病毒性傳染病的檢測與預(yù)防

病毒性傳染病的實驗室診斷概述標(biāo)本的采集和處理病毒性疾病病原學(xué)診斷病毒性疾病的診斷輔助檢查病毒性疾病診斷活組織檢查內(nèi)容一、概述大多數(shù)感染性疾病都是由病毒引起的，已經(jīng)證實對人有致病性的病毒達(dá)500余種。近年來病毒的診斷技術(shù)迅速發(fā)展，已逐漸形成病毒學(xué)研究的一支重要分支-——診斷病毒學(xué)。由于大多數(shù)病毒尚無有效治療藥物，實驗室診斷已成為控制病毒流行和蔓延的重要手段。

隨著病毒學(xué)研究的不斷深入，病毒病的診斷方法已由最初單一的分離病毒發(fā)展到病毒血清學(xué)、分子生物學(xué)、電子顯微鏡技術(shù)等更加敏感、特異、簡便的診斷方法。（一）病毒病診斷的一般原則

病毒病診斷技術(shù)的發(fā)展大致可分為病毒分離、經(jīng)典血清學(xué)、現(xiàn)代免疫學(xué)和分子病毒學(xué)四個階段。

1、病毒的分離

2、經(jīng)典血清學(xué)方法

3、現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)

4、分子生物學(xué)技術(shù)

包括中和試驗補體結(jié)合試驗紅細(xì)胞凝集試驗等。包括ELISA固相放射免疫試驗IFA 酶免疫學(xué)試驗免疫膠體金試驗和WB此外還有免疫電泳、免疫粘連試驗等。 包括核酸雜交凝膠電泳技術(shù)PCR基因芯片核苷酸序列測定

（二）診斷標(biāo)志的選擇

診斷標(biāo)志的選擇是指根據(jù)病毒的生物學(xué)性狀、潛伏期的長短，以及機體的免疫應(yīng)答，選擇檢測病毒抗原、抗體或病毒核酸等作為診斷的指標(biāo)。

1、對潛伏期較短的病毒，由于機體未能就病毒感染產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，因此，應(yīng)選擇檢測病毒顆?；虿《拘钥乖安《竞怂帷?/p>

2、對可在機體內(nèi)形成持續(xù)感染或潛伏感染的病毒，如單純皰疹病毒感染等，可檢測病毒雙份血清的IgG抗體滴度有無4倍改變，或檢測病毒核酸。

3、對可由多種病毒感染引起的同一癥狀，應(yīng)同時檢測幾種相關(guān)病毒抗原或抗體，以免延誤診斷。

4、對病因不明，可能有新病毒感染時，應(yīng)根據(jù)感染部位采集相應(yīng)的標(biāo)本做病毒分離，以便發(fā)現(xiàn)新的病原，同時應(yīng)采集雙份血清來確定分離病毒是否為病原病毒。

5、對多型別的病毒可檢測屬特異性病毒抗原或抗體進(jìn)行診斷，必要時再進(jìn)一步分型。

6、對潛伏期10d以上的病毒感染，檢測特異性IgM抗體作感染指標(biāo)。發(fā)病初期檢測病毒抗原是病毒性疾病快速診斷的最佳方法。檢測病毒IgM抗體，對病毒病進(jìn)行早期快速診斷，證明是一種簡便、實用的方法。特別是酶聯(lián)免疫吸附試驗已成功地應(yīng)用于檢測麻疹病毒，風(fēng)疹病毒，流感病毒，流行性腮腺炎病毒，乙型腦炎病毒，出血熱病毒，甲、乙型肝炎病毒，CMV，EBV等的特異性IgM抗，效果較好。二、標(biāo)本的采集和處理

（一）標(biāo)本的選擇

一般檢測病毒抗體應(yīng)采集外周血分離血清（或血漿），對可能的神經(jīng)系統(tǒng)感染還應(yīng)采集腦脊液做特異性抗體或抗原檢測；少數(shù)病毒感染還可以采集唾液檢測病毒抗體（如HAV、HIV）。

進(jìn)行病毒分離或直接檢測病毒應(yīng)視部位而決定采集何種標(biāo)本。呼吸道感染一般采集鼻拭子、咽拭子含漱液等；腸道感染可采集糞便、肛拭子、直腸拭子；出現(xiàn)皰疹的可采集皰疹液；其他病毒如巨細(xì)胞病毒（CMV）、風(fēng)疹病毒等還可采集尿標(biāo)本。此外，如眼分泌物、精液，各種活檢、尸檢標(biāo)本等可以作為病毒檢測的標(biāo)本。（二）不同標(biāo)本的采集和用途

1、血清學(xué)標(biāo)本

用于病毒特異性抗體的檢測。

如檢測特異性IgM抗體可采集單份急性期血清，特異性IgG抗體檢測應(yīng)采集急性期和恢復(fù)期雙份血清，急性期標(biāo)本采集越早越好（可延于發(fā)病后1周），恢復(fù)期血清標(biāo)本則于發(fā)病后2周或更遲一些采集。采集血清標(biāo)本時取靜脈血2.0～3.0ml，不加防腐劑或抗凝劑，4℃保存，分離血清后可于－20℃保存數(shù)年至數(shù)十年。

2、糞便標(biāo)本

用于病毒分離或病毒抗原、核酸的檢測。取5～10g糞便置于滅菌的帶蓋玻璃瓶或蠟紙盒內(nèi)，采集時間越早越好，一般不能遲于發(fā)病后7～10d。

3、尿液標(biāo)本

取新鮮尿液10～20ml置滅菌玻璃瓶內(nèi)，可用CMV的分離和檢測，有時也用于風(fēng)疹病毒和腺病毒的檢測。發(fā)病時采集，可采集2～3次以增加檢出機會。

4、鼻拭子和咽拭子標(biāo)本用于呼吸道感染病毒的分離。用干棉拭子準(zhǔn)確地擦拭患者的鼻咽部后，立即浸泡于含2～3ml樣品保存液的滅菌試管中，標(biāo)本采集不能遲于發(fā)病后5d。

5、含漱液標(biāo)本

用于病毒分離。

6、唾液標(biāo)本用于病毒分離或抗體檢測，用滅菌平皿或廣口瓶留取唾液5～10ml，或用棉拭子沾兩頰黏膜及舌底擦拭留取。

7、腦脊液標(biāo)本

用于病毒分離或抗體檢測。分離病毒時取樣不遲于發(fā)病后7～10d，無菌取樣1～2ml。用于病毒的分離或直接檢出。將棉拭子以生理鹽水蘸濕后擠干，在眼結(jié)膜部取分泌物后，浸于2～3ml保存液中。

8、眼拭子標(biāo)本

9、皰疹液標(biāo)本

用于病毒的分離或直接檢出，在出疹后3d內(nèi)采集，將皰疹表面用生理鹽水輕輕沖洗，然后用注射器或棉拭子采集皰疹液。

10、抗凝血液標(biāo)本

用于病毒分離，無菌試管中加1/1000肝素1ml，抽血9ml。

11、各種活檢和尸檢標(biāo)本

用于病毒的分離或直接檢出，用帶蓋無菌玻璃瓶留取。尸檢標(biāo)本應(yīng)盡早采集，最遲不超過死后24h，用于病毒分離時應(yīng)在死后3～6h內(nèi)采取。

各種標(biāo)本采集后應(yīng)立即送實驗室處理，否則應(yīng)超低溫冷凍保存。三、病毒性疾病病原學(xué)診斷

病毒性疾病的診斷主要依靠病原學(xué)診斷。近年來，除了傳統(tǒng)的診斷方法，如血清學(xué)、病毒分離外，分子生物學(xué)方法在病毒性疾病的診斷中得到了廣泛應(yīng)用。（一）血清學(xué)診斷技術(shù)

所有的病毒感染均可引起機體的體液免疫反應(yīng)，這種反應(yīng)?？梢杂糜谠\斷目的。不同病毒所引起體液反應(yīng)的差別很大，有些病毒誘生的抗體的中和抗體，多數(shù)病毒感染的控制主要依賴于T細(xì)胞反應(yīng)，抗體的檢測僅可作為即往感染的標(biāo)志，并且常規(guī)的抗體檢測方法也不能區(qū)分IgM和IgG型免疫反應(yīng)。這種情況下，血清轉(zhuǎn)換或恢復(fù)期與急性期相比（雙份血清的間隔時間為10～14天），抗體效價有較明顯的上升（一般≥4倍），對病毒感染有參考價值，但這種診斷通常是回顧性的，無早期診斷價值。在血清學(xué)試驗中，經(jīng)典是方法有中和試驗補體結(jié)合試驗紅細(xì)胞凝集試驗和紅細(xì)胞凝集抑制試驗紅細(xì)胞吸附試驗和紅細(xì)胞吸附抑制試驗

