回歸教材重難點(diǎn)06現(xiàn)代生物科技專題-2022年高考生物三輪沖刺過(guò)關(guān)（新高考版）

回歸教材重難點(diǎn)06現(xiàn)代生物科技專題一般通過(guò)情境對(duì)本節(jié)知識(shí)進(jìn)行考查，要求考生（1）熟記基因工程的基本工具和基本操作程序（生命觀念、科學(xué)探究）；（2）理解基因工程在不同領(lǐng)域的應(yīng)用（社會(huì)責(zé)任）；（3）理解蛋白質(zhì)工程的基本原理（生命觀念）；（4）熟記植物細(xì)胞工程中植物組織培養(yǎng)的原理與過(guò)程，掌握植物體細(xì)胞雜交的過(guò)程和應(yīng)用（生命觀念、科學(xué)探究）；（5）熟記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理和過(guò)程，掌握動(dòng)物細(xì)胞融合的方法及應(yīng)用（生命觀念、科學(xué)探究）；（6）熟記體內(nèi)受精和胚胎發(fā)育的過(guò)程（生命觀念）；（7）掌握體外受精和胚胎培養(yǎng)的原理、過(guò)程，理解胚胎工程的應(yīng)用前景（生命觀念、科學(xué)探究）；（8）熟記干細(xì)胞的特點(diǎn)及應(yīng)用（生命觀念）；（9）理性看待生物技術(shù)的安全性和倫理問(wèn)題（社會(huì)責(zé)任）。1、基因工程操作的基本工具有限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體。3、E·coliDNA連接酶只能連接黏性末端，而T4DNA連接酶既能連接黏性末端也能連接平末端。4、質(zhì)粒是基因工程常用的載體，需具備的條件有：能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并自我復(fù)制；具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；具有標(biāo)記基因。5、基因工程的基本操作程序：目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定。6、基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心，基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。7、目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法，導(dǎo)入微生物細(xì)胞常用感受態(tài)細(xì)胞法(Ca2＋處理法)。8、培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，受體細(xì)胞必須是受精卵；培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是體細(xì)胞。9、檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因常用DNA分子雜交技術(shù)，檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA同樣是采用分子雜交技術(shù)，檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)常用抗原—抗體雜交技術(shù)。10、DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，在濃度為0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。11、DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)可溶于酒精，可利用冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精對(duì)提取的DNA進(jìn)行純化。12、在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。13、哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞不含細(xì)胞核，不能作為提取DNA的實(shí)驗(yàn)材料。若選取肝臟細(xì)胞或植物細(xì)胞，則必須充分研磨。14、植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程eq\x(外植體)eq\o(→,\s\up11(脫分化),\s\do4())eq\x(愈傷組織)eq\o(→,\s\up11(再分化),\s\do4())eq\x(根、芽)→eq\x(植物體)15、植物體細(xì)胞雜交的理論基礎(chǔ)是細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性，動(dòng)物細(xì)胞融合的理論基礎(chǔ)是細(xì)胞膜的流動(dòng)性和細(xì)胞增殖。16、植物體細(xì)胞雜交用到的酶是纖維素酶和果膠酶，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)用到的酶是胰蛋白酶或膠原蛋白酶。17、人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法分為物理法和化學(xué)法，物理法包括離心、振動(dòng)、電激等，化學(xué)法一般是用聚乙二醇作為誘導(dǎo)劑；動(dòng)物細(xì)胞融合常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等。18、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。①原理：細(xì)胞增殖。②培養(yǎng)基的特有成分：在使用合成培養(yǎng)基時(shí)，通常需加入血清、血漿等一些天然成分。③培養(yǎng)過(guò)程：eq\x(\a\al(取動(dòng)物,組織塊))→eq\x(\a\al(分散成單個(gè),細(xì)胞))→eq\x(\a\al(放入適宜,培養(yǎng)液))→eq\x(\a\al(讓細(xì)胞生長(zhǎng),增殖))=4\*GB3④培養(yǎng)條件：無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境；營(yíng)養(yǎng)；適宜的溫度和pH；氣體環(huán)境(主要有O2和CO2)。19、細(xì)胞核移植技術(shù)。未受精卵母細(xì)胞作細(xì)胞核移植受體細(xì)胞的理由：①營(yíng)養(yǎng)豐富；②體積大，易操作；③含有刺激已分化的細(xì)胞核恢復(fù)分裂能力的物質(zhì)。20、精子發(fā)生的過(guò)程eq\x(\a\al(精原,細(xì)胞))eq\a\vs4\al(\o(→,\s\up11(有絲),\s\do4(分裂)))eq\x(\a\al(精原,細(xì)胞))→eq\x(\a\al(初級(jí)精,母細(xì)胞))eq\a\vs4\al(\o(→,\s\up11(MⅠ),\s\do4()))eq\x(\a\al(次級(jí)精,母細(xì)胞))eq\a\vs4\al(\o(→,\s\up11(MⅡ),\s\do4()))eq\x(\a\al(精子,細(xì)胞))eq\a\vs4\al(\o(→,\s\up11(變形),\s\do4()))eq\x(\a\al(精,子))21、卵子發(fā)生的過(guò)程eq\x(\a\al(卵原,細(xì)胞))eq\a\vs4\al(\o(→,\s\up11(有絲),\s\do4(分裂)))eq\x(\a\al(卵原,細(xì)胞))→eq\x(\a\al(初級(jí)卵,母細(xì)胞))eq\a\vs4\al(\o(→,\s\up11(MⅠ),\s\do4()))eq\x(\a\al(次級(jí)卵母細(xì)胞,和第一極體))eq\a\vs4\al(\o(→,\s\up11(MⅡ),\s\do4()))eq\x(\a\al(卵子和第,二極體))22、受精的過(guò)程：精子穿越放射冠和透明帶→進(jìn)入卵細(xì)胞膜→原核形成→雌雄原核融合。23、防止多精入卵有兩道屏障，一是透明帶反應(yīng)，二是卵細(xì)胞膜反應(yīng)。24、判斷卵子是否受精的標(biāo)志是在卵細(xì)胞膜與透明帶的間隙能觀察到兩個(gè)極體，受精作用完成的標(biāo)志是雌雄原核融合形成合子。25、早期胚胎發(fā)育的過(guò)程：受精卵→卵裂期→桑椹胚→囊胚→原腸胚。26、胚胎的早期培養(yǎng)所需培養(yǎng)液的成分包括：無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)鹽(兩鹽)；維生素、激素(兩素)；氨基酸、核苷酸(兩酸)以及水、血清等。