試劑可與紅細(xì)胞呈現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)格局可判斷標(biāo)本Rh血型6.1.2操作步驟a.取潔凈小試管(內(nèi)徑10mm×60mm)5只，分別標(biāo)注抗-C、抗-c、抗-D、抗-E、抗-e，分別加入抗-C、抗-c、抗-D、抗-E、抗-eIgM型單克隆試劑各1滴于各試管底部，再分別加入2％-5％受檢者紅細(xì)胞懸液1滴。b.混勻后以l000×g離心15秒。c.將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。d.觀察結(jié)果時(shí)既要看有無凝集，也要注意凝集強(qiáng)度。6.1.3Rh血型結(jié)果試管法凝集強(qiáng)度判定a.4+：紅細(xì)胞凝集成一大塊，上清液清晰透明。b.3+：紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，上清液清晰。c.2+：紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。d.1+：肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。e.：鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。f.-：鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。g.混合視野（mf）：鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。h.部分溶血（PH）：部分溶血，部分紅細(xì)胞殘留。i.溶血（H）：完全溶血。6.1.4檢測(cè)方法的質(zhì)量控制4T/GDPHA004—2023a.抗-C、抗-c、抗-D、抗-E、抗-e的IgM型單克隆試劑應(yīng)在有效期內(nèi)使用，每批試劑在使用前應(yīng)用已知陰、陽性抗原紅細(xì)胞做對(duì)照試驗(yàn)以確認(rèn)其有效性。b.每批試驗(yàn)應(yīng)同步設(shè)置陰、陽性對(duì)照及自身對(duì)照。c.RhD陰性確認(rèn)試驗(yàn)檢測(cè)流程及質(zhì)量控制等可參考《輸血相容性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室RhD血型檢測(cè)策略專家共識(shí)》。6.2柱凝集法6.2.1檢測(cè)原理柱凝集法檢測(cè)技術(shù)是目前最常用Rh血型檢測(cè)技術(shù)，分為微柱凝膠技術(shù)和微柱玻璃珠技術(shù)，以微柱凝膠技術(shù)更為常見。微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)原理是通過離心力的作用將凝集及未凝集紅細(xì)胞在凝膠介質(zhì)中進(jìn)行篩選，在離心力的作用下，未凝集的紅細(xì)胞可以自由通過凝膠間隙沉于柱底，凝集的紅細(xì)胞由于不能通過凝膠間隙而浮于凝膠表面或分散在凝膠中。微柱玻璃珠技術(shù)原理是在微柱中采用惰性物質(zhì)組成的直徑約70?~80?的玻璃珠緊密聚在一起形成約為一個(gè)紅細(xì)胞直徑大小的間隙，在離心作用下，未發(fā)生凝集的紅細(xì)胞可順利通過玻璃珠間隙，發(fā)生凝集的紅細(xì)胞由于體積增大,無法通過玻璃珠間隙，從而達(dá)到血型檢測(cè)的目的。6.2.2Rh血型鑒定步驟目前臨床Rh血型檢測(cè)過程主要通過全自動(dòng)血型分析儀完成。一般步驟如下（以微柱凝膠法為例，具體步驟請(qǐng)以各試劑說明書為準(zhǔn)）：a.樣本準(zhǔn)備：抽取新鮮的靜脈血于含有EDTA的抗凝管中，充分搖勻。做好標(biāo)記，并將患者信息錄入系統(tǒng)內(nèi)。b.病人的血液標(biāo)本以1400×g離心3分鐘。c.Rh系統(tǒng)血型檢測(cè)卡放入前應(yīng)觀察檢測(cè)卡有無干膠、雜質(zhì)、氣泡等，使用前應(yīng)將卡溫度平衡至室溫（18~25℃),用專用離心機(jī)離心5分鐘后放入匹配的全自動(dòng)血型分析儀內(nèi)。d.將患者血標(biāo)本放入血樣孔，一般是取壓積紅細(xì)胞10uL，用1mL紅細(xì)胞稀釋液或生理鹽水稀釋混勻成紅細(xì)胞懸液。