免疫熒光技術(shù)間接血凝試驗免疫粘連血凝試驗酶免疫檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗免疫印跡免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)固相放射免疫測定等廣泛應(yīng)用于測定病毒的抗原和抗體1.中和試驗

中和試驗是型特異性抗體反應(yīng)，它是原理是特異性的中和抗體與相應(yīng)的病毒結(jié)合后，使病毒不能吸附于敏感細(xì)胞，失去感染的能力，中和抗體在機體內(nèi)存在的時間比較長，又能用中和試驗鑒定病毒的型別。中和試驗的主要用途：①鑒定病毒；②分析病毒抗原的性質(zhì)；③測定免疫血清的抗體效價和疫苗接種后的效果；④測定病人血清中的抗體，用于診斷病毒性疾病。2.補體結(jié)合試驗

補體結(jié)合試驗是屬（族與組）特異性反應(yīng)。它的原理是，特異性病毒抗原和相應(yīng)的抗體被結(jié)合形成免疫復(fù)合物能結(jié)合補體。因此，加定量的補體于抗原抗體的反應(yīng)系統(tǒng)中，補體被結(jié)合，不再以游離的形式存在，此時，如再加入另一抗原抗體系統(tǒng)（羊紅細(xì)胞和溶血素），則后者因缺乏游離的補體參與其溶血反應(yīng)，結(jié)果不溶血，稱為陽性反應(yīng)。補體結(jié)合試驗補體結(jié)合試驗常用于以下目的：①流行病學(xué)調(diào)查；②臨床病毒感染的診斷；③疫苗使用后人群抗體調(diào)查；④檢測病毒抗原，鑒別哪一屬病毒（鑒定病毒）。3.凝集試驗

采用已知顆粒性抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在的環(huán)境中，在一定時間后出現(xiàn)肉眼可見的凝塊。包括直接、間接凝集試驗及直接血液凝集試驗。血凝試驗血凝抑制試驗4.沉淀試驗

沉淀試驗是有抗體與可溶性小體積抗原結(jié)合，再由抗原抗體復(fù)合物相互凝集形成小顆粒的沉淀物。具體的方法有：①單向免疫擴散；②雙向免疫擴散③對流免疫電泳等。常用于檢測IgM、IgG、IgA型免疫球蛋白的含量及分型檢查及病毒的抗體檢測。5.免疫熒光技術(shù)

RNA病毒一般在細(xì)胞漿內(nèi)復(fù)制，所以在細(xì)胞漿內(nèi)有熒光顆粒，如皰疹病毒、流感病毒，開始在細(xì)胞核內(nèi)顯熒光，隨后在細(xì)胞漿內(nèi)也顯熒光。有些熒光素（如異硫氰酸熒光黃）能和抗體球蛋白分子結(jié)合，并且不喪失抗體的活力，仍能和相應(yīng)的抗原形成免疫復(fù)合物。借助于熒光顯微鏡，能觀察到細(xì)胞內(nèi)發(fā)熒光是病毒抗原和存在是位置。

免疫熒光直接法間接法直接法是將熒光素標(biāo)記在病毒特異性IgG抗體上，標(biāo)記抗體直接與固定在載玻上的細(xì)胞內(nèi)病毒結(jié)合，然后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果（型特異性反應(yīng)）。間接法是用標(biāo)記了熒光素的抗原免疫球蛋白IgG的抗體（抗抗體），檢測抗體與病毒抗原結(jié)合物。由于免疫球蛋白分子能結(jié)合多個熒光素標(biāo)記的抗免疫球蛋白分子，所以間接法比直接法敏感5～10倍。間接免疫熒光試驗抗原抗體熒光標(biāo)記抗抗體原理：6．免疫酶標(biāo)試驗

用于普通顯微鏡觀察，染色標(biāo)本能長期保存，一種較特異、快速和簡便的方法，這種方法曾用于檢測培養(yǎng)細(xì)胞中的病毒抗原和組織切片、印片細(xì)胞中的病毒抗原。7．酶聯(lián)免疫吸附試驗

ELISA是目前應(yīng)用最廣泛的病毒抗原、抗體檢測技術(shù)，ELISA分以下幾類。

（1）間接法ELISA

（2）雙抗體夾心法ELISA

（3）雙抗原夾心法ELISA

（4）雙夾心法ELISA

（5）競爭法ELISA

（5）捕獲法ELISA

（7）酶抗酶法ELISA（8）生物素－親和素系統(tǒng)用于檢測特異性病毒抗體。將病毒抗原包被在固相載體表面，加入待檢測血清后，如待檢血清含有相應(yīng)抗體，形成抗原抗體復(fù)合物，洗滌后加入酶標(biāo)記抗人免疫球蛋白。洗滌后加入相應(yīng)底物顯色，測OD值，OD值的大小與待檢血清中抗體含量成正例。間接法ELISA用于檢測病毒抗原。將特異性抗體包被在固相載體表面，加入待檢標(biāo)本，待測抗原與固相載體表面的抗體形成抗原抗體復(fù)合物，洗滌后加入酶標(biāo)記的特異性抗體，溫育反應(yīng)使之與抗原結(jié)合，洗滌后加入底物顯色，測OD值。雙抗體夾心法ELISA將雙抗體夾心法ELISA中的包被物和標(biāo)記物改為病毒抗原，即可用于病毒抗體的檢測。

雙抗原夾心法ELISA

用于檢測病毒抗原。所用的兩種特異性抗病毒必須來自不同動物，一種包被于固相載體，待測抗原與之相結(jié)合后，再與第二種抗原病毒抗體形成雙抗體夾心免疫復(fù)合物，然后加入抗第二種動物抗體的酶標(biāo)記抗體，經(jīng)保溫、洗滌后，加底物顯色。雙夾心法ELISA用于檢測病毒抗原或半抗原，將特異性抗體包被在固相載體表面，同時加入待檢抗原和酶標(biāo)記抗原，對照孔只加酶標(biāo)記抗原，保溫，待檢抗原和酶標(biāo)記抗原競爭性與包被抗體結(jié)合，洗滌后加入底物顯色。競爭法ELISA檢測病毒特異性IgM或IgA等分，用于病毒病的早期診斷。將抗人IgM（μ鏈特異性）或抗人IgA抗體吸附于固相表面，然后加入已知的特異性抗原進(jìn)行反應(yīng)，再加入酶標(biāo)記的特異性抗體，形成大的免疫復(fù)合物，加入底物顯色后，測得的OD值與特異性IgM或IgA抗體含量成正比。捕獲法ELISA

酶聯(lián)免疫吸附試驗酶標(biāo)記登革病毒單抗與登革病毒復(fù)合物人IgM抗體抗人IgM單克隆抗體原理：抗原－人血清（待檢標(biāo)本）－兔抗人球蛋白－羊抗兔球蛋白－兔抗酶免疫血清－酶－底物。

酶抗酶法ELISA1個生物素分子可以結(jié)合4個親和素分子，用生物素代替酶標(biāo)記抗原或抗體，然后再與酶標(biāo)記親和素結(jié)合，或通過親和素與酶標(biāo)記生物素結(jié)合。該方法較普通ELISA更為敏感。

生物素－親和素系統(tǒng)

8．免疫印跡技術(shù)

將蛋白電泳和酶免疫技術(shù)結(jié)合使用的一種方法，可用于病毒抗原和特異性抗體的檢測。WB原理將已知抗原經(jīng)聚丙烯酰胺（或瓊脂糖）電泳后，轉(zhuǎn)印于硝酸纖維膜（NC膜）作為固相抗原，再進(jìn)行類似ELISA的酶免疫反應(yīng)。待測病毒抗原電泳后轉(zhuǎn)印至NC膜，用已知特異性抗體鑒定或檢測病毒抗原。9．免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)

基于特異性的抗原抗體反應(yīng)，但用膠體金作標(biāo)記物，可用肉眼直接觀測結(jié)果。膠體金本身帶有紫紅色作為標(biāo)志，以已知抗原或抗體包被固相載體（如NC膜等），加待測標(biāo)本，如果標(biāo)本中有相應(yīng)抗體（或抗原）則與包被抗原（或抗體）結(jié)合，然后加膠體金標(biāo)記的第二抗體（或病毒抗體）。對照線，噴涂有兔抗羊IgG抗體IgM線，噴涂有抗人IgM單克隆抗體IgG線，噴涂有抗人IgG單克隆抗體樣品墊，含純化的重組1～4型登革病毒E蛋白、金標(biāo)羊IgG抗體和金標(biāo)抗登革病毒單克隆抗體（抗E蛋白）膠體金試驗操作步驟滴3滴緩沖液

