免疫學(xué)期末考試問答題 2024衛(wèi)生學(xué)考試學(xué)習(xí)資料

《免疫學(xué)》期末考試4選2問答題舉例說明細胞因子在醫(yī)學(xué)實踐中的應(yīng)用細胞因子是機體免疫細胞和一些非免疫細胞產(chǎn)生的一組具有廣泛生物活性的異質(zhì)性肽類調(diào)節(jié)因子，包括：①白細胞介素（ILS）；②集落刺激因子（CSF）；③干擾素（IFN）；④腫瘤壞死因子（TNF）；⑤轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）；⑥小分子免疫肽，如轉(zhuǎn)移因子、胸腺肽等。各種細胞因子的生物學(xué)功能，請參考第六章。它們的臨床治療，目前主要有兩個方面：（1）促進造血與免疫功能重建：在放射性骨髓損傷，腫瘤放療及化療后以及骨髓移植后，機體的免疫功能十分低下，極易受細菌、病毒及其他致病因子的感染。大多數(shù)細胞因子除作用于成熟的免疫細胞，參與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)外，醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理還具有促進骨髓干細胞增殖、分化心及促進T細胞在胸腺內(nèi)發(fā)育的作用。如各各CSF、EPO、IL-3、IL-6、IL-7、IL-9、干細胞因子（SCF）等都可刺激不同的造血干細胞的增殖分化。不同細胞因子之間可協(xié)同促進造血與免疫功能的重建。（2）惡性腫瘤的治療：一些細胞因子，如TNF本身就有殺腫瘤細胞作用。但大多數(shù)細胞因子本身并不能殺傷腫瘤細胞，但可通過增強免疫系統(tǒng)的功能來抑制腫瘤的生長。IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ等都有這種作用。但細胞因子單獨應(yīng)用，需大劑量，毒副作用強，因此目前認為細胞因子聯(lián)合應(yīng)用或細胞因子與抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用，可以提高腫瘤的治療效果，減少副作用。（二）舉例說明HLA與醫(yī)學(xué)實踐的關(guān)系HLA這一多態(tài)系統(tǒng)在其種系發(fā)展過程中被保存下來，具有特殊的生物學(xué)意義。

1靶功能

HLAⅠ類抗原分布于所有有核細胞。其抗原特異性在于肽鏈抗原決定簇的特定氨基酸順序。這些抗原可被外來物質(zhì)例如某種病毒或化學(xué)物質(zhì)加以改變，當這些基因產(chǎn)物被改變之后，便成為自身免疫原，成為免疫排除的耙子?？梢?，耙功能的實質(zhì)在于“識別自我”，以保證機體的完整性。因此，分布于所有細胞及其多態(tài)性這一特點十分重要。

2識別功能

HLA的識別功能實指在免疫反應(yīng)中特有的協(xié)同作用?？贵w在B細胞生成，但在多數(shù)情況下，需要巨噬細胞和T淋巴細胞參與。其過程是：抗原經(jīng)巨噬細胞處理后，抗原信息傳遞給T輔助細胞，后者再將信息傳給B細胞，使B細胞進而分化生成專一抗體。在這個過程中，T輔助細胞不僅識別致敏巨噬細胞上的抗原，同時也要識別巨噬細胞是否與其本身的Ⅱ類抗原相一致。就是說，只有巨噬細胞的單體型和T輔助細胞的單體型相一致時，T輔助細胞才被激活，從而使免疫反應(yīng)在嚴密的遺傳控制下進行。

HLA在醫(yī)學(xué)上的意義如下：1.HLA與同種器官移植的關(guān)系器官移植的成敗主要取決于供、受者間的組織相容性,其中HLA等位基因的匹配程度起關(guān)鍵作用。組織相容性程度的確定，涉及對供受者作HLA分型和進行交叉配合試驗。在同種器官移植中，Ⅱ類分子的相容性往往更加重要。HLA與輸血反應(yīng)的關(guān)系HLA分型主要與非溶血性輸血反應(yīng)等白細胞抗原引起的輸血反應(yīng)有關(guān)，主要見于反復(fù)輸血治療的患者中。3.HLA與疾病的相關(guān)性HLA是人體對疾病易感的主要免疫遺傳學(xué)成分或與疾病關(guān)聯(lián)的原發(fā)成分。HLA和疾病關(guān)聯(lián)的機制是由于同一個HLA座位上的等位基因，在結(jié)構(gòu)上的差異。分析這些差異何醫(yī)學(xué)''教育網(wǎng)搜集整理以會造成個體免疫應(yīng)答能力的不同，為闡明該疾病發(fā)生的分子免疫學(xué)基礎(chǔ)，提供了有價值的切入途徑。4.HLA的\o"生理學(xué)"\t"/new/37a176a2009/_blank"生理學(xué)意義HLA的生理學(xué)意義主要有作為抗原提呈分子參與特異性免疫應(yīng)答和作為調(diào)節(jié)分子參與固有免疫應(yīng)答（如編碼某些補體成份，調(diào)節(jié)NK細胞和部分殺傷細胞的活性，在應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮作用等）。疾病HLA抗原相對危險性RR強直性脊柱炎Ⅰ類型

