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文檔簡(jiǎn)介
ICS65.020.20
CCSB05
DB1308
承德市地方標(biāo)準(zhǔn)
DB1308/T316—2022
香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程
2022-10-31發(fā)布2022-11-01實(shí)施
承德市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布
DB1308/T316—2022
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定
起草。
本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。
本文件起草單位:平泉市希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司。
本文件主要起草人:梁希才、張永峰、柳鳳玉、劉海軍、王麗波、劉紹蒼、梁宏麗、張亞紅、張晨
光、孟凡飛、王彥玲、石建軍、王帥。
I
DB1308/T316—2022
香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程
1范圍
本文件規(guī)定了香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)的前期準(zhǔn)備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。
本文件適用于香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)過(guò)程管理。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引
用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修
改單)適用于本文件。
本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。
3術(shù)語(yǔ)和定義
本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。
4前期準(zhǔn)備
4.1培養(yǎng)基
小米谷粒、0.5%食品級(jí)甘油、葡萄糖粉、食品級(jí)酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。
4.2儀器設(shè)備
高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、液體發(fā)酵罐、生化培養(yǎng)箱、搖床、pH酸度計(jì)、比重計(jì)、打漿機(jī)、液體
接種槍、0.9立方塑料桶、50目網(wǎng)篩、750ml塑料原種瓶、PDA平板培養(yǎng)基、無(wú)棉蓋體、搖瓶、接種工具
等。
5操作流程
谷粒選擇→谷粒浸泡→濾水→添加石膏→裝瓶→滅菌→接菌→菌絲培養(yǎng)→搖瓶→后續(xù)養(yǎng)菌→低溫
處理→谷粒菌種懸浮液制備→懸浮液過(guò)濾→轉(zhuǎn)罐擴(kuò)大培養(yǎng)→檢驗(yàn)→備用。
6操作方法
6.1谷粒選擇
選擇帶皮小米谷粒,籽粒飽滿(mǎn)、無(wú)雜質(zhì)、直徑為0.1cm~0.15cm,破碎率控制在2%以?xún)?nèi)。
6.2谷粒浸泡
使用塑料桶或箱作為容器,將谷粒倒入容器中,加水浸泡,水與谷粒的體積比為2:1。環(huán)境溫度20℃
1
DB1308/T316—2022
左右,浸泡4h;環(huán)境溫度15℃左右,浸泡10h;環(huán)境溫度10℃左右,浸泡24h。以谷粒浸透無(wú)白心為
宜。
6.3濾水
浸泡完成后濾水,將谷粒置于50目篩子上進(jìn)行濾水;以篩底沒(méi)有水滴滴下,且手抓谷粒不粘手為
宜。
6.4添加石膏
按照谷粒干重的1%比例添加石膏,攪拌均勻。
6.5裝瓶
選擇750ml塑料原種瓶,采用機(jī)械或手工裝瓶,裝料高度至瓶肩;裝瓶后的重量在1.3kg~1.4kg。
使用無(wú)棉蓋體扣蓋封口,作為培養(yǎng)基。
6.6滅菌
裝瓶后的培養(yǎng)基在4h內(nèi)進(jìn)行滅菌,防止培養(yǎng)基變酸;采用高壓滅菌方式滅菌,溫度達(dá)到121℃時(shí)保
持4h,確保滅菌徹底。
6.7接菌
滅菌完成后,待培養(yǎng)基溫度降到25℃左右時(shí)在超凈工作臺(tái)無(wú)菌的條件下進(jìn)行接菌,每支20mm×200
mm的斜面試管PDA培養(yǎng)基母種轉(zhuǎn)接4瓶培養(yǎng)基。
6.8菌絲培養(yǎng)
接菌完成后,在培養(yǎng)溫度為22℃,空氣相對(duì)濕度為60%,二氧化碳濃度不超過(guò)0.2%的條件下進(jìn)行培
養(yǎng)。
6.9搖瓶
當(dāng)菌絲長(zhǎng)到培養(yǎng)基1/4左右時(shí)進(jìn)行搖瓶,使得長(zhǎng)有菌絲部分的培養(yǎng)基與沒(méi)長(zhǎng)菌絲的培養(yǎng)基再次混合,
以加快菌種的生長(zhǎng)速度。
6.10后續(xù)養(yǎng)菌
待培養(yǎng)基中長(zhǎng)滿(mǎn)菌絲后,繼續(xù)培養(yǎng)10d~12d,令菌絲長(zhǎng)入培養(yǎng)基內(nèi)部,充分分解谷粒培養(yǎng)基,使
谷粒充分軟化,培養(yǎng)成為谷粒原種。該階段的管理要加強(qiáng)通風(fēng)換氣,二氧化碳濃度不要高于0.15%。
6.11低溫處理
將長(zhǎng)好菌絲的谷粒菌種在4℃環(huán)境下放置6h。
6.12谷粒菌種懸浮液制備
在無(wú)菌的條件下,使用打漿機(jī)對(duì)低溫處理的谷粒菌種進(jìn)行充分破碎,在破碎過(guò)程中加入溫度為4℃
的0.5%的無(wú)菌甘油溶液,使破碎后的谷粒菌種變成懸浮漿液,其中谷粒菌種與甘油溶液的體積比為1:1。
打漿機(jī)對(duì)谷粒菌種進(jìn)行破碎時(shí)采用間歇模式,每旋轉(zhuǎn)30s停頓10s,以旋轉(zhuǎn)10次為限,防止打漿過(guò)程中
溫度升高。
2
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6.13懸浮液過(guò)濾
三角瓶消毒,安裝消毒后的50目篩片,打漿結(jié)束后倒入三角瓶中過(guò)濾。
6.14轉(zhuǎn)罐擴(kuò)大培養(yǎng)