干凈試管

操作步驟干凈試管

加入1μl待檢血清

操作步驟干凈試管

放入測試條

操作步驟015靜置15min

結(jié)果判斷：對照線IgM線IgG線IgM陰性IgG陰性IgM陽性IgG陰性IgM陰性IgG陽性IgM陽性IgG陽性試劑失效

10.放射免疫測定（RIA）

放射性核素標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的示蹤敏感性，同時不改變其免疫學(xué)反應(yīng)的特異性。當(dāng)其與待測抗原或抗體結(jié)合后，通過測定放射性強度即可達(dá)到定性或定量檢測的目的。RIA可分為液相法和固相法，也可分為雙抗體夾心法雙抗原夾心法競爭法抑制法等

RIA靈敏度達(dá)到ng～fg水平，并有高特異性、精確性、樣品用量少易規(guī)范化和自動化等優(yōu)點。但缺點是需要特殊儀器，有一定的放射性危害。11．全血凝集試驗

原理是以化學(xué)方法將抗人紅細(xì)胞單克隆抗體與病毒抗原（或抗體）結(jié)合，檢測血液標(biāo)本中的抗體（或抗原），血液標(biāo)本需加抗凝劑，將標(biāo)記物與血液混合后，若標(biāo)本中存在相應(yīng)抗體（或抗原），由于標(biāo)記物能同時與病毒抗體（或抗原）和紅細(xì)胞結(jié)合，而使紅細(xì)胞發(fā)生凝集。（二）病毒的分離

1．動物試驗

根據(jù)不同的實驗?zāi)康?、實驗動物種類和接種材料，往往需要采用不同的接種途徑：皮下接種皮內(nèi)接種靜脈接種腹腔接種腦內(nèi)接種

2．雞胚

雞胚培養(yǎng)是較早用于病毒分離培養(yǎng)的技術(shù)之一，從1902年Centanni首次應(yīng)用雞胚培養(yǎng)雞瘟病毒至今。在痘類病毒、皰疹病毒、粘液病毒等研究中仍起著重要作用。雞胚培養(yǎng)用于：病毒分離鑒定疫苗生產(chǎn)抗原制備病毒性質(zhì)及抗病毒藥物研究等方面。接種途徑包括：絨毛囊膜接種尿囊腔接種羊膜腔接種卵黃囊接種

3．組織培養(yǎng)

組織培養(yǎng)包括組織塊培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。是指將機體組織或細(xì)胞，在體外模擬機體內(nèi)生理條件，使之生存生長。目前一般指細(xì)胞培養(yǎng)，應(yīng)用于病毒分離的主要是單層細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)分為：

（1）原代細(xì)胞培養(yǎng)

（2）傳代細(xì)胞系

（3）二倍體細(xì)胞株

（1）原代細(xì)胞培養(yǎng)

由新鮮組織制備的單層細(xì)胞，一般只能傳2～3代。

（2）傳代細(xì)胞系

由原代細(xì)胞連續(xù)傳代或由腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)而來，HeLa（子宮頸癌）細(xì)胞、Hep-2（人喉上皮癌）細(xì)胞、A549（肺癌）細(xì)胞、Vero（傳代非洲綠猴腎）細(xì)胞等。（3）二倍體細(xì)胞株

保持二倍體特性，一般能傳40～50代，但代數(shù)高的細(xì)胞其敏感性較差。我國常用于分離鑒定病毒的原代細(xì)胞有:人胚腎人胚肺人胚肝人胎盤羊膜雞胚猴腎地鼠腎地鼠肝等細(xì)胞培養(yǎng)方法:靜置培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)混合培養(yǎng)克隆培養(yǎng)病毒的檢測主要通過:觀察細(xì)胞病變細(xì)胞吸附試驗中和試驗熒光染色等方法

大多數(shù)病毒增殖均會引起細(xì)胞病變，稱為致細(xì)胞病變作用（CPE）。有些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖不產(chǎn)生CPE，但分泌至細(xì)胞表面的病毒對某些紅細(xì)胞有吸附現(xiàn)象。中和試驗是鑒定病毒最可靠的方法之一。用熒光染色，有病毒生長，在熒光顯微鏡下可見病毒生長部位顯熒光。病毒干擾現(xiàn)象電鏡觀察補體結(jié)合試驗血凝試驗等檢測細(xì)胞培養(yǎng)物中有無病毒增殖。（三）分子生物學(xué)診斷技術(shù)

分子生物學(xué)診斷技術(shù)在病毒學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用，無論在流行病學(xué)調(diào)查、臨床診斷還是科學(xué)研究，都顯示出其重要性。常用的分子生物學(xué)診斷技術(shù)主要有分子雜交技術(shù)凝膠電泳技術(shù)PCR基因芯片核酸序列分析等1．分子雜交技術(shù)

基于DNA雙螺旋分子的堿基互補原理設(shè)計的，核酸雙螺旋分子在高溫和變性劑存在的情況下可以解鏈成單鏈分子，在低溫時又可以依據(jù)堿基互補原則復(fù)性形成雙鏈，如果在復(fù)性時加入標(biāo)記的探針分子，探針與待測核酸分子中相同序列互補形成帶標(biāo)記的雙鏈分子，利用放射自顯影或其他方法示蹤，當(dāng)樣品存在與探針相同序列的核酸分子時，即顯陽性結(jié)果。病毒學(xué)檢測中常用的雜交方法有：Southern雜交Northern雜交斑點雜交分支鏈DNA雜交技術(shù)原位雜交和液相雜交等方法。可直接用于病毒核酸檢測，又可用于病毒核酸PCR擴增產(chǎn)物的檢測。

斑點雜交：將病毒核酸點樣在NC膜或尼龍膜上，直接進(jìn)行雜交，方法簡便。

轉(zhuǎn)印雜交：將樣品經(jīng)凝膠電泳分離后轉(zhuǎn)印至NC膜上，然后進(jìn)行雜交。又分為DNA印跡（Southernblot）雜交和RNA印跡（Northernblot）雜交。

原位雜交：主要用于細(xì)胞內(nèi)病毒的檢測和定位。是將細(xì)胞或組織切片固定于載玻片上，保持細(xì)胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu)，經(jīng)蛋白酶K處理增加細(xì)胞膜和核酸的通透性，探針在合適條件下與細(xì)胞內(nèi)的病毒核酸雜交。2．凝膠電泳技術(shù)

凝膠電泳技術(shù)是常用的分離鑒定核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子方法之一，可直接用于如輪狀病毒、呼腸孤病毒等病毒的檢測和病毒PCR產(chǎn)物檢測等。可分為瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳及DNA限制性內(nèi)切酶酶切分析。

瓊脂糖凝膠電泳：以瓊脂糖作載體，常采用水平電泳分離、鑒定核酸。聚丙烯酰胺凝膠電泳：適用于蛋白質(zhì)和分子量在1kb以下的核酸分離鑒定，分連續(xù)和不連續(xù)電泳。

DNA限制性內(nèi)切酶酶切分析：提取核酸后，用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切后電泳，根據(jù)電泳的核酸帶圖進(jìn)行診斷和分析。3．聚合酶鏈反應(yīng)

PCR技術(shù)原理：PCR是一種體外酶促合成特異DNA片段的技術(shù)由三個步驟反復(fù)的熱循環(huán)構(gòu)成：高溫變性、低溫退火和適溫延伸PCR技術(shù)原理：高溫（95℃）下，靶DNA雙鏈變性成為兩條單鏈DNA模板低溫（55℃）下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈DNA模板結(jié)合，形成部分雙鏈Taq酶在最適溫度（72℃）下，以引物3’端為合成的起點，以單核苷酸為原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新鏈。PCR技術(shù)原理：每一雙鏈DNA模板，經(jīng)過一次解鏈、退火、延伸三個步驟的熱循環(huán)后就成了兩條雙鏈DNA分子。如此反復(fù)，每一次循環(huán)所產(chǎn)生的DNA均能成為下一次循環(huán)的模板，每一次循環(huán)都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區(qū)拷貝數(shù)擴增一倍，PCR產(chǎn)物得以2n的指數(shù)形式迅速擴增。經(jīng)過25～30個循環(huán)后，理論上可使基因擴增109倍以上，實際上一般可達(dá)106～107倍。PCR具備了特異、敏感等許多優(yōu)點，特別適用于難以分離培養(yǎng)和其他方法不易檢測的病毒的診斷。

常用的PCR技術(shù)有:巢式PCR、半巢式PCR、RT－PCR、免疫PCR、定量PCR、RNA捕獲PCR、競爭PCR、原位PCR、多重PCR、單管PCR等RealtimeRT-PCR原理：TaqMan探針標(biāo)記有熒光報告基團和熒光淬滅基團與擴增片段有互補的特異核苷酸序列正常情況下，報告基團發(fā)出的熒光被淬滅基團吸收而檢測不到熒光當(dāng)兩者分開后，報告基團發(fā)出的熒光不能被淬滅基團吸收，因而可檢測到熒光游離出來的報告基團量越多，熒光的強度越強PCR時所用的DNA聚合酶常常帶有5’→3’外切酶活性，在延伸階段可把探針切斷，使熒光報告基團和熒光淬滅基團分開，于是熒光得以檢測。每個TaqMan