B27＞100青少年類風濕性關(guān)節(jié)炎B2724Reiter病B2730～50牛皮癬性關(guān)節(jié)炎B176Bechat綜合征Cw69發(fā)作性睡眠B5110～15尋常天皰瘡Ⅱ類

DR220I型糖尿病DR424多發(fā)性硬化癥DR3/DR420全身性\t"/Article/Class573/_blank"紅斑狼瘡DR24全身性硬化癥Ⅲ類C4AQOC4BQOC4AQO6119（三）流式細胞術(shù)在醫(yī)學(xué)實踐中的應(yīng)用【摘要】流式細胞術(shù)(FCM)是一種對單細胞快速定量分析的新技術(shù),能夠快速分析單個細胞的多種特性，其既可以定性也可以定量，適于大量樣品的檢測。隨著流式細胞分析技術(shù)與方法的日臻完善和臨床應(yīng)用范圍不斷拓寬，幾乎臨床醫(yī)學(xué)各學(xué)科都涉及到流式細胞分析技術(shù)的應(yīng)用，已逐漸成為推動臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要手段,本文就流式細胞術(shù)在臨床上的應(yīng)用進展作一綜述。

流式細胞術(shù)(flowcytometry,FCM)是20世紀70年代發(fā)展起來的對單細胞定量分析的一種新技術(shù)。它借鑒了熒光標記技術(shù)、激光技術(shù)、單抗技術(shù)和計算機技術(shù),具有極高的檢測速度與統(tǒng)計精確性,而且從單一細胞可以測得多個參數(shù),為生物醫(yī)學(xué)與臨床檢驗提供了全新視角和強有力手段[1]。目前,隨著單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展,流式細胞儀檢測技術(shù)已經(jīng)廣泛使用在基礎(chǔ)研究和臨床實踐的各個方面,發(fā)揮著重要作用。本文就其在臨床上的應(yīng)用綜述如下。

1流式細胞術(shù)在免疫學(xué)中的應(yīng)用

FCM可以進行淋巴細胞亞群分析,可同時檢測出一種或幾種淋巴細胞表面亞群分析,將不同的淋巴細胞亞群區(qū)分開來,并計算出它們相互間的比例。通過對患者淋巴細胞各亞群數(shù)量的測定了解淋巴細胞的分化功能,鑒別新的淋巴細胞亞群。更重要的是通過研究大多數(shù)疾病的特異性淋巴細胞亞群或某些細胞表面標志的存在、缺乏、過度表達等,對一些疾病,如免疫性疾病、感染性疾病、腫瘤等診斷、治療、免疫功能重建和器官移植監(jiān)測等有重要的臨床意義。如HIV主要侵襲CD4+T細胞而導(dǎo)致CD4淋巴細胞減少,CD4/CD8淋巴細胞比值下降,為艾滋病的診斷和治療提供依據(jù)[2]。在其它免疫功能性疾病的診治方面如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者的淋巴細胞變化可反映該病的活動情況和器官侵犯程度,伴有嚴重腎臟損害的SLE患者可出現(xiàn)低CD4+、高CD8+的現(xiàn)象[3]。此外,FCM可以用來進行組織相容性抗原(HLA)群體分析;HLA-B27抗原陽性與強直性脊柱炎等一系列關(guān)節(jié)病有著不同程度的正相關(guān)。FCM應(yīng)用HLA-B27特異性單抗檢測抗原，其敏感性較傳統(tǒng)的微量細胞毒性實驗大大提高,同時多參數(shù)的熒光測定使我們能夠在特定的細胞亞群中分析HLA-B27[4-5],還可以利用FCM進行移植配型移植后免疫狀態(tài)監(jiān)測。