e.儀器自動(dòng)加樣和分析結(jié)果。f.觀察判定結(jié)果并記錄。5T/GDPHA004—20236.2.3Rh血型結(jié)果微柱法凝集強(qiáng)度判定a.4+：紅細(xì)胞全部位于微柱頂部。b.3+：80%紅細(xì)胞位于微柱上端1/3內(nèi)。c.2+：80%紅細(xì)胞位于微柱上端2/3內(nèi)。d.1+：80%紅細(xì)胞位于微柱下端2/3內(nèi)。e.±：100%紅細(xì)胞位于微柱下端1/3內(nèi)。f.-：100%紅細(xì)胞位于微柱底部。g.雙群（dp）：部分紅細(xì)胞位于微柱頂部或微柱內(nèi)部，而另一部分紅細(xì)胞位于底部。h.部分溶血（PH）：部分溶血，部分紅細(xì)胞殘留。i.溶血（H）：紅細(xì)胞發(fā)生溶血后，細(xì)胞碎片、血紅蛋白等成分重量較輕，離心后不會(huì)進(jìn)入微柱凝膠中，仍位于反應(yīng)腔內(nèi)，呈透明紅色或暗紅色。6.2.4檢測(cè)方法的質(zhì)量控制a.微柱卡在有效期內(nèi)使用，每批試劑卡在使用前用已知陰、陽性抗原細(xì)胞做對(duì)照試驗(yàn)以確認(rèn)其有效性。b.試驗(yàn)應(yīng)同步設(shè)置陰、陽性對(duì)照及自身對(duì)照。c.RhD陰性確認(rèn)試驗(yàn)檢測(cè)流程及質(zhì)量控制等可參考《輸血相容性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室RhD血型檢測(cè)策略專家共識(shí)》。6.3毛細(xì)管分離年幼紅細(xì)胞技術(shù)對(duì)于一些近期輸血導(dǎo)致混合外觀的Rh血型結(jié)果需用毛細(xì)管分離新生紅細(xì)胞，再進(jìn)行Rh血型檢測(cè)。6.3.1實(shí)驗(yàn)原理毛細(xì)管離心分離技術(shù)是通過超速離心將受檢者體內(nèi)比重大小不同的紅細(xì)胞（主要是新生紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞）進(jìn)行分離、濃縮和提純的技術(shù)。當(dāng)紅細(xì)胞置毛細(xì)管中離心時(shí)，自身新生紅細(xì)胞將集中在毛細(xì)管的頂端（近心端而輸入體內(nèi)的老年紅細(xì)胞由于不斷產(chǎn)生囊泡，丟失了較多的紅細(xì)胞膜成分，比重變大，置于底部（遠(yuǎn)心端）。因此，運(yùn)用該技術(shù)可對(duì)有近期輸血史的患者紅細(xì)胞進(jìn)行分離。分離后的細(xì)胞進(jìn)行Rh血型鑒定，確定患者血型。運(yùn)用毛細(xì)管超速離心技術(shù)分離后，可較好地鑒定患者Rh血型，并可據(jù)此推斷輸入的獻(xiàn)血者的Rh血型。6T/GDPHA004—20236.3.2實(shí)驗(yàn)步驟a.抽取病人靜脈血3～4mL于EDTA抗凝管內(nèi)，1400×g離心3分鐘，分離血漿和紅細(xì)胞。b.取500uL病人的紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌3次，最后一次去掉上清液后混勻紅細(xì)胞。c.取2支毛細(xì)管，將混勻的紅細(xì)胞裝入毛細(xì)管內(nèi)，將毛細(xì)管的遠(yuǎn)心端用橡皮泥封堵。d.用砂輪在毛細(xì)管近心端截取60mm的毛細(xì)管，確保截取下來的整段毛細(xì)管充滿紅細(xì)胞，毛細(xì)管的近心端不需要用橡皮泥封堵。e.將毛細(xì)管置于毛細(xì)管專用離心機(jī)內(nèi)，封堵處在離心機(jī)朝外的一側(cè)，近心端在離心機(jī)朝內(nèi)一側(cè)，配平后13800×g離心10分鐘。f.離心后取出毛細(xì)管，用砂輪分別在毛細(xì)管近心端和遠(yuǎn)心端切斷5mm，將切斷的毛細(xì)管放入試管內(nèi)，用生理鹽水洗滌毛細(xì)管內(nèi)的紅細(xì)胞3次后，通過試管法或微柱法進(jìn)行Rh血型鑒定。6.3.3注意事項(xiàng)a.將紅細(xì)胞加入毛細(xì)管離心的時(shí)候要將紅細(xì)胞充分混勻。b.該分離技術(shù)只對(duì)產(chǎn)生正常數(shù)量或者大量網(wǎng)織紅細(xì)胞的受檢者有效，而對(duì)不能產(chǎn)生正常網(wǎng)織紅細(xì)胞的患者無效，如再生障礙性貧血患者。