探針被切斷，對應(yīng)一個熒光基團的放光，也對應(yīng)一個擴增片段的產(chǎn)生，所以，這又大大提高了定量的靈敏度。任何時間點都可以檢測擴增片段的量，也就是“Realtime”的意義之所在。TaqManRealtimePCR原理圖

結(jié)果判斷5、基因芯片DNA芯片技術(shù)是近年出現(xiàn)的DNA分析技術(shù)，具有高度并行性、多樣性、微型化和自動化等特點，主要用于測序、轉(zhuǎn)錄情況分析、基因診斷與基因藥物的設(shè)計和感染性疾病的診斷。但由于目前基因新片技術(shù)尚不夠完善，其價格昂貴，對操作的要求高，使其應(yīng)用范圍受到很大限制。6、核酸序列測定

很多情況下，需要了解病毒基因序列以作進(jìn)一步的研究。如了解克隆的新病毒序列、研究病毒基因組突變、確定病毒耐藥基因位點、了解病毒編碼基因等。一些情況下，還可以對病毒進(jìn)行分型。（四）病毒性疾病的電子顯微鏡診斷在某些病毒感染早期的標(biāo)本中，可以直接檢出病毒顆粒，而且從形態(tài)學(xué)上可以鑒別病毒的種類，特別是對目前尚難分離培養(yǎng)的病毒，甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、輪狀病毒顆粒。

電鏡的主要作用為：

1、發(fā)現(xiàn)和鑒別新病毒。

2、研究病毒引起的組織和細(xì)胞病理改變，以及病毒在細(xì)胞內(nèi)的繁殖動態(tài)和形態(tài)發(fā)生。3、研究病毒的超微結(jié)構(gòu)。4、確定某些疾病的病毒病因。常用的電鏡技術(shù)包括：超薄切片標(biāo)本電鏡觀察、負(fù)染標(biāo)本電鏡觀察和免疫電鏡技術(shù)。

四、病毒性疾病的診斷輔助檢查

輔助檢查是臨床疾病診斷中的重要部分，在病毒性疾病是診斷中也有重要地位。（一）三大常規(guī)檢查

1．血常規(guī)檢查2．尿液檢查3．糞便檢查1．血常規(guī)檢查微小病毒B19對骨髓紅系組細(xì)胞具有親嗜性，引起紅細(xì)胞生成障礙，導(dǎo)致暫時性再生障礙性貧血危象，但多在7～10天后恢復(fù)。如艾滋病、慢性乙型肝炎合并肝硬化等，也可伴有貧血。而病毒性感染是一般伴有白細(xì)胞總數(shù)減少，淋巴細(xì)胞增多。也有些病毒性疾病出現(xiàn)白細(xì)胞總數(shù)明顯增高，如流行性出血熱、流行性乙型腦炎等。某些病毒性疾病，如流行性出血熱、登革熱等可出現(xiàn)血小板計數(shù)明顯減少。但大多數(shù)病毒性的診斷不需要進(jìn)行骨髓檢查。2．尿液檢查急性病毒感染時常因高熱而引起蛋白尿。腎綜合征出血熱時腎損害較為嚴(yán)重，尿中可出現(xiàn)蛋白質(zhì)、紅細(xì)胞、上皮細(xì)胞、管型等。急性黃疸型病毒性肝炎時，尿膽原、尿膽紅素均呈陽性。人巨細(xì)胞病毒感染后，可在尿中查見含該病毒包涵體的上皮細(xì)胞。3．糞便檢查病毒性胃腸炎時常為水樣便，鏡檢基本正?；蚺加猩倭堪准?xì)胞。

（二）生化檢查

（1）血清總蛋白和白蛋白/球蛋白（A/G）比值

（2）蛋白電泳

（3）甲胎蛋白（AFP）測定（4）

血氨檢查1．蛋白代謝檢查AFP是肝癌的標(biāo)記蛋白，急性病毒性肝炎、慢性活動性病毒性肝炎、肝硬化AFP皆可增高，但多在300ug/L以下。

血氨檢查在病毒性肝炎、肝昏迷時是常用是生化指標(biāo)。2．脂類的檢查作為重型病毒性肝炎預(yù)后的指標(biāo)。3．膽紅素代謝的檢查4．血清酶學(xué)檢查5．腎功能檢查

如腎綜合征出血熱時，常伴有腎功能損害。6．電解質(zhì)、酸堿平衡檢查很多病毒性疾病可引起發(fā)熱、嘔吐、腹瀉、腎功能損害，可導(dǎo)致電解質(zhì)、酸堿平衡失調(diào)。7．血氣分析病毒性肺炎有時可導(dǎo)致呼吸衰竭，此時需要檢查動脈血氣分析，以及調(diào)整治療方案。（三）免疫功能檢查

1．體液免疫功能檢查

B淋巴細(xì)胞計數(shù)免疫球蛋白測定

補體測定自身抗體測定2．細(xì)胞免疫功能檢查

遲發(fā)性皮膚過敏試驗T淋巴細(xì)胞記數(shù)

T細(xì)胞功能檢測

NK細(xì)胞活性檢測

T細(xì)胞亞群檢測（四）腦脊液檢查

腦脊液（cerebrospinalfluid，CSF）中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染時，CSF的顏色、透明度一般無變化，蛋白質(zhì)含量可僅有輕度增加，腦脊液中細(xì)胞數(shù)輕度增加，以淋巴細(xì)胞為主。確診需依靠CSF的病毒分離，免疫學(xué)檢查和血清學(xué)檢查。（五）脫落細(xì)胞學(xué)診斷

鼻咽部粘膜脫落細(xì)胞學(xué)檢查，對一些呼吸道病毒感染的診斷有較重要的參考價值。鼻腔試子直接涂片，用負(fù)壓吸引法經(jīng)鼻飼管從鼻咽部采集分泌物，經(jīng)離心后上清液可行病毒分離、抗原或核酸檢測，而沉淀物用于涂片。

對于一些可伴發(fā)腎損害的全身性病毒感染（如腎綜合征出血熱、CMV感染、麻疹），尿細(xì)胞學(xué)檢查對診斷有一定的幫助。在腎綜合征出血熱病程早期是尿沉渣涂片中，可檢出融合多核細(xì)胞。急性期麻疹患者可檢出多核巨細(xì)胞和胞核和胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體，CMV患者尿中檢出嗜酸性包涵體的細(xì)胞。（六）影象學(xué)檢查

影象學(xué)檢查是病毒性疾病診斷的重要組成部分，可對病毒感染的部位、范圍、嚴(yán)重程度及預(yù)后提供參考。1．X線檢查2．B型超聲檢查3．CT檢查4．核磁共振成像（MRI）檢查

五、病毒性疾病診斷活組織檢查

活組織檢查不僅可作為病毒性疾病診斷的輔助手段，而且對疾病的預(yù)后、療效的判斷也有價值，如肝臟穿刺活檢，已廣泛用于慢性病毒性肝炎的診斷和鑒別診斷、預(yù)后的判斷、治療效果的考核。活組織檢查包括：1．肝臟穿刺活檢2．淋巴結(jié)穿刺活檢在病毒性疾病的診斷中，應(yīng)用淋巴結(jié)穿刺活檢的主要是排除淋巴結(jié)核、淋巴瘤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤及淋巴結(jié)炎。淋巴結(jié)標(biāo)本可用于電鏡檢查，以發(fā)現(xiàn)微小病毒B19、麻疹病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒，但臨床上較少用。3．肺活組織檢查偶爾才用經(jīng)氣管、導(dǎo)管刷和經(jīng)皮肺穿刺抽吸獲取標(biāo)本，用于病毒培養(yǎng)或電鏡檢查。由于用常規(guī)檢查方法即可診斷大多數(shù)呼吸道病毒感染，故極少應(yīng)用肺活組織檢查。以上活檢標(biāo)本除應(yīng)用于形態(tài)學(xué)、組織學(xué)檢查之外，還可用于免疫組織化學(xué)、原位PCR檢測。

總之，病毒病的實驗室診斷方法復(fù)雜，病毒種類繁多，在眾多的病毒學(xué)檢測方法中，應(yīng)用于病毒病的診斷時，可根據(jù)實驗室條件和具體情況等合理選擇，將有助于臨床對病毒性疾病的確診。對于疑難病例往往需要選擇多種方法檢測，才能達(dá)到目的。學(xué)校常見傳染病