在無(wú)菌條件下,將過(guò)濾后的谷粒菌種懸浮液轉(zhuǎn)入到盛裝培養(yǎng)液的液體發(fā)酵罐中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng),
懸浮漿液與培養(yǎng)液的體積比為1:1200。發(fā)酵罐培養(yǎng)液成分按質(zhì)量配比為:玉米粉2%、豆粕粉2%、葡萄
糖1.5%、酵母粉0.5%和94%的無(wú)菌水。發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)條件為溫度25℃,罐內(nèi)壓力0.01兆帕,培養(yǎng)6d。
6.15檢驗(yàn)
6.15.1取樣
在擴(kuò)大培養(yǎng)即將結(jié)束時(shí)檢驗(yàn)一次即可,即在培養(yǎng)6d取樣檢驗(yàn)。
6.15.2感官檢查
6.15.2.1看
將樣品靜置桌上觀察。一看菌液顏色和透明度;二看菌絲形態(tài)和大?。蝗瓷锨逡号c沉淀的比例中
菌絲體占比達(dá)到80%以上;
6.15.2.2旋
手提樣品瓶輕輕旋轉(zhuǎn)一下,觀其菌絲體的特點(diǎn)。醪液的粘稠度高,說(shuō)明菌種性能好;稀薄表明菌球
少,不宜使用。菌絲的懸浮力好,放置5min不沉淀,表明菌種生長(zhǎng)力強(qiáng);反之,如果菌絲極易沉淀,
說(shuō)明菌絲已老化或死亡。
6.15.2.3嗅
在旋轉(zhuǎn)樣品后,打開(kāi)瓶蓋嗅氣味。培養(yǎng)好的優(yōu)質(zhì)液體菌種,均具有芳香氣味;染雜菌的培養(yǎng)液則散
發(fā)出酸、甜、霉、臭等各種異味。
6.15.3理化試驗(yàn)
6.15.3.1菌絲干重
量取液體菌種10ml,用水分測(cè)試儀烘干至含水量18%,然后稱(chēng)量,菌絲干重≥2g為合格。
6.15.3.2液體粘稠度
將液體菌種置于量筒中,使用比重計(jì)進(jìn)行粘稠度測(cè)量,比重超過(guò)1.2為合格。
6.15.3.3pH值測(cè)定
將液體菌種取出后,使用pH值酸度計(jì)進(jìn)行精準(zhǔn)測(cè)量,pH值在4~4.2范圍值內(nèi)為合格;
6.15.3.4菌絲活力
將液體菌種菌絲球轉(zhuǎn)接與平板PDA培養(yǎng)基上,28℃恒溫培養(yǎng)24h,菌絲球正常萌發(fā)菌絲為合格菌種。
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6.16備用
液體菌種經(jīng)檢驗(yàn)合格可備用。
_________________________________
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前言
本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定
起草。
本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。
本文件起草單位:平泉市希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司。
本文件主要起草人:梁希才、張永峰、柳鳳玉、劉海軍、王麗波、劉紹蒼、梁宏麗、張亞紅、張晨
光、孟凡飛、王彥玲、石建軍、王帥。
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香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程
1范圍
本文件規(guī)定了香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)的前期準(zhǔn)備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。
本文件適用于香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)過(guò)程管理。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引
用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修
改單)適用于本文件。
本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。
3術(shù)語(yǔ)和定義
本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。
4前期準(zhǔn)備
4.1培養(yǎng)基
小米谷粒、0.5%食品級(jí)甘油、葡萄糖粉、食品級(jí)酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。
4.2儀器設(shè)備
高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、液體發(fā)酵罐、生化培養(yǎng)箱、搖床、pH酸度計(jì)、比重計(jì)、打漿機(jī)、液體
接種槍、0.9立方塑料桶、50目網(wǎng)篩、750ml塑料原種瓶、PDA平板培養(yǎng)基、無(wú)棉蓋體、搖瓶、接種工具
等。
5操作流程
谷粒選擇→谷粒浸泡→濾水→添加石膏→裝瓶→滅菌→接菌→菌絲培養(yǎng)→搖瓶→后續(xù)養(yǎng)菌→低溫
處理→谷粒菌種懸浮液制備→懸浮液過(guò)濾→轉(zhuǎn)罐擴(kuò)大培養(yǎng)→檢驗(yàn)→備用。
6操作方法
6.1谷粒選擇
選擇帶皮小米谷粒,籽粒飽滿(mǎn)、無(wú)雜質(zhì)、直徑為0.1cm~0.15cm,破碎率控制在2%以?xún)?nèi)。
6.2谷粒浸泡
使用塑料桶或箱作為容器,將谷粒倒入容器中,加水浸泡,水與谷粒的體積比為2:1。環(huán)境溫度20℃
1
DB1308/T316—2022
左右,浸泡4h;環(huán)境溫度15℃左右,浸泡10h;環(huán)境溫度10℃左右,浸泡24h。以谷粒浸透無(wú)白心為
宜。
6.3濾水
浸泡完成后濾水,將谷粒置于50目篩子上進(jìn)行濾水;以篩底沒(méi)有水滴滴下,且手抓谷粒不粘手為
宜。
6.4添加石膏
按照谷粒干重的1%比例添加石膏,攪拌均勻。
6.5裝瓶
選擇750ml塑料原種瓶,采用機(jī)械或手工裝瓶,裝料高度至瓶肩;裝瓶后的重量在1.3kg~1.4kg。
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6.6滅菌
裝瓶后的培養(yǎng)基在4h內(nèi)進(jìn)行滅菌,防止培養(yǎng)基變酸;采用高壓滅菌方式滅菌
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