c.分離輸血后3天以上的標(biāo)本比剛輸過血的標(biāo)本分離效果好。d.分離出來的紅細(xì)胞可能純度不高，在血型鑒定的過程中會(huì)出現(xiàn)雙向或混合視野，但依然可根據(jù)患者分離前、分離后的Rh血型結(jié)果及結(jié)合獻(xiàn)血員的Rh血型結(jié)果作出基本判斷。e.離心結(jié)束后用砂輪在近心端、遠(yuǎn)心端各5mm處切斷，如太長會(huì)影響分離紅細(xì)胞的純度，如太短會(huì)影響收集紅細(xì)胞的數(shù)量。6.4分子生物學(xué)技術(shù)在Rh血型檢測(cè)中的輔助應(yīng)用對(duì)于一些難以判斷的Rh血型分型結(jié)果，特別是對(duì)于再障患者，短期內(nèi)輸注年輕紅細(xì)胞的患者等如需要進(jìn)行Rh血型檢測(cè)，可考慮分子生物學(xué)方法進(jìn)行鑒定。6.4.1PCR基因分型目前商品化的試劑盒依據(jù)美國國家生物技術(shù)信息中心（NationalCenterforBiotechnologyInformation,NCBI）建立的DNA序列數(shù)據(jù)庫（Genbank）中公開的人類基因序列，針對(duì)Rh血型相關(guān)基因突變或缺失、插入等信息設(shè)計(jì)特異性引物，通過聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)患者RH基因型，常用方法有PCR-SSP7T/GDPHA004—2023法和熒光定量PCR法，可有效檢測(cè)已知的RH基因多態(tài)性。對(duì)于輸血后因各種原因無法有效分離患者自身細(xì)胞而提取高純度自身DNA的患者，可通過提取皮膚黏膜或毛發(fā)DNA再進(jìn)行其RH分型，具體檢測(cè)步驟、結(jié)果判讀及質(zhì)量控制等依據(jù)試劑盒說明書執(zhí)行。6.4.2基因測(cè)序基因測(cè)序（Sequencing）是指通過測(cè)序設(shè)備對(duì)DNA分子的堿基排列順序進(jìn)行的測(cè)定，即測(cè)定和解讀DNA分子中的腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、胞嘧啶（C）和鳥嘌呤（G）四種堿基的排列順序，目前常用RH基因測(cè)序技術(shù)有一代測(cè)序技術(shù)（Sanger測(cè)序）、二代測(cè)序技術(shù)（NextGenerationSequencing，NGS）和三代測(cè)序技術(shù)（單分子測(cè)序）?；驕y(cè)序很好地彌補(bǔ)了PCR技術(shù)無法檢測(cè)未知基因多態(tài)性的缺陷，常用于發(fā)現(xiàn)新的基因多態(tài)性。7檢測(cè)結(jié)果解釋與說明按Fisher-Race模型及CDE命名法，RhD陽性個(gè)體與RhC、c、E、e抗原可形成9種表型，26種基因型。Rh表型及對(duì)應(yīng)基因型如表1所示。表1Rh表型及RH基因型分析表+-+-+++++++++-+-+++--+++++-+++-++-+++++-+-++-8Rh血型相容性血液選擇方案RhD陽性患者建議按表2選擇適合供者,優(yōu)先選擇Rh同型或Rh位點(diǎn)抗原少于患者的相容性紅細(xì)胞。當(dāng)無同型或相容紅細(xì)胞可供選擇時(shí)，可根據(jù)交叉配血結(jié)果選擇血液成分；RhD陰性的紅細(xì)胞可以輸注給RhD8T/GDPHA004—2023陽性患者。RhD陰性患者輸血遵從現(xiàn)有輸血技術(shù)規(guī)范要求，首選D抗原陰性獻(xiàn)血員紅細(xì)胞，在D抗原陰性基礎(chǔ)上盡量選擇其他抗原相容的紅細(xì)胞。表2Rh血型相同或相容的紅細(xì)胞選擇方案/////9T/GDPHA004—2023（資料性附錄）Rh血型抗原檢測(cè)卡（微柱凝膠法）原料要求A.1Rh血型抗原檢測(cè)卡抗體屬性Rh血型抗原檢測(cè)卡應(yīng)在附錄資料中明確提供卡內(nèi)灌裝的抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗體的屬性，是IgM型或IgG型或IgM、IgG型均含有。A.2Rh血型抗原檢測(cè)卡填充抗體的效價(jià)標(biāo)注Rh血型抗原檢測(cè)卡應(yīng)在附錄資料中提供已填充的抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗體效價(jià)及制備抗體的細(xì)胞株。