的發(fā)現(xiàn)與預(yù)防控制

背景近年來，突發(fā)公共衛(wèi)生事件頻發(fā)并呈上升趨勢，突發(fā)事件以傳染病疫情居多，而學(xué)校又是突發(fā)傳染病疫情發(fā)生最重要場所，因此做好學(xué)校多發(fā)傳染病的預(yù)防控制工作，對減少突發(fā)公共衛(wèi)生事件的發(fā)生、保證社會的和諧安寧、保護廣大青少年兒童的身體健康、維護學(xué)校的正常教學(xué)秩序意義非常重大。近三年全國突發(fā)公共衛(wèi)生事件發(fā)生概況

2006年全國突發(fā)公共衛(wèi)生事件總體概況

（含未分級事件）

時間事件起數(shù)報告病例數(shù)報告死亡數(shù)200653711630618452005232396922

772升降比(%)+130.32+68.24+6.462006年全國Ⅳ級以上突發(fā)公共衛(wèi)生事件分級情況合計重大較大一般起數(shù)％起數(shù)％起數(shù)％起數(shù)％傳染病215978.121477.786121.25208484.75食物中毒33512.1200.0015353.311827.40職業(yè)中毒471.7015.563712.8990.37其它中毒381.3700.00124.18261.06環(huán)境因素事件331.1900.0020.70311.26群體性預(yù)防接種反應(yīng)100.36316.6772.4400.00群體性不明原因疾病100.3600.00103.4800.00其它公共衛(wèi)生事件1324.7800.0051.741275.16合計2764100.0018100.00287100.002260100.002006年Ⅳ級以上學(xué)校突發(fā)公共衛(wèi)生事件概況2006年事件數(shù)：1916起，占全部突發(fā)公共衛(wèi)生事件總數(shù)的69.3%病例數(shù)：110957人，占全部突發(fā)公共衛(wèi)生事件總病例數(shù)的77.0%死亡數(shù)：20人，占全部突發(fā)公共衛(wèi)生事件總死亡數(shù)的4.6%與2005年相比事件數(shù)：上升132.5%病例數(shù)：上升105.2%死亡數(shù)：下降47.4%以鄉(xiāng)鎮(zhèn)中、小學(xué)為主鄉(xiāng)鎮(zhèn)中小學(xué)報告1228起(64.05%)縣級以下1493起，占78%2007年全國突發(fā)公共衛(wèi)生事件總體概況

（含未分級事件）時間事件起數(shù)報告病例數(shù)報告死亡數(shù)2007810613153199120065371163061

845升降比(%)+50.92-19.34+17.282007年全國Ⅳ級以上突發(fā)公共衛(wèi)生事件分類情況事件類別2007年2006年較2006年升降比(%)事件數(shù)病例數(shù)死亡數(shù)事件數(shù)病例數(shù)死亡數(shù)事件數(shù)病例數(shù)死亡數(shù)傳染病20538522946225611834294-9.00-27.98-51.06食物中毒3261069225933414105205-2.40-24.2026.34職業(yè)中毒6436282472717436.1733.5810.81環(huán)境因素事件562027663211942875.0069.77135.71其它中毒26436394051025-35.00-14.5156.00預(yù)防接種事件91880101763-10.006.82-100.00群體性不明原因疾病21431027541-80.00-99.49200.00醫(yī)源性感染事件1180000---放射性輻照事件100000---其它事件311390123568757-11.43-79.7871.43合計25691003565072764144227437-7.05-30.4216.022007年Ⅳ級以上學(xué)校突發(fā)公共衛(wèi)生事件概況2007年事件數(shù)：1888起，占全部突發(fā)公共衛(wèi)生事件總數(shù)的73.5%，病例數(shù)：78246人，占全部突發(fā)公共衛(wèi)生事件總病例數(shù)的88.0%死亡數(shù)：17人，占全部突發(fā)公共衛(wèi)生事件總死亡數(shù)的3.4%與2006年相比事件數(shù)：下降1.5%病例數(shù)：下降29.5%死亡數(shù)：下降15.0%以鄉(xiāng)鎮(zhèn)中、小學(xué)為主鄉(xiāng)鎮(zhèn)中小學(xué)報告1235起(65%)縣級以下1504起，占80%2005～2007年全國Ⅳ級以上傳染病事件

報告起數(shù)前10位病種比較200520062007病種病種病種1流行性腮腺炎（350）

水痘（847）

水痘（836）2流行性感冒（249）

流行性腮腺炎（570）

流行性腮腺炎（361）3麻疹（180）

流行性感冒（354）

風(fēng)疹（270）4霍亂（108）

乙腦（210）霍亂（101）5水痘（94）

風(fēng)疹（136）

流行性感冒（94）6細(xì)菌性痢疾（81）

霍亂（98）

急性出血性結(jié)膜炎（76）7其它感染性腹瀉?。?8）

細(xì)菌性痢疾（84）

其它感染性腹瀉病（63）8人感染豬鏈球菌?。?0）麻疹（75）

麻疹（53）9甲肝（35）

其它感染性腹瀉?。?7）

甲肝（52）10狂犬?。?4）合計：1219甲肝（45）合計：2486

細(xì)菌性痢疾（32）合計：19382008年福建省突發(fā)公共衛(wèi)生事件概況通過各種途徑上報78起以傳染病類為主，占72.97%，主要是水痘（21.62%）、霍亂（16.22%）、流感（13.51%）等疾病。主要發(fā)生在學(xué)校和村落，分別占56.76%（21/37）和21.62%（8/37），學(xué)校又以小學(xué)為主，占37.84%（14/37），罹患人數(shù)占55.58%（897/1614），其它學(xué)校還有中學(xué)、幼兒園、其它學(xué)校等。我市近3年學(xué)校突發(fā)傳染病疫情的發(fā)生情況

1、2006年全市通過電話、傳真、網(wǎng)絡(luò)等各種途徑報告的各種傳染病爆發(fā)事件或苗頭事件17起，發(fā)生在學(xué)校及托幼機構(gòu)的13起，占77％；

2、2007年全市通過電話、傳真、網(wǎng)絡(luò)等各種途徑報告的傳染病突發(fā)事件或苗頭事件11起，全部發(fā)生在學(xué)校及托幼機構(gòu)。

3、2008年全市通過電話、傳真、網(wǎng)絡(luò)等各種途徑報告的傳染病爆發(fā)疫情事件或苗頭事件14起，全部發(fā)生在學(xué)校及托幼機構(gòu)。4、2006一2008年我市通過突發(fā)公共衛(wèi)生事件報告管理信息系統(tǒng)報告的突發(fā)公共衛(wèi)生事件共12起，除4起為發(fā)生在企業(yè)、家庭的食物中毒外，其余8起均為發(fā)生在學(xué)校的傳染病事件，其中水痘7起，腮腺炎1起。5、2008年我市通過電話、傳真、網(wǎng)絡(luò)報告的發(fā)生在學(xué)校的突發(fā)傳染病爆發(fā)疫情或聚集性病例14起，其中水痘4起、流感樣病例4起、手足口病3起、流行性腮腺炎1起、風(fēng)疹1起、流行性急性出血性結(jié)膜炎1起。我市學(xué)校常見的傳染病疫情﹡水痘﹡流感（含甲型H1N1流感）﹡流行性腮腺炎﹡手足口病﹡風(fēng)疹﹡麻疹﹡其他感染性腹瀉﹡急性出血性結(jié)膜炎（紅眼病）一、常見傳染病的識別與發(fā)現(xiàn)主要通過了解常見傳染病的臨床表現(xiàn)來識別和發(fā)現(xiàn)傳染病。水痘典型水痘:皮疹出現(xiàn)前24小時可呈現(xiàn)前驅(qū)癥狀如低熱,不適,厭食等,亦可見猩紅熱樣或麻疹樣前驅(qū)疹,但很快消失,幼兒常無前驅(qū)期。皮疹特點：①分批出現(xiàn)紅色斑疹或斑丘疹迅速發(fā)展為清亮卵圓型淚滴狀小水皰，周圍有紅暈，無臍眼，經(jīng)24小時水皰內(nèi)容物變?yōu)闇啙?，水皰易破潰，皰疹持續(xù)3~4天，然后從中心開始干縮，迅速結(jié)痂，在疾病高峰期可見到丘疹、新舊水皰和結(jié)痂同時存在;②皮疹分布呈向心性，集中在皮膚受壓或易受刺激處，開始為軀干，以后至面部、頭皮，四肢遠(yuǎn)端較少，瘙癢感重;③粘膜皮疹可出現(xiàn)在口腔結(jié)膜生殖器等處易破潰形成淺潰瘍流行性感冒典型流感起病急：潛伏期為數(shù)小時~4天，一般為1~2天；高熱，體溫可達(dá)39~40℃，伴畏寒，一般持續(xù)2~3天；全身中毒癥狀重，如乏力、頭痛、頭暈、全身酸痛；持續(xù)時間長，體溫正常后乏力等癥狀可持續(xù)1~2周；呼吸道卡它癥狀輕微，常有咽痛，少數(shù)有鼻塞、流涕等；少數(shù)有惡心、嘔吐、食欲不振、腹瀉、腹痛等。有少數(shù)患者以消化道癥狀為主要表現(xiàn)。老人、嬰幼兒、有心肺疾病著者或接受免疫抑制劑治療者患流感后可發(fā)展為肺炎。