27、生態(tài)工程的主要任務(wù)是對(duì)已被破壞的生態(tài)環(huán)境(或受損的生態(tài)系統(tǒng))進(jìn)行修復(fù)，對(duì)造成環(huán)境污染和破壞的生產(chǎn)方式進(jìn)行改善，并提高生態(tài)系統(tǒng)的生產(chǎn)力。28、生態(tài)工程建設(shè)的目的是遵循自然界物質(zhì)循環(huán)的規(guī)律，充分發(fā)揮資源的生產(chǎn)潛力，防止環(huán)境污染，達(dá)到經(jīng)濟(jì)效益與生態(tài)效益的同步發(fā)展。29、生態(tài)工程所遵循的基本原理有物質(zhì)循環(huán)再生原理、物種多樣性原理、協(xié)調(diào)與平衡原理、整體性原理及系統(tǒng)學(xué)和工程學(xué)原理。30、物質(zhì)循環(huán)再生原理的基礎(chǔ)是物質(zhì)循環(huán)；物種多樣性原理的基礎(chǔ)是生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性；協(xié)調(diào)與平衡原理的基礎(chǔ)是生物與環(huán)境的協(xié)調(diào)和平衡；整體性原理的基礎(chǔ)是社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和自然構(gòu)成復(fù)合系統(tǒng)；系統(tǒng)學(xué)和工程學(xué)原理的基礎(chǔ)是系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)決定功能以及總體功能大于各部分之和。31、對(duì)轉(zhuǎn)基因生物安全性的爭(zhēng)論主要集中在食物安全、生物安全和環(huán)境安全上，面對(duì)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的利弊，要趨利避害，不能因噎廢食。32、設(shè)計(jì)試管嬰兒技術(shù)比試管嬰兒技術(shù)多了胚胎移植前的遺傳學(xué)診斷過(guò)程。33、生物武器的特點(diǎn)：致病力強(qiáng)、有潛伏期、污染面積大、危害時(shí)間長(zhǎng)、傳染途徑多、擁有生命力、受自然條件影響大。34、中國(guó)政府對(duì)克隆人的態(tài)度是禁止生殖性克隆，但不反對(duì)治療性克隆。一、2021年高考真題1.（2021·浙江卷第一次，29）三葉青為蔓生的藤本植物，以根入藥。由于野生三葉青對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求非常苛刻，以及生態(tài)環(huán)境的破壞和過(guò)度的采挖，目前我國(guó)野生三葉青已十分珍稀。（1）為保護(hù)三葉青的________多樣性和保證藥材的品質(zhì)，科技工作者依據(jù)生態(tài)工程原理，利用________技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了三葉青的林下種植。（2）依據(jù)基因工程原理，利用發(fā)根農(nóng)桿菌侵染三葉青帶傷口的葉片，葉片產(chǎn)生酚類化合物，誘導(dǎo)發(fā)根農(nóng)桿菌質(zhì)粒上vir系列基因表達(dá)形成____________________和限制性核酸內(nèi)切酶等，進(jìn)而從質(zhì)粒上復(fù)制并切割出一段可轉(zhuǎn)移的DNA片段（TDNA）。TDNA進(jìn)入葉片細(xì)胞并整合到染色體上，TDNA上rol系列基因表達(dá)，產(chǎn)生相應(yīng)的植物激素，促使葉片細(xì)胞持續(xù)不斷地分裂形成____________________________，再分化形成毛狀根。（3）剪取毛狀根，轉(zhuǎn)入含頭孢類抗生素的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行多次________培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加抗生素的主要目的是__________________________________________。最后取毛狀根轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基、置于搖床上進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，通過(guò)控制搖床的________和溫度，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基成分中的___________________________________________________，獲得大量毛狀根，用于提取藥用成分?！敬鸢浮浚?）遺傳間種（2）DNA聚合酶愈傷組織（3）繼代殺滅發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)速營(yíng)養(yǎng)元素以及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類和濃度【解析】（1）生物多樣性包括遺傳多樣性、物種多樣性和生態(tài)系統(tǒng)多樣性，為保護(hù)三葉青的遺傳多樣性和保證藥材的品質(zhì)；三葉青的林下種植，是利用間種技術(shù)。（2）分析題意可知，從質(zhì)粒上復(fù)制并切割出一段可轉(zhuǎn)移的DNA片段（TDNA），DNA復(fù)制需要DNA聚合酶，故可知，酚類化合物誘導(dǎo)發(fā)根農(nóng)桿菌質(zhì)粒上vir系列基因表達(dá)，形成DNA聚合酶和限制性核酸內(nèi)切酶等。根據(jù)植物組織培養(yǎng)技術(shù)過(guò)程可知，相應(yīng)植物激素可以促使葉片細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，再分化形成毛狀根。（3）剪取毛狀根，轉(zhuǎn)入含頭孢類抗生素的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行多次繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)基中添加抗生素的主要目的是殺滅發(fā)根農(nóng)桿菌。最后取毛狀根轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基、置于搖床上進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，通過(guò)控制搖床的轉(zhuǎn)速和溫度，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基成分中的營(yíng)養(yǎng)元素以及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類和濃度，獲得大量毛狀根，用于提取藥用成分。2.（2021·廣東卷，22）非細(xì)胞合成技術(shù)是一種運(yùn)用合成生物學(xué)方法，在細(xì)胞外構(gòu)建多酶催化體系，獲得目標(biāo)產(chǎn)物的新技術(shù)，其核心是各種酶基因的挖掘、表達(dá)等。中國(guó)科學(xué)家設(shè)計(jì)了4步酶促反應(yīng)的非細(xì)胞合成路線（如圖），可直接用淀粉生產(chǎn)肌醇（重要的醫(yī)藥食品原料），以期解決高溫強(qiáng)酸水解方法造成的嚴(yán)重污染問(wèn)題，并可以提高產(chǎn)率。回答下列問(wèn)題：（1）研究人員采用PCR技術(shù)從土壤微生物基因組中擴(kuò)增得到目標(biāo)酶基因。此外，獲得酶基因的方法還有___________________________________________________________________________________________。（答出兩種即可）（2）高質(zhì)量的DNA模板是成功擴(kuò)增出目的基因的前提條件之一。在制備高質(zhì)量DNA模板時(shí)必須除去蛋白，方法有______________________________________________________________________。（答出兩種即可）（3）研究人員使用大腸桿菌BL21作為受體細(xì)胞、pET20b為表達(dá)載體分別進(jìn)行4種酶的表達(dá)。表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，首先應(yīng)制備___________細(xì)胞。