A.3組成Rh血型抗原檢測(cè)卡通常由充填葡聚糖凝膠的凝膠微柱構(gòu)成，不同柱內(nèi)分別含有抗-D單克隆抗體、抗-C單克隆抗體、抗-c單克隆抗體抗、抗-E單克隆抗體、抗-e單克隆抗體。A.4外觀A.4.1.在自然光下以正常視力或矯正視力目視檢查，外觀應(yīng)符合如下要求；A.4.2.試劑盒包裝應(yīng)完整，字跡應(yīng)清晰；A.4.3.檢測(cè)卡應(yīng)無液體外漏，標(biāo)記清晰；A.4.4.凝膠微柱各柱應(yīng)無干裂，內(nèi)填充物表面上應(yīng)有液體層，各柱填充物及液體中不應(yīng)有雜質(zhì)；A.4.5.抗-D柱、抗-C柱、抗-c柱、抗-E柱、抗-e柱略呈乳白色或無色或微黃色；A.4.6.不應(yīng)有氣泡，填充物表面不應(yīng)有明顯的傾斜。A.5特異性A.5.1.抗-D應(yīng)與正常RhD陽性試劑紅細(xì)胞及RhD陽性樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)發(fā)生陽性反應(yīng)，與RhD陰性試劑紅細(xì)胞及RhD陰性樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)為陰性反應(yīng)；T/GDPHA004—2023A.5.2.抗-C應(yīng)與含有C抗原的試劑紅細(xì)胞及含有C抗原的樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)發(fā)生陽性反應(yīng)，與不含C抗原的試劑紅細(xì)胞及不含有C抗原的樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)為陰性反應(yīng)；A.5.3.抗-c應(yīng)與含有c抗原的試劑紅細(xì)胞及含有c抗原樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)發(fā)生陽性反應(yīng)，與不含c抗原的試劑紅細(xì)胞及不含有c抗原樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)為陰性反應(yīng)；A.5.4.抗-E應(yīng)與含有E抗原的試劑紅細(xì)胞及含有E抗原樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)發(fā)生陽性反應(yīng)，與不含E抗原的試劑紅細(xì)胞及不含有E抗原樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)為陰性反應(yīng)；A.5.5.抗-e應(yīng)與含有e抗原的試劑紅細(xì)胞及含有e抗原樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)發(fā)生陽性反應(yīng)，與不含e抗原的試劑紅細(xì)胞及不含有e抗原樣本紅細(xì)胞（脂血、黃疸）均應(yīng)為陰性反應(yīng)。注1：正常RhD陽性紅細(xì)胞或RhD陽性樣本紅細(xì)胞，是指不包括RhD抗原變異體在內(nèi)的RhD陽性紅細(xì)胞，下注2：陽性反應(yīng)不應(yīng)有雙群現(xiàn)象等混合反應(yīng)。注3：陰性反應(yīng)不應(yīng)有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。陰性反應(yīng)的不易分辨現(xiàn)象包括柱內(nèi)肉眼可見的紅細(xì)胞碎片拖尾。A.6靈敏度A.6.1.抗-D與正常RhD陽性試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于4+；抗-D柱與正常RhD陽性的凝集強(qiáng)度為2+的樣本紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度均應(yīng)不小于2+；A.6.2.抗-C與含有C抗原的試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于3+；抗-C柱以及含有C抗原的凝集強(qiáng)度為2+的樣本紅細(xì)胞凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度均應(yīng)不小于2+；A.6.3.