流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒侵犯腮腺引起的急性呼吸傳染病，并可侵犯各種腺組織或神經(jīng)系統(tǒng)及肝、腎、心臟、關(guān)節(jié)等器官。潛伏期8～30天，平均18天。起病大多較急，無前驅(qū)癥狀。有發(fā)熱、畏寒、頭痛、咽痛、食欲不佳、惡心、嘔吐、全身疼痛等，數(shù)小時腮腺腫痛，逐漸明顯，體溫可達(dá)39℃以上，成人患者一般較嚴(yán)重。

腮腺腫脹最具特征性。一般以耳垂為中心，向前、后、下發(fā)展，狀如梨形，邊緣不清；局部皮膚緊張，發(fā)亮但不發(fā)紅，觸之堅韌有彈性，有輕觸痛；言語、咀嚼（尤其進(jìn)酸性飲食）時刺激唾液分泌，導(dǎo)致疼痛加劇；通常一側(cè)腮腺腫脹后1～4天累及對側(cè)，雙側(cè)腫脹者約占75%。頜下腺或舌下腺也可同時被累及。重癥者腮腺周圍組織高度水腫，使容貌變形，并可出現(xiàn)吞咽困難。腮腺管開口處早期可有紅腫，擠壓腮腺始終無膿性分泌物自開口處溢出。腮腺腫脹大多于1～3天到達(dá)高峰，持續(xù)4～5天逐漸消退而回復(fù)正常。全程約10～14天。頜下腺和舌下腺也可同時受累，或單獨出現(xiàn)。頜下腺腫大，表現(xiàn)為頸前下頜腫脹并可觸及腫大的腺體。舌下腺腫大可見舌及口腔底腫脹，并出現(xiàn)吞咽困難。手足口病手足口病是由多種腸道病毒引起的常見傳染病，以嬰幼兒發(fā)病為主。大多數(shù)患者癥狀輕微，以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征。少數(shù)患者可并發(fā)無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，個別重癥患兒病情進(jìn)展快，易發(fā)生死亡。少年兒童和成人感染后多不發(fā)病，但能夠傳播病毒。引起手足口病的腸道病毒包括腸道病毒71型（EV71）和A組柯薩奇病毒（CoxA）、?？刹《荆‥cho）的某些血清型。EV71感染引起重癥病例的比例較大。腸道病毒傳染性強，易引起暴發(fā)或流行。臨床癥狀表現(xiàn)為急性起病，發(fā)熱，口腔粘膜出現(xiàn)散在皰疹，手、足和臀部出現(xiàn)斑丘疹、皰疹，皰疹周圍可有炎性紅暈，皰內(nèi)液體較少?？砂橛锌人?、流涕、食欲不振等癥狀。部分病例僅表現(xiàn)為皮疹或皰疹性咽峽炎。預(yù)后良好。少數(shù)病例（尤其是小于3歲者）可出現(xiàn)腦膜炎、腦炎、腦脊髓炎、肺水腫、循環(huán)障礙等，病情兇險，可致死亡或留有后遺癥。風(fēng)疹

風(fēng)疹是由風(fēng)疹病毒通過呼吸道和直接接觸傳播引起的急性病毒性傳染病。潛伏期10-23天,風(fēng)疹傳染性不如麻疹，癥狀比麻疹輕。主要表現(xiàn)發(fā)熱、出疹、淋巴結(jié)腫大和結(jié)膜炎，病程短。皮疹特點為小的淡紅色斑丘疹，先面部而后頸部，再軀干后四肢，通常24小時全身疹子出齊，2－5天疹退，不留色素。出疹嚴(yán)重者熱度一般為38℃左右，疹退后熱退，有耳后、枕部、頸下和頸部淋巴結(jié)腫大。麻疹麻疹是麻疹病毒引起的急性呼吸道傳染病主要癥狀有發(fā)熱、上呼吸道炎、眼結(jié)膜炎等臨床表現(xiàn):有潛伏期，前驅(qū)期，出疹期和恢復(fù)期。潛伏期：7-21天,平均為10－14天。前驅(qū)期：2－4天，發(fā)熱、上呼吸道卡他癥狀、結(jié)膜炎等，此期后期可見到頰粘膜周圍有紅暈的0.5-1mm灰白色小點，稱柯氏斑，是早期診斷麻疹的標(biāo)志。出疹期：多在發(fā)熱4－5天后出現(xiàn)，持續(xù)2－5日不等，皮疹為玫瑰色丘疹，自耳后、發(fā)際、前額、面、頸部開始逐漸波及軀干和四肢手掌足底，出疹時體溫達(dá)到高峰，皮疹出齊后體溫開始下降?；謴?fù)期：皮疹色變暗，有色素沉著及糠皮樣脫落。如不出現(xiàn)并發(fā)癥，病情自愈。風(fēng)疹樣皮疹麻疹樣皮疹其它感染性腹瀉感染性腹瀉廣義系指各種病原體腸道感染引起之腹瀉，這里僅指除霍亂、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒以外的感染性腹瀉，為《中華人民共和國傳染病防治法》中規(guī)定的丙類傳染病。這組疾病可由病毒、細(xì)菌、真菌、原蟲等多種病原體引起，其流行面廣，發(fā)病率高，是危害人民身體健康的重要疾病病毒性腹瀉在感染性腹瀉中占有重要的比例，其病原體包括輪狀病毒、腺病毒、星狀病毒、小圓病毒、杯狀病毒等，目前在國內(nèi)病毒性腹瀉中檢出的主要病原體是輪狀病毒。感染性腹瀉的臨床表現(xiàn)可分為二大類：炎癥性腹瀉及分泌性腹瀉。炎癥性腹瀉為病原體侵襲上皮細(xì)胞，引起炎癥而致的腹瀉。常伴有發(fā)熱，糞便多為粘液便或粘液血便，糞便的顯微鏡檢查見有較多的紅、白細(xì)胞。屬于此類感染性腹瀉的除細(xì)菌性痢疾外，還有侵襲性大腸桿菌腸炎、腸出血性大腸桿菌腸炎、彎曲菌腸炎、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌腸炎等。分泌性腹瀉指病原體或其產(chǎn)物作用于腸上皮細(xì)胞，引起腸液分泌增多和/或吸收障礙而導(dǎo)致的腹瀉。病人多不伴有發(fā)熱，糞便性狀為稀便或水樣便，糞便的顯微鏡檢查多無細(xì)胞，或可見少許紅、白細(xì)胞。屬于此類腹瀉的除霍亂外，還有腸產(chǎn)毒性大腸桿菌腸炎、致瀉性弧菌腸炎、非O1/非O139霍亂弧菌腸炎、輪狀病毒腸炎、隱孢子蟲腸炎，以及常以食物中毒形式出現(xiàn)的臘樣芽胞桿菌腹瀉，金黃色葡萄球菌腹瀉等。急性出血性結(jié)膜炎急性出血性結(jié)膜炎又稱流行性出血性結(jié)膜炎（俗稱紅眼?。┦墙?0年來世界暴發(fā)流行的一種新型急性病毒性眼病。它的病原體是新型腸道病毒70型（EV70）或柯薩奇病毒A24型變種（Cox24v）引起的。臨床表現(xiàn)：潛伏期很短，接觸傳染源后2小時～48小時內(nèi)雙眼同時或先后發(fā)病。自覺眼不適感1-2小時即開始眼紅，很快加重。明顯眼刺激癥狀，刺痛、砂礫樣異物感、燒灼感、畏光、流淚。眼瞼水腫，瞼、球結(jié)膜高度充血。耳前淋巴結(jié)腫大，有壓痛。急性出血性結(jié)膜炎患者一般無全身癥狀，少數(shù)人有發(fā)熱、咽痛等上感癥狀。本病為自限性，自然病程1～2周，視力無損害，角膜無基質(zhì)浸潤，一般無后遺癥。二、學(xué)校（托幼機構(gòu)）傳染病的