為了檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)出酶蛋白，需要采用的方法有______________________________________________________________________。（4）依圖所示流程，在一定的溫度、pH等條件下，將4種酶與可溶性淀粉溶液混合組成一個(gè)反應(yīng)體系。若這些酶最適反應(yīng)條件不同，可能導(dǎo)致的結(jié)果是__________________________________________________。在分子水平上，可以通過(guò)改變________________________________，從而改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)對(duì)酶特性的改造和優(yōu)化?！敬鸢浮浚?）基因文庫(kù)中獲取、人工合成法（2）鹽析法、酶解法或高溫變性（3）感受態(tài)抗原抗體雜交技術(shù)（4）有的酶失活而使反應(yīng)中斷基因的堿基序列【解析】（1）分析題意，研究人員從土壤微生物基因組中擴(kuò)增得到目標(biāo)酶基因采用了PCR技術(shù)，此外獲得酶基因的方法還有從基因文庫(kù)中獲取和人工合成法。（2）高質(zhì)量的DNA模板是成功擴(kuò)增出目的基因的前提條件之一。在制備高質(zhì)量DNA模板時(shí)必須除去蛋白，可根據(jù)DNA和蛋白質(zhì)的溶解性、對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性去除蛋白質(zhì)，方法有鹽析、酶解法或高溫變性法等。（3）研究人員使用大腸桿菌BL21作為受體細(xì)胞、pET20b為表達(dá)載體分別進(jìn)行4種酶的表達(dá)。表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，首先應(yīng)制備感受態(tài)細(xì)胞，即利用鈣離子處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，使其易于接受外來(lái)的DNA分子?；蚬こ讨校富颍康幕颍┏晒Ρ磉_(dá)的產(chǎn)物酶蛋白的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，常用抗原抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。（4）依圖所示流程，在一定的溫度、pH等條件下，將4種酶與可溶性淀粉溶液混合組成一個(gè)反應(yīng)體系。由于酶的作用條件較溫和，若這些酶最適反應(yīng)條件不同，則可能導(dǎo)致有的酶失活而使反應(yīng)中斷。在分子水平上，可以通過(guò)改變基因的堿基序列，從而改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)對(duì)酶特性的改造和優(yōu)化。3.（2021·湖南卷，22）M基因編碼的M蛋白在動(dòng)物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)?，F(xiàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過(guò)核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過(guò)程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是________________________________________，這類酶能將特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的___________________________________斷開(kāi)。（2）在無(wú)菌、無(wú)毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是___________________________________________________________________________________________________________。（3）與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更低，原因是_________________________________________________________________________________________________________________________________________________。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細(xì)胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為_(kāi)______________________________________________________（答出兩點(diǎn)即可），功能上具有_________________________________________________。（4）鑒定轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：以免疫小鼠的_________淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，篩選融合雜種細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡(jiǎn)要寫(xiě)出利用此抗體確定克隆動(dòng)物A中M基因是否失活的實(shí)驗(yàn)思路________________________________________________________________________________________________________________________?！敬鸢浮浚?）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）磷酸二酯鍵（2）清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，同時(shí)給細(xì)胞提供足夠的營(yíng)養(yǎng)（3）動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯（任選兩點(diǎn)作答）發(fā)育的全能性（4）B取動(dòng)物A和克隆動(dòng)物A的肝組織細(xì)胞，分別提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原—抗體雜交【解析】（1）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶），故在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過(guò)程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）。限制性內(nèi)切核酸內(nèi)切酶是作用于其所識(shí)別序列中兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。不同的限制酶可以獲得不同的末端，主要分為黏性末端和平末端。（2）在無(wú)菌、無(wú)毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。（3）由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難，故與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率低。胚胎干細(xì)胞在形態(tài)上表現(xiàn)為細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可進(jìn)行遺傳改造。（4）先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體；若要利用此抗體確定克隆動(dòng)物A中M基因是否失活，如果M基因已經(jīng)失活，則克隆動(dòng)物A中無(wú)法產(chǎn)生M蛋白的單克隆抗體，則可利用抗原—抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。