抗-c與含有c抗原的試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于3+；抗-c柱以及含有c抗原的凝集強(qiáng)度為2+的樣本紅細(xì)胞凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度均應(yīng)不小于2+；A.6.4.抗-E與含有E抗原的試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于3+；抗-E柱以及含有E抗原的凝集強(qiáng)度為2+的樣本紅細(xì)胞凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度均應(yīng)不小于2+；A.6.5.抗-e與含有e抗原的試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度應(yīng)不小于3+；抗-e柱以及含有e抗原的凝集強(qiáng)度為2+的樣本紅細(xì)胞凝集反應(yīng)時(shí)，反應(yīng)強(qiáng)度均應(yīng)不小于2+。A.7重復(fù)性T/GDPHA004—2023用同批次檢測(cè)卡分別對(duì)同一樣本連續(xù)檢測(cè)20次，陰陽性結(jié)果均應(yīng)一致，且陽性結(jié)果凝集強(qiáng)度在±1級(jí)差范圍內(nèi)，陰性結(jié)果不應(yīng)有凝集、溶血等現(xiàn)象。A.8批量重復(fù)性用3個(gè)批次的檢測(cè)卡分別對(duì)同一樣本連續(xù)檢測(cè)10次，比較3批檢測(cè)卡的結(jié)果，應(yīng)符合重復(fù)性的相應(yīng)要求。A.9穩(wěn)定性其穩(wěn)定性包括效期穩(wěn)定性和（或）熱穩(wěn)定性：A.9.1.效期穩(wěn)定性生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取說明書規(guī)定條件下保存至有效期前或后1個(gè)月內(nèi)的檢測(cè)卡，檢驗(yàn)其外觀、特異性、靈敏度、重復(fù)性，結(jié)果均應(yīng)符合A.4.1~A.4.4的相應(yīng)要求。A.9.2.熱穩(wěn)定性在規(guī)定條件下處理檢測(cè)卡，檢驗(yàn)其外觀、特異性、靈敏度、重復(fù)性，結(jié)果均應(yīng)符合A.4.1~A.4.4的相應(yīng)要求。將待檢檢測(cè)卡按照產(chǎn)品剩余效期在37℃放置一定天數(shù)（如37℃放置天數(shù)為X，計(jì)算公式X=剩余有效期月數(shù)/12*7，例：產(chǎn)品剩余有效期為12個(gè)月則37℃最多放置7天）。A.10標(biāo)志、使用說明書應(yīng)符合GB/T29791.2的規(guī)定。說明書中應(yīng)提供填充柱中所有單克隆抗體的細(xì)胞株名稱。A.11包裝、運(yùn)輸、貯存A.11.1.包裝包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志應(yīng)符合GB/T191的規(guī)定。包裝容器應(yīng)保證密封性良好，完整，無泄露，無破損。A.11.2.運(yùn)輸檢測(cè)卡應(yīng)在2℃-25℃的溫度范圍內(nèi)運(yùn)輸。在運(yùn)輸過程中，應(yīng)防潮，防止重物堆壓，避免陽光直射和雨雪浸淋，防止與酸堿物質(zhì)接觸，防止內(nèi)外包裝破損。A.11.3.貯存檢測(cè)卡應(yīng)在2℃-25℃的溫度范圍內(nèi)保存。T/GDPHA004—2023（資料性附錄）Rh血型試劑紅細(xì)胞質(zhì)量要求B.1外觀Rh血型試劑紅細(xì)胞無溶血、無凝集及異常。B.2抗原特異性使用試管法用已注冊(cè)上市的抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e抗體試劑與相應(yīng)細(xì)胞反應(yīng)，各試劑紅細(xì)胞特異性應(yīng)符合以下要求：+-//////////+-//////////+-//////////+-//////////+-注：“+”表示結(jié)果