2流式細胞術(shù)在血液學(xué)中的應(yīng)用

血液系統(tǒng)腫瘤的診斷和治療FCM通過對外周血細胞或骨髓細胞表面抗原和DNA的檢測分析，對白血病、淋巴瘤等各種血液病的診斷、預(yù)后判斷和治療起著舉足輕重的作用。FCM采用各種抗血細胞表面分化抗原的單克隆抗體，借助于各種熒光染料測定一個細胞的多種參數(shù)，以正確地判斷出該細胞的屬性。各種血細胞系統(tǒng)都具有其獨特的抗原，當形態(tài)學(xué)檢查難以區(qū)別時，免疫表型參數(shù)對各種急性白血病、淋巴瘤的診斷和鑒別診斷有決定性作用，其診斷的準確性可達到90%左右[5]。微小殘留病變(MRD)是白血病復(fù)發(fā)的主要根源,FCM能在患者緩解期檢測是否有殘留病變細胞，及早發(fā)現(xiàn)后采取措施避免復(fù)發(fā)。而且測定DNA倍體和進行細胞周期分析對指導(dǎo)白血病化療也有一定作用，不同的白血病患者或同一患者在不同病期白血病細胞增殖狀況不同，定期了解細胞增殖情況采取相應(yīng)藥物可以提高療效。急性白血病的多耐藥基因(MDR)也常用FCM檢測，F(xiàn)CM特有的敏感性和特異性，用于檢測二氨基苯茚酮mRNA的表達產(chǎn)物P糖蛋白(Pgp)及其活性(作為藥物的排出泵，降低細胞內(nèi)藥物濃度)，可以更直接的反映耐藥程度。陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)是一種造血干細胞克隆病,細胞CD55、CD59抗原表達減低是該病的一個特點。FCM采用熒光標記的單克隆抗體對血細胞CD59的表達做定量分析，可以協(xié)助臨床做出診斷并判斷疾病的嚴重程度。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)是反映骨髓造血功能的重要指標。FCM通過某些熒光染料(吖啶橙等)與紅細胞中RNA結(jié)合，定量測定網(wǎng)織紅細胞中RNA，得到網(wǎng)織紅細胞占成熟紅細胞的百分比。有報道認為[6]FCM比目測法的精確度更高。此外，F(xiàn)CM還可以測量出網(wǎng)織紅細胞的成熟度，對紅細胞增殖能力的判斷很有意義，為干細胞移植術(shù)后恢復(fù)的判斷、貧血的治療監(jiān)測、腫瘤患者放、化療對骨髓的抑制狀況等提供了依據(jù)。造血干/祖細胞計數(shù)造血干/祖細胞具有自我復(fù)制和多向分化潛能，是各種血細胞和免疫細胞的始祖。造血干/祖細胞計數(shù)對造血干細胞移植意義重大。CD34抗原是早期造血干/祖細胞的表面標志，應(yīng)用FCM分析、計數(shù)CD34細胞已成為造血干/祖細胞移植、造血重建的重要指標。由于血小板的活化程度可由血小板膜糖蛋白的表達水平的高低來判斷,FCM測定血小板膜糖蛋白的表達情況可以診斷血小板膜糖蛋白異常所致疾病,這類疾病很少見但病因明確,主要是GpⅡb/Ⅲa或GpⅠb/Ⅸ/Ⅴ缺陷所致?；颊哐“迥pⅡb/Ⅲa的缺乏,導(dǎo)致血小板聚集功能明顯低下,這就是常染色體隱性遺傳病-血小板無力癥。而巨血小板綜合征是由于GpⅠb/Ⅸ/Ⅴ復(fù)合物數(shù)量或質(zhì)量的缺陷導(dǎo)致的遺傳性出血性疾病。FCM還可以通過單抗免疫熒光標記血小板膜糖蛋白監(jiān)測血小板功能及活化情況,評價活化血小板程度在血栓性疾病和血栓前狀態(tài)發(fā)生發(fā)展中的作用,有利于血栓栓塞性疾病的診斷和治療,此外血小板活化時細胞內(nèi)的鈣離子濃度是活化血小板監(jiān)測的一項非免疫性指標,免疫性血小板減少性紫癜患者血漿中可產(chǎn)生血小板自身抗體,結(jié)合在血小板表面,稱為血小板相關(guān)抗體,檢測血小板表面或血清中的相關(guān)抗體,可用于該病的診斷及治療監(jiān)測[7]。