故實(shí)驗(yàn)思路為：取動(dòng)物A和克隆動(dòng)物A的肝組織細(xì)胞，分別提取蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原—抗體雜交。4.（2021·全國(guó)甲卷，38）PCR技術(shù)可用于臨床的病原菌檢測(cè)。為檢測(cè)病人是否感染了某種病原菌，醫(yī)生進(jìn)行了相關(guān)操作：①分析PCR擴(kuò)增結(jié)果；②從病人組織樣本中提取DNA；③利用PCR擴(kuò)增DNA片段；④采集病人組織樣本。回答下列問(wèn)題：（1）若要得到正確的檢測(cè)結(jié)果，正確的操作順序應(yīng)該是_________________________________（用數(shù)字序號(hào)表示）。（2）操作③中使用的酶是____________________________________________。PCR反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性、________三步，其中復(fù)性的結(jié)果是_______________________________________________________________。（3）為了做出正確的診斷，PCR反應(yīng)所用的引物應(yīng)該能與______________________________________特異性結(jié)合。（4）PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是指______________________________________________________________________。該技術(shù)目前被廣泛地應(yīng)用于疾病診斷等方面?！敬鸢浮浚?）④②③①（2）Taq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）延伸Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成（3）兩條單鏈DNA（4）一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)【解析】（1）PCR技術(shù)可用于臨床的病原菌檢測(cè)，若要得到正確的檢測(cè)結(jié)果，正確的操作順序應(yīng)該是④采集病人組織樣本→②從病人組織樣本中提取DNA→③利用PCR擴(kuò)增DNA片段→①分析PCR擴(kuò)增結(jié)果。（2）在用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí)，DNA的復(fù)制過(guò)程與細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制類似，操作③中使用的酶是Taq酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶），PCR反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性、延伸三步，其中復(fù)性的結(jié)果是Taq酶從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成。（3）DNA復(fù)制需要引物，為了做出正確的診斷，PCR反應(yīng)所用的引物應(yīng)該能與兩條單鏈DNA特異性結(jié)合。（4）據(jù)分析可知，PCR（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是指一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。該技術(shù)目前被廣泛地應(yīng)用于疾病診斷等方面。5.（2021·全國(guó)乙卷，38）用DNA重組技術(shù)可以賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人類需要的生物產(chǎn)品。在此過(guò)程中需要使用多種工具酶，其中4種限制性核酸內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）常用的DNA連接酶有E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶。上圖中____________________________酶切割后的DNA片段可以用E.coliDNA連接酶連接。上圖中__________________________________________酶切割后的DNA片段可以用T4DNA連接酶連接。（2）DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學(xué)鍵是_________________________________。（3）DNA重組技術(shù)中所用的質(zhì)粒載體具有一些特征，如質(zhì)粒DNA分子上有復(fù)制原點(diǎn)，可以保證質(zhì)粒在受體細(xì)胞中能_________________________；質(zhì)粒DNA分子上有_________________________________________________，便于外源DNA插入；質(zhì)粒DNA分子上有標(biāo)記基因（如某種抗生素抗性基因），利用抗生素可篩選出含質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞，方法是___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。（4）表達(dá)載體含有啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是指____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________?！敬鸢浮浚?）EcoRI、PstIEcoRI、PstI、SmaI和EcoRV（2）磷酸二酯鍵（3）自我復(fù)制一至多個(gè)限制酶切位點(diǎn)用含有該抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)宿主細(xì)胞，能夠存活的即為含有質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞（4）位于基因首端的一段特殊DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別及結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程【解析】（1）限制酶EcoRI和PstI切割形成的是黏性末端，限制酶SmaI和EcoRV切割形成的是平末端，E.coliDNA連接酶來(lái)源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái)，而T4DNA連接酶來(lái)源于T4噬菌體，可用于連接黏性末端和平末端，但連接效率較低。因此圖中EcoRI和PstI切割后的DNA片段（黏性末端）可以用E.coliDNA連接酶連接，除了這兩種限制酶切割的DNA片段，限制酶SmaI和EcoRV切割后的DNA片段（平末端）也可以用T4DNA連接酶連接。（2）DNA連接酶將兩個(gè)DNA片段連接形成磷酸二酯鍵。（3）質(zhì)粒是小型環(huán)狀的DNA分子，常作為基因表達(dá)的載體，首先質(zhì)粒上含有復(fù)制原點(diǎn)，能保證質(zhì)粒在受體細(xì)胞中自我復(fù)制。質(zhì)粒DNA分子上有一個(gè)至多個(gè)限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，便于目的基因的導(dǎo)入。質(zhì)粒上的標(biāo)記基因是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，具體做法是用含有該抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)宿主細(xì)胞，能夠存活的即為含有質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞。（4）啟動(dòng)子是一段特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得需要的蛋白質(zhì)。二、2022年高考模擬題1．（2022·天津市新華中學(xué)模擬預(yù)測(cè)）PCR引物的3'端為結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵堿基，5'端無(wú)嚴(yán)格限制，可用于添加限制酶切點(diǎn)等序列。下列敘述正確的是（