預(yù)防控制未出現(xiàn)疫情時的預(yù)防措施出現(xiàn)疫情時的防疫措施未出現(xiàn)疫情時的預(yù)防措施1、成立學(xué)校傳染病防控機構(gòu)，如學(xué)校傳染病防控領(lǐng)導(dǎo)小組，由校領(lǐng)導(dǎo)擔(dān)任組長，成員由相關(guān)部門人員如后勤（生管）人員、班主任、保健老師等組成，負(fù)責(zé)組織、協(xié)調(diào)、開展全校傳染病防控工作。建立健全相關(guān)制度，如學(xué)校傳染病疫情報告制度、學(xué)生晨檢、因病缺勤病因追查與登記制度、入園入托查驗證制度等。2、指派專人（保健老師）負(fù)責(zé)具體開展學(xué)校傳染病防控工作，落實各項常規(guī)防控措施。如疫情報告、宣傳培訓(xùn)、預(yù)防接種查驗證、疫情發(fā)生后相關(guān)防控措施的落實等。3、加強全校師生傳染病防控知識的學(xué)習(xí)與培訓(xùn)，通過制定培訓(xùn)計劃，定期舉辦健康講座、開設(shè)健康教育課等多種形式全面提高師生的自我保健防病意識和能力。4、做好各種防控物質(zhì)貯備。平時學(xué)校應(yīng)做好預(yù)防控制傳染病發(fā)生與蔓延的相關(guān)物質(zhì)準(zhǔn)備。如貯備一定數(shù)量的體溫計、外科口罩、消殺用品、有條件的學(xué)?？稍诮淌宜奚岚惭b紫外燈以備用。5、加強食品、環(huán)境、飲用水管理，消滅蚊蠅老鼠蟑螂等病媒生物。食堂工作人員必須是經(jīng)過體檢取得合格證的健康人員，食堂必須提供新鮮安全的食品、保證餐具專用或經(jīng)合格消毒；經(jīng)常開展愛國衛(wèi)生運動，保證校內(nèi)環(huán)境的整潔衛(wèi)生，消除病媒生物的孳生地；學(xué)校必須提供符合國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)的飲用水，同時向?qū)W生提供足量開水，防止學(xué)生飲用生水引發(fā)腸道傳染病。定期開展滅蚊、滅蠅、滅鼠、滅蟑等除四害活動。6、認(rèn)真落實學(xué)校預(yù)防接種查驗證制度。預(yù)防接種是預(yù)防傳染病最經(jīng)濟、最有效的方法，每一新學(xué)年開學(xué)后，學(xué)校應(yīng)及時開展預(yù)防接種查驗證工作，使各種疫苗未及時接種的學(xué)生能夠及時得到補種，提高新生對各種疫苗可預(yù)防疾病的整體抵抗力。7、創(chuàng)造各種條件，為學(xué)生提供各種有利于心身發(fā)展的學(xué)習(xí)生活條件。如寬敞明亮的教室、寬大通風(fēng)采光良好的宿舍、潔凈的食堂、可口衛(wèi)生的飯菜、足量的洗手洗浴設(shè)備、充裕的體育鍛煉時間和設(shè)施等，使師生的衣食住行學(xué)各方面安全均得以保證。疫情發(fā)生時的防疫措施學(xué)校傳染病的預(yù)防控制應(yīng)從：控制傳染源切斷傳染途徑3個方面入手。保護易感人群傳染源的控制1、嚴(yán)格隔離病人：嚴(yán)格掌握并按各種傳染病的隔離期限責(zé)成患病學(xué)生住院或居家隔離治療，直至滿隔離期限后或經(jīng)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生院提供醫(yī)師開具的無傳染性的證明，患病學(xué)生方可返校上課。2、加強晨午檢，及早發(fā)現(xiàn)與處理疑似病人：傳染病發(fā)生期間，根據(jù)各種傳染病的臨床特點，每日認(rèn)真詢問、觀察、檢測（測體溫）學(xué)生的健康狀況，發(fā)現(xiàn)學(xué)生有傳染病早期癥狀（如發(fā)熱、皮疹、腹瀉、嘔吐、黃疸等）以及疑似傳染病病人時，應(yīng)當(dāng)及時告知學(xué)校疫情報告人，學(xué)校疫情報告人要進(jìn)行進(jìn)一步排查，將學(xué)生因病缺勤、傳染病早期癥狀、疑似傳染病病人患病及病因排查結(jié)果登記專用登記冊上，以確保做到對傳染病病人的早發(fā)現(xiàn)、早報告。對發(fā)現(xiàn)有可疑癥狀的學(xué)生應(yīng)立即通知家長帶至或直接送至醫(yī)院診治。

3、加強疫情監(jiān)測，執(zhí)行疫情日報告、零報告：學(xué)校發(fā)生傳染病疫情期間，學(xué)校疫情報告責(zé)任人每日將晨午檢情況記錄在學(xué)生因病缺勤、傳染病早期癥狀、疑似傳染病病人患病及病因排查結(jié)果登記表上，每日定時向轄區(qū)疾病預(yù)防控制機構(gòu)報告，如有特殊情況則隨時報告，轄區(qū)疾控中心則根據(jù)每日疫情進(jìn)行情況，評估和調(diào)整防近措施。4、根據(jù)具體情況，可對病例的密切接觸者采取預(yù)防性服藥、隔離醫(yī)學(xué)觀察等措施。切斷傳播途徑1、喝開水、吃熟食、洗凈手；2、保持室內(nèi)的空氣流通，開窗通風(fēng)，適當(dāng)?shù)目諝庀荆ㄗ贤鉄粽丈?、空氣噴霧消毒等）3、加強用具、食具、學(xué)具、物體表面的消毒；4、洗曬衣物、被褥等；5、整治環(huán)境，殺滅四害。6、必要時可適當(dāng)調(diào)課或停課保護易感人群1、均衡飲食、加強營養(yǎng)、適量運動、充足休息，增強抵抗力；2、開展應(yīng)急性主被動免疫：如甲肝、麻疹流行早期，可對密切接觸者注射丙種球蛋白以防止發(fā)病或減輕癥狀；麻疹、風(fēng)疹、流行性腮腺炎、水痘等流行早期可進(jìn)行應(yīng)急性疫苗接種，以提高全人群的免疫水平，防止疫情蔓延。3、停止大型人群聚集性活動，避免到人群密集的公共場所，盡量不去探視患者；4、大力開展健康教育工作：學(xué)校通過授課、版報、發(fā)放宣傳單等形式對師生進(jìn)行各類傳染病防控知識的宣傳教育，將疾病防治知識輸灌給師生，將采取上述防控措施目的意義告訴全體師生，取得全體師生的配合，認(rèn)真貫徹落實各項防控措施，才能取得預(yù)期的效果。各種常見傳染病的隔離期

麻疹：出疹后5天；風(fēng)疹：出疹后14天；流行性腮腺炎：至腮腺完全消腫后3天止，自發(fā)病起約3周時間手足口?。鹤园l(fā)病日起14天流行性感冒：熱退后2天；水痘：至水痘皰疹完全結(jié)痂為止，但不少于發(fā)病后7天流腦：癥狀消失后3天，但不少于發(fā)病后1周乙腦：隔離至體溫正常急性出血性結(jié)膜炎：癥狀完全消失，至少7日。甲型H1N1流感定義為一種新型呼吸道傳染病，屬于流行性感冒的一種新型別，其病原為新甲型H1N1流感病毒，病毒基因中包含有豬流感、禽流感和人流感三種流感病毒的基因片段。世界衛(wèi)生組織（WHO）初始將此型流感稱為“人感染豬流感”，后將其重新命名為“甲型H1N1流感”。流行現(xiàn)狀

國際疫情情況

4月中下旬起,源自北美的甲型H1N1流感疫情開始在全球多個國家蔓延,疫情發(fā)展迅速，截至10月9日，全球確診病例數(shù)已超過37萬例，但由于許多疫情嚴(yán)重的國家已不再檢測和匯報新增病例，這個數(shù)字顯然比實際感染數(shù)字要低得多；甲型H1N1流感至少造成全球4525人死亡；而全球各地報告的流感病例中，有近76%是甲型H1N1流感病例,說明甲流已成為當(dāng)前流感流行的優(yōu)勢菌株。