3流式細胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用

FCM在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用主要是利用DNA含量測定進行包括癌前病變及早期癌變的檢出、化療指導(dǎo)以及預(yù)后評估等工作,FCM可精確定量DNA含量,能對癌前病變的性質(zhì)和發(fā)展趨勢做出判斷,有助于癌變的早期診斷[6]。首先需要把實體瘤組織解聚、分散制備成單細胞懸液,用熒光染料(碘化吡啶P1)染色后對細胞的DNA含量進行分析,將不易區(qū)分的群體細胞分成三個亞群(G期、S期、G2期),DNA含量直接代表細胞的倍體狀態(tài),非倍體細胞與腫瘤惡性程度有關(guān)。DNA非整倍體細胞峰存在可為腫瘤診斷提供有力依據(jù)[6]。腫瘤細胞DNA倍體分析對患者預(yù)后的判斷亦有重要作用。異倍體腫瘤惡性病變的復(fù)發(fā)率、轉(zhuǎn)移率及死亡率均較高,而二倍體及近二倍體腫瘤的預(yù)后則較好。FCM不僅可以對惡性腫瘤DNA含量進行分析,還可根據(jù)化療過程中腫瘤DNA分布直方圖的變化去評估療效,了解細胞動力學(xué)變化,對腫瘤化療具有重要的意義。臨床醫(yī)師可以根據(jù)細胞周期各時相的分布情況,依據(jù)化療藥物對細胞動力學(xué)的干擾理論,設(shè)計最佳治療方案。從DNA直方圖直接地看到腫瘤細胞的殺傷變化,及時選用有效的藥物對腫瘤細胞達到最大的殺傷效果。

4流式細胞術(shù)在細胞凋亡和多藥耐藥基因中的應(yīng)用

細胞凋亡是機體生長發(fā)育、細胞分化和病理狀態(tài)中細胞死亡的過程,凋亡典型的形態(tài)特征是核染色質(zhì)固縮并分離,細胞質(zhì)濃縮,細胞膜和核膜皺曲,核斷裂形成片斷,最后形成數(shù)量不等的凋亡小體。FCM可以進行DNA含量分析,通過二倍體細胞G0/G1期峰前的亞二倍體峰來確定。在凋亡早期,一些與膜通透性改變及凋亡有關(guān)的蛋白在細胞膜表面有特定表達。通過FCM結(jié)合單克隆抗體可以檢測表達這些蛋白的細胞,從而確定細胞的凋亡情況。多重耐藥性(multidrugresistance,MDR)是由多藥耐藥基因編碼的P糖蛋白(P-gp)親脂化合物,包括多種抗癌藥物和熒光染料的跨膜性排出泵。從人淋巴細胞排除熒光染料與細胞內(nèi)P-gp的含量直接相關(guān)。當淋巴細胞出現(xiàn)MDR陽性細胞時,患者對化療藥物開始出現(xiàn)耐藥性,需要考慮其它治療方式。多藥耐藥是腫瘤患者化療失敗的主要原因,FCM對多藥耐藥基因(如P170)和凋亡抑制基因及凋亡活化基因表達的測定,可為臨床治療效果分析提供有力依據(jù)[8]。

5流式細胞術(shù)在器官移植中的應(yīng)用

FCM在器官移植中占有重要地位,可被用來判斷供者與受者之間是否合適,用來鑒別和定型同種異體反應(yīng)抗體[6]。通過供者白細胞和受者的血清共同孵育,如果受者血清中存在針對供者的循環(huán)抗體,就會同供者的淋巴細胞結(jié)合,再加入熒光素標記的二抗來顯示這種結(jié)合,此方法能在移植手術(shù)前發(fā)現(xiàn)高風險的受體。移植后免疫表型的監(jiān)測也很重要。FCM可用于檢測移植后血液或移植內(nèi)免疫成分的變化,以預(yù)防移植后免疫排斥反應(yīng),細胞免疫抑制治療效果和移植存活情況,可敏感地預(yù)測排斥反應(yīng)的發(fā)生,為臨床治療提供有效依據(jù)。

6流式細胞術(shù)在臨床細菌學(xué)中的應(yīng)用

流式細胞術(shù)在臨床細菌學(xué)中的應(yīng)用具有快捷、靈敏,能同時進行多參數(shù)分析等優(yōu)點,可廣泛用于細菌、病原體、毒素和血清抗體及藥敏試驗。免疫熒光檢測方法中的流式微球分析(CBA)是FCM的一個新應(yīng)用。這種方法也可用于真菌、寄生蟲、病毒以及這些病原體的混合感染的檢測。近年來,FCM與熒光染料的聯(lián)合運用可判斷細菌的活力和功能狀態(tài),由于速度快,該方法已被建議作為臨床實驗室的常規(guī)藥敏試驗。FCM藥敏檢測方法較多,通過測量加入藥物孵育后的散射光的DNA含量來判斷抗生素對細菌的敏感性。該法現(xiàn)