）A．PCR第4個(gè)循環(huán)，消耗了15對(duì)引物B．脫氧核苷酸作為擴(kuò)增的原料會(huì)依次連接到5'端C．耐高溫的DNA聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈DNA片段的引物鏈上D．用圖中引物擴(kuò)增至少四個(gè)循環(huán)后才能獲得兩端均添加限制酶切點(diǎn)的目的產(chǎn)物【答案】C【詳解】A、該DNA是雙鏈，第一次循環(huán)要1對(duì)引物，第二次要2對(duì)，第三次4對(duì)，第四次要8對(duì)，即PCR第4個(gè)循環(huán)，消耗了8對(duì)引物，A錯(cuò)誤；B、進(jìn)行PCR時(shí)，擴(kuò)增是從引物的3'端延伸，因此脫氧核苷酸作為擴(kuò)增的原料會(huì)依次連接到3'端，B錯(cuò)誤；C、耐高溫的DNA聚合酶要在雙鏈DNA解鏈以后，結(jié)合到DNA上，以其中一條單鏈為模板，以一小段RNA為引物，然后將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)加成，合成子鏈，C正確；D、，由圖示可知，第一、二輪循環(huán)合成的子鏈長(zhǎng)度均不同，根據(jù)半保留復(fù)制特點(diǎn)可知，前兩輪循環(huán)產(chǎn)生的四個(gè)DNA分子的兩條鏈均不等長(zhǎng)，第三輪循環(huán)產(chǎn)生的DNA分子存在等長(zhǎng)的兩條核苷酸鏈，即用圖中引物擴(kuò)增至少3個(gè)循環(huán)后才能獲得兩端均添加限制酶切點(diǎn)的目的產(chǎn)物，D錯(cuò)誤。故選C。2．（2022·河南·模擬預(yù)測(cè)）下圖表示利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)所作的一系列研究，請(qǐng)據(jù)圖分析回答。(1)上圖中的胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）可以從___________________________和___________________________中分離獲取。(2)過(guò)程I將胚胎干細(xì)胞置于y射線滅活的鼠胎兒成纖維細(xì)胞的飼養(yǎng)層上，并加入動(dòng)物血清、抗生素等物質(zhì)，維持細(xì)胞不分化的狀態(tài)。在此過(guò)程中，飼養(yǎng)層提供干細(xì)胞增殖所需的_________________________________________，加入抗生素是為了_______________________________。該過(guò)程對(duì)于研究細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡的機(jī)理具有重要意義。(3)過(guò)程II將帶有遺傳標(biāo)記的ES細(xì)胞注入早期胚胎的襄胚腔，通過(guò)組織化學(xué)染色，用于研究動(dòng)物體器官形成的時(shí)間、發(fā)育過(guò)程以及影響因素，這項(xiàng)研究利用了胚胎干細(xì)胞具有____________________的特點(diǎn)。在哺乳動(dòng)物早期發(fā)育過(guò)程中，囊胚的后一個(gè)階段是__________________________。(4)過(guò)程III是培育轉(zhuǎn)基因小鼠，將獲得的目的基因?qū)伺咛ジ杉?xì)胞之前需構(gòu)建基因表達(dá)載體，目的是_____________________________________________________________________________________________________________________。將構(gòu)建好的表達(dá)載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞最常用的方法是__________________________________。(5)過(guò)程IV得到的小鼠畸胎瘤中里面全是軟骨、神經(jīng)管、橫紋肌和骨骼等人類組織和器官。實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須去除小鼠的胸腺，使其存在免疫缺陷，其目的是_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________，該過(guò)程研究的意義在于解決________________________________________________________________________問(wèn)題。(6)該研究中，包含的生物技術(shù)有____________________________________________________________(至少寫(xiě)出兩種）?！敬鸢浮?/p>

