2024年人教版高考生物一輪復習：綜合PCR的基因工程問題

復習材料

專題突破10綜合PCR的基因工程問題

闡述常規(guī)PCR、重疊延伸PCR、熒光定量PCR等的過程與原理，舉例說明不

課標要求

同的PCR技術有著不同的應用。

2023?江蘇-T222023?山東-T252022-江蘇-T24

2022?山東?T25

考情分析幾種不同PCR的應用

2021?全國甲-T382021?山東?T252020?北京-T12

2020?江蘇-T33

類型一利用PCR技術獲取目的基因

【基本模型】

獲取目的基因是基因工程操作的第一步。獲取目的基因的方法有多種，現(xiàn)在常用PCR特異性

地快速擴增目的基因。PCR是聚合酶鏈式反應的縮寫。它是一項根據(jù)DNA半保留復制的原

理，在體外提供參與DNA復制的各種組分與反應條件，對目的基因的核甘酸序列進行大量

復制的技術。該技術由穆里斯等人于1985年發(fā)明，為此，穆里斯于1993年獲得了諾貝爾化

學獎。

【典例突破】

1.“X基因”是DNA分子上一個有遺傳效應的片段，若要用PCR技術特異性地拷貝“X

基因”，需在PCR反應中加入兩種引物，兩種引物及其與模板鏈的結合位置如圖1所示。下

列敘述錯誤的是（）

A.第一輪復制得到2個DNA分子，即①②各一個

B.第二輪復制得到4個DNA分子，即①②③④各一個

C.第四輪復制得到16個DNA分子，其中有4個X基因

D.經(jīng)五輪循環(huán)后產(chǎn)物中有五種不同的DNA分子

答案C

解析據(jù)圖分析可知，第一輪復制形成2個DNA分子，即①②各一個，A正確；第二輪復制

得到22=4（個）DNA分子，即①復制得①和③、②復制得②和④，即得到①②③④各一個，B

正確；第四輪復制得到16個DNA分子，其中有8個⑤（X基因），C錯誤；經(jīng)五輪循環(huán)后共

形成32個DNA分子，其中①②各一個，③④各四個，22個⑤，故產(chǎn)物中有五種不同的DNA

分子，D正確。