國內(nèi)疫情情況我國內(nèi)地5月11日在四川成都發(fā)現(xiàn)了首例輸入性確診病例后，各地相繼發(fā)生病例，截止10月12日，累計報告23766例甲型H1N1流感確診病例，已治愈21342例，10月4日，西藏報告了一例死亡病例，這也是內(nèi)地報告的首例甲型H1N1流感死亡病例。我國已經(jīng)經(jīng)歷了輸入性病例、二代病例和傳染源不明的本土病例三個階段，到目前，31個省、市、自治區(qū)均已報告了確診病例。9月開學(xué)后，國內(nèi)多個省市出現(xiàn)甲型流感聚集性病例，甲流也擴展至此前未發(fā)現(xiàn)病例的省份，僅9月份一個月確診病例就達(dá)1.7萬多例，同時也出現(xiàn)了無癥狀帶毒者病例，并出現(xiàn)了學(xué)校聚集性病例和醫(yī)務(wù)人員感染。這些情況的出現(xiàn)加大了甲型H1N1流感防控工作的難度，目前我國的甲型H1N1流感疫情正在從東部向西部，從南方向北方，從城市向農(nóng)村蔓延，專家認(rèn)為，隨著天氣逐漸轉(zhuǎn)冷，包括我們國慶長假結(jié)束以后，大量流動人口要返回到學(xué)習(xí)、工作崗位上，出現(xiàn)大量聚集性疫情暴發(fā)的可能性很大，并且重癥病例和死亡病例也會不斷出現(xiàn)，疫情防控的形勢還是比較嚴(yán)峻的。流行病學(xué)1、傳染源：甲型H1N1流感病人和無癥狀感染者為主要傳染源。2、傳播途徑：主要通過飛沫或氣溶膠經(jīng)呼吸道傳播，也可通過口腔、鼻腔、眼睛等處黏膜直接或間接接觸傳播。接觸患者的呼吸道分泌物、體液和被病毒污染的物品亦可能造成傳播。易感人群：人群普遍易感。臨床表現(xiàn)潛伏期：一般為1-7天，多為1-3天臨床表現(xiàn)：通常表現(xiàn)為流感樣癥狀，包括發(fā)熱、咳嗽、咽痛、咯痰、流涕、鼻塞、頭痛、全身酸痛、乏力。部分病例出現(xiàn)嘔吐和/或腹瀉。約10%病例可不發(fā)熱。體征主要包括咽部充血和扁桃體腫大?？砂l(fā)生肺炎等并發(fā)癥。少數(shù)病例病情進(jìn)展迅速，出現(xiàn)呼吸衰竭、多臟器功能不全或衰竭。患者原有的基礎(chǔ)疾病亦可被誘發(fā)加重，病情嚴(yán)重者可以導(dǎo)致死亡。診斷

疑似病例發(fā)病前7天內(nèi)密切接觸傳染期甲型H1N1流感病例，并出現(xiàn)流感樣臨床表現(xiàn)的；或發(fā)病前7天內(nèi)曾到過甲型H1N1流感流行的國家或地區(qū)，出現(xiàn)流感樣臨床表現(xiàn)；或出現(xiàn)流感樣臨床表現(xiàn)，甲型流感病毒檢測陽性，但進(jìn)一步檢測排除既往已存在的亞型。在通風(fēng)條件良好的房間單獨隔離。

臨床診斷病例僅限于以下情況作出臨床診斷：同一起甲型H1N1流感暴發(fā)疫情中，未經(jīng)實驗室確診的流感樣癥狀病例，在排除其他致流感樣癥狀疾病時，可診斷為臨床診斷病例。在通風(fēng)條件良好的房間單獨隔離。確診病例

出現(xiàn)流感樣臨床表現(xiàn)，甲型H1N1流感病毒核酸檢測陽性或分離到甲型H1N1流感病毒或血清甲型H1N1流感病毒的特異性中和抗體水平呈4倍或4倍以上升高。在通風(fēng)條件良好的房間進(jìn)行隔離。住院病例可多人同室。治療根據(jù)患者病情及當(dāng)?shù)蒯t(yī)療資源狀況，按照重癥優(yōu)先的原則安排住院治療，輕癥病例可安排居家隔離觀察與治療。（一）一般治療。休息，多飲水，密切觀察病情變化；對高熱病例可給予退熱治療。（二）抗病毒治療。研究顯示，此種甲型H1N1流感病毒目前對神經(jīng)氨酸酶抑制劑奧司他韋（oseltamivir）、扎那米韋（zanamivir）敏感，對金剛烷胺和金剛乙胺耐藥。（三）其他治療。（四）中醫(yī)辨證治療。學(xué)校發(fā)生甲型H1N1流感疫情時

應(yīng)采取的措施1.病例應(yīng)按照當(dāng)?shù)匦l(wèi)生部門的要求，及時接受隔離治療。2.衛(wèi)生部門在學(xué)校的配合下，開展對病例密切接觸者的追蹤，并實施集中醫(yī)學(xué)觀察或居家醫(yī)學(xué)觀察。中小學(xué)生中的密切接觸者原則上以居家醫(yī)學(xué)觀察為主，高校學(xué)生中的密切接觸者原則上以集中醫(yī)學(xué)觀察為主。病例所在學(xué)校建立與居家醫(yī)學(xué)觀察者的聯(lián)系，及時了解其每日健康狀況，并將密切接觸者健康狀況報告當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制部門和教育行政部門。醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)負(fù)責(zé)每日對集中醫(yī)學(xué)觀察者實行隨訪、報告。3.衛(wèi)生部門指導(dǎo)、協(xié)助學(xué)校加強晨午檢工作，加強學(xué)校發(fā)熱、咳嗽或咽痛等流感樣癥狀監(jiān)測和因病缺課監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)、報告和診治可疑病例。學(xué)校每日向當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制部門和教育行政部門報告居家醫(yī)學(xué)觀察者和可疑病例的情況，即實行日報告和零報告。4.衛(wèi)生部門指導(dǎo)學(xué)校對教室、圖書館（閱覽室）、教研室、宿舍等師生學(xué)習(xí)、工作、生活場所進(jìn)行消毒。采取消毒、感染控制等措施，做好疫情控制工作。5.經(jīng)當(dāng)?shù)卣鷾?zhǔn)同意，對出現(xiàn)病例的托幼機構(gòu)實施全園停課7天（或7天以上）的措施。衛(wèi)生、教育等相關(guān)部門在當(dāng)?shù)卣念I(lǐng)導(dǎo)下，加強放假兒童的校外管理，避免其在學(xué)校外的相互接觸和聚集。托幼機構(gòu)復(fù)課后，應(yīng)繼續(xù)加強晨檢和病例報告，并向?qū)俚丶膊☆A(yù)防控制機構(gòu)和教育部門每日報告全校學(xué)生和教職員工的健康狀況，至少持續(xù)14天。6、學(xué)校停止舉辦校內(nèi)各種大型師生集會和會議等活動。7、在衛(wèi)生部門指導(dǎo)下，學(xué)校加強宣傳教育工作。8、根據(jù)當(dāng)?shù)兀h級以上）人民政府的決定，學(xué)校采取臨時停課或暫時關(guān)閉措施。（1）原則上，停課的范圍應(yīng)根據(jù)疫情波及的范圍和發(fā)展趨勢，由小到大，如由班級到年級，由年級到全校，由一個學(xué)校到多所學(xué)校等。（2）如果14天內(nèi)，同一班級出現(xiàn)2例及以上甲型H1N1流感病例時，該班級可停課；如果14天內(nèi)，同一學(xué)校有2個及以上班級需要停課時，該班級所在年級可停課；如果14天內(nèi)，同一學(xué)校有2個及以上年級需要停課時，該學(xué)校可以全體停課。（3）停課前，除應(yīng)告知學(xué)生、家長及教職員工甲型H1N1流感相關(guān)知識外，應(yīng)讓學(xué)生、家長及教職員工與學(xué)校保持聯(lián)系，報告其是否出現(xiàn)流感樣癥狀。學(xué)校應(yīng)向?qū)俚丶膊☆A(yù)防控制機構(gòu)和教育行政部門每日報告學(xué)生和教職員工的健康狀況。（4）停課時間不少于7天，自最后一例甲型H1N1流感病例被隔離或離校之日算起?？筛鶕?jù)放假學(xué)生和教職員工的健康狀況，隨時調(diào)整放假期限。（5）中小學(xué)校停課放假后，衛(wèi)生、教育等相關(guān)部門應(yīng)在當(dāng)?shù)卣念I(lǐng)導(dǎo)下，加強放假學(xué)生校外管理，避免其在學(xué)校外的相互接觸和聚集。高校停課后，要加強停課學(xué)生的在校管理。（6）復(fù)課前，必須對教室、閱覽室、食堂、廁所等場所進(jìn)行徹底清掃消毒；因甲型H1N1流感暫時停課的學(xué)生，必須在恢復(fù)健康，經(jīng)有關(guān)衛(wèi)生部門確定沒有傳染性并出具有效的復(fù)課證明后方可復(fù)學(xué)。（7）復(fù)課后，未痊愈的學(xué)生應(yīng)繼續(xù)居家隔離治療，至其病后7天或癥狀完全消失后24小時（以兩者之間較長者為準(zhǔn)），方可上學(xué)。（8）復(fù)課后，學(xué)?；蛲杏讬C構(gòu)還應(yīng)繼續(xù)加強晨檢和病例報告，并向?qū)俚丶膊☆A(yù)防控制機構(gòu)和教育行政部門每日報告全校學(xué)生和教職員工的健康狀況，至少持續(xù)14天。9、對出現(xiàn)病例的高校實施學(xué)生停課不離校，在校進(jìn)行觀察措施。衛(wèi)生、教育等相關(guān)部門在當(dāng)?shù)卣念I(lǐng)導(dǎo)下，加強放假學(xué)生的校內(nèi)外管理，避免學(xué)生聚集活動；并做好被隔離