早期胚胎

原始性腺

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

防止雜菌污染

全能性

原腸胚

使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用

顯微注射法

去除胸腺，不能形成T細(xì)胞，不發(fā)生細(xì)胞免疫，使移植組織細(xì)胞不會(huì)被排斥

臨床上供體器官不足或器官移植后免疫排斥等

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植【詳解】（1）圖中的胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）可以從早期胚胎和原始性腺中分離獲取。（2）過(guò)程Ⅰ將胚胎干細(xì)胞置于γ射線滅活的鼠胎兒成纖維細(xì)胞的飼養(yǎng)層上，并加入動(dòng)物血清、抗生素等物質(zhì)，維持細(xì)胞不分化的狀態(tài)，在此過(guò)程中，飼養(yǎng)層提供干細(xì)胞增殖所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，加入抗生素是為了防止雜菌污染。（3）ES細(xì)胞能培養(yǎng)成小鼠個(gè)體，說(shuō)明胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育的全能性．在哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育過(guò)程為：受精卵→卵裂期→桑椹胚→囊胚期→原腸胚→個(gè)體，可見(jiàn)，囊胚將進(jìn)一步發(fā)育成原腸胚。（4）將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法．構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠發(fā)揮作用。（5）在器官移植時(shí)，發(fā)生的免疫反應(yīng)屬于細(xì)胞免疫，細(xì)胞免疫主要是T細(xì)胞起作用．因此去除胸腺，不能形成T細(xì)胞，不發(fā)生細(xì)胞免疫，使移植組織細(xì)胞不會(huì)被排斥，從而獲得免疫缺陷小鼠．該過(guò)程研究的意義在于解決臨床上供體器官不足和器官移植后免疫排斥等問(wèn)題。（6）該研究中，包含的生物技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植。3．（2022·四川·石室中學(xué)模擬預(yù)測(cè)）下面為科學(xué)家采用不同方法培育良種牛的過(guò)程示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問(wèn)題。

(1)與一般的繁育良種動(dòng)物方式相比較,胚胎移植的優(yōu)勢(shì)是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。為提高良種奶牛的繁殖能力,在獲取卵母細(xì)胞之前需用促性腺激素對(duì)奶牛進(jìn)行處理,目的是____________________________________。(2)“轉(zhuǎn)基因?！盌培育過(guò)程中,常用受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞,主要原因是______________________________________________________________________________________________。(3)圖中數(shù)字標(biāo)號(hào)①代表的結(jié)構(gòu)為_(kāi)__________________________,①將來(lái)發(fā)育為_(kāi)_________________________________,c→d過(guò)程需對(duì)其均等分割的目的是___________________________________________________________________________。A、B牛基因型是否相同?__________________。(4)在培育良種牛的過(guò)程中,都運(yùn)用了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,為防止雜菌的污染而要加入一定量的__________________________?！敬鸢浮?/p>

可充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力

超數(shù)排卵

受精卵的全能性易于表達(dá)

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

胎兒的各種組織

有利于胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育

相同

抗生素【詳解】（1）與一般的繁育良種動(dòng)物方式相比較，胚胎移植可充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個(gè)體的繁殖潛力；對(duì)良種母牛注射促性腺激素可促使其超數(shù)排卵。（2）由于受精卵的全能性易于表達(dá)，因此良種牛培育過(guò)程中，常用受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞。（3）圖中③為內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，將來(lái)發(fā)育為胎兒的各種組織；c→d過(guò)程需對(duì)其均等分割，這樣有利于胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。來(lái)自同一個(gè)胚胎的后代具有相同的基因型，因此A、B牛的基因型相同。（4）在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，為防止雜菌的污染而要加入一定量的抗生素。4．（2022·吉林·東北師大附中模擬預(yù)測(cè)）鹽分是限制植物生長(zhǎng)發(fā)育的重要因素之一，科研人員嘗試?yán)免┮号菽a+/K+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因（AINHX基因）培育轉(zhuǎn)基因耐鹽馬鈴薯。(1)通常從獐茅的___________________中獲取AINHX基因用以構(gòu)建基因表達(dá)載體，構(gòu)建基因表達(dá)載體過(guò)程中必須使用的工具酶是__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)為保證目的基因在馬鈴薯根細(xì)胞中能夠正常表達(dá)，運(yùn)載體上應(yīng)含有特定的_________________________________。(3)馬鈴薯的轉(zhuǎn)化過(guò)程常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，這種方法是利用了農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的TDNA具有_________________________________________________________________________________________________________的特點(diǎn)。(4)為探究目的基因整合到馬鈴薯基因組后是否轉(zhuǎn)錄，可從轉(zhuǎn)基因植株的細(xì)胞中提取所有mRNA并反轉(zhuǎn)錄成_____________________，再利用PCR方法進(jìn)行基因擴(kuò)增，基因擴(kuò)增時(shí)需要先根據(jù)_________________________________________________________________________合成引物。若以根細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陽(yáng)性（有產(chǎn)物生成），以葉細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陰性（無(wú)產(chǎn)物生成），則說(shuō)明____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(5)為證明轉(zhuǎn)基因馬鈴薯獲得了耐鹽性，將生長(zhǎng)至4葉期的轉(zhuǎn)基因幼苗轉(zhuǎn)入_________________________________溶液中培養(yǎng)，30天后觀察植株生長(zhǎng)情況?！敬鸢浮?1)

基因文庫(kù)

限制核酸內(nèi)切酶（限制酶）和DNA連接酶(2)啟動(dòng)子(3)可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上(4)

cDNA（互補(bǔ)DNA）

目的基因（AINHX基因）的一段核苷酸序列

目的基因在根細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，未在葉細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄(5)高濃度的NaCl【分析】基因工程常用的工具有限制酶、DNA連接酶、運(yùn)載體?；蚬こ炭梢苑譃樗牟剑耗康幕虻奶崛?、目的基因與運(yùn)載體的結(jié)合、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定。(1)某種生物的基因文庫(kù)中包含該生物的全部基因，故通?？梢詮拟┑幕蛭膸?kù)中獲取AINHX基因用以構(gòu)建基因表達(dá)載體；構(gòu)建基因表達(dá)載體過(guò)程中需要用限制酶切割出目的基因和質(zhì)粒的黏性末端，再用DNA連接酶連接質(zhì)粒和目的基因，即構(gòu)建基因表達(dá)載體過(guò)程中使用的工具酶是限制酶、DNA連接酶。(2)基因表達(dá)載體上必須有目的基因、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子，其中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，可驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄開(kāi)始，故為保證目的基因在馬鈴薯根細(xì)胞中能夠正常表達(dá)，運(yùn)載體上應(yīng)含有特定的啟動(dòng)子。(3)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的TDNA具有可攜帶目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上的特點(diǎn)。(4)基因工程中經(jīng)mRNA逆轉(zhuǎn)錄得到的產(chǎn)物是cDNA；PCR擴(kuò)增時(shí)需要有目的基因（AINHX基因）的一段核苷酸序列作為引物；轉(zhuǎn)錄是否成功是通過(guò)分子雜交技術(shù)鑒定的：若以根細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陽(yáng)性（有產(chǎn)物生成），以葉細(xì)胞為材料擴(kuò)增結(jié)果為陰性（無(wú)產(chǎn)物生成），則說(shuō)明目的基因在根細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，未在葉細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄。(5)為證明轉(zhuǎn)基因馬鈴薯獲得了耐鹽性，則需要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定：將生長(zhǎng)至4葉期的轉(zhuǎn)基因幼苗轉(zhuǎn)入高濃度的NaCl溶液中培養(yǎng)，30天后觀察植株生長(zhǎng)情況，若能正常生長(zhǎng)，則證明獲得了耐鹽性。5．（2022·河南·模擬預(yù)測(cè)）動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、細(xì)胞融合等，其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)。請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是______________________________；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所使用的是液體培養(yǎng)基（即培養(yǎng)液），其原因是____________________________________________________________________________________________________；在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，隨著細(xì)胞數(shù)量不斷增多，會(huì)出現(xiàn)____________________________________________現(xiàn)象。(2)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，為防止雜菌污染，應(yīng)采取的具體措施有____________________________________________、_______________________________________________________________________________________________________________；培養(yǎng)過(guò)程中定期更換培養(yǎng)液的目的是______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)在克隆動(dòng)物培育過(guò)程中使用的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)有_______________________________________________________；哺乳動(dòng)物利用胚胎細(xì)胞核移植較體細(xì)胞核移植更易成功，原因是__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________?！敬鸢浮?1)

細(xì)胞（生長(zhǎng)和）增殖

與動(dòng)物細(xì)胞生活的液體環(huán)境相近，有利于動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)交換（或吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和排出代謝廢物）

細(xì)胞貼壁和接觸抑制(2)

對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理

在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素

清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害(3)

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植

動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易【分析】1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌處理．通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染；此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害；②營(yíng)養(yǎng)：合成培養(yǎng)基成分：糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，通常需加入血清、血漿等天然成分；③溫度：適宜溫度：哺乳動(dòng)物多是36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。2、單克隆抗體的制備過(guò)程是：對(duì)小動(dòng)物注射抗原，從該動(dòng)物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的是得到更多細(xì)胞，其原理是細(xì)胞增殖；由于液體培養(yǎng)基與動(dòng)物細(xì)胞生活的液體環(huán)境相近，有利于動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)交換，故動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所使用的是液體培養(yǎng)基；在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞會(huì)有貼壁生長(zhǎng)的特點(diǎn)，隨著細(xì)胞數(shù)量不斷增多，會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。(2)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，為防止雜菌污染，應(yīng)采取的具體措施有對(duì)培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理、在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素；為清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，培養(yǎng)過(guò)程中需要定期更換培養(yǎng)液。(3)在克隆動(dòng)物培育過(guò)程中使用的動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植；由于動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，故哺乳動(dòng)物利用胚胎細(xì)胞核移植較體細(xì)胞核移植更易成功。6．（2022·河北·模擬預(yù)測(cè)）(1)用核移植的方法可以獲取克隆動(dòng)物，哺乳動(dòng)物核移植可以分為_(kāi)____________________________________________和體細(xì)胞核移植；體細(xì)胞核移植的難度明顯高于前者的原因是____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)動(dòng)物細(xì)胞核移植過(guò)程中，通常采用卵（母）細(xì)胞作為受體細(xì)胞，原因可能是____________________________________________________________________________________________________________________________________。核移植前需將卵母細(xì)胞培養(yǎng)至MⅡ中期，并去核，去核的目的是_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)克隆技術(shù)可用于動(dòng)物器官移植，能解決______________________________________________________等問(wèn)題；胚胎分割_____________（填“屬于”或“不屬于”）克隆，應(yīng)選取________________________________階段的胚胎進(jìn)行分割，要保證將_______________________________________均等分割。【答案】(1)

胚胎細(xì)胞核移植

動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性相對(duì)容易，而動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高、恢復(fù)其全能性比較困難(2)

卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中含有促進(jìn)細(xì)胞核恢復(fù)分裂能力的物質(zhì)

避免卵母細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)傳遞到子代(3)

供體器官不足和排斥反應(yīng)

屬于

桑椹胚或囊胚

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)【分析】動(dòng)物細(xì)胞核移植可分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植．體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植，原因：動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難。動(dòng)物核移植是指將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。核移植得到的動(dòng)物稱克隆動(dòng)物，克隆動(dòng)物的核基因完全來(lái)自供體動(dòng)物，而細(xì)胞質(zhì)基因來(lái)自受體細(xì)胞；核移植包括體細(xì)胞核移植和胚胎細(xì)胞核移植，其中體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植，因?yàn)轶w細(xì)胞的全能性低于胚胎細(xì)胞。(1)哺乳動(dòng)物核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植；體細(xì)胞核移植的難度明顯高于前者的原因是動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性相對(duì)容易，而動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高、恢復(fù)其全能性比較困難。(2)動(dòng)物細(xì)胞核移植過(guò)程中，通常采用卵（母）細(xì)胞作為受體細(xì)胞，原因可能是卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中含有促進(jìn)細(xì)胞核發(fā)育的物質(zhì)。核移植前需將卵母細(xì)胞培養(yǎng)至MⅡ中期，并去核，去核的目的是避免卵母細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)傳遞到子代。(3)克隆技術(shù)可用于動(dòng)物器官移植，能解決供體器官不足和排斥反應(yīng)等問(wèn)題；胚胎分割屬于克隆，應(yīng)選取桑椹胚或囊胚階段的胚胎進(jìn)行分割，要保證將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割。7．（2022·湖北·模擬預(yù)測(cè)）CRISPRCas9基因組編輯系統(tǒng)由向?qū)NA（也叫sgRNA）和Cas9蛋白組成，向?qū)NA識(shí)別并結(jié)合靶基因DNA，Cas9蛋白切斷雙鏈DNA形成兩個(gè)末端。這兩個(gè)末端通過(guò)“斷裂修復(fù)”重新連接時(shí)通常會(huì)有個(gè)別堿基對(duì)的插入或缺失，從而實(shí)現(xiàn)基因敲除，如圖1所示。(1)向?qū)NA識(shí)別靶基因DNA時(shí)遵循__________________________________原則，Cas9蛋白相當(dāng)于____________酶，Cas9蛋白切斷靶基因DNA形成的兩個(gè)末端重新連接時(shí)所必需的一種酶是________________________________。(2)CCR5是人體的正?；?，其編碼的細(xì)胞膜CCR5蛋白是HIV入侵T淋巴細(xì)胞的主要通道“入口”?？蒲腥藛T依據(jù)_________________的部分序列設(shè)計(jì)sgRNA，導(dǎo)入骨髓_______________________細(xì)胞中，構(gòu)建sgRNACas9復(fù)合體，以實(shí)現(xiàn)對(duì)CCR5基因的定向切割，變異的CCR5蛋白無(wú)法裝配到細(xì)胞膜上，即可有效阻止HIV侵染新分化生產(chǎn)的T淋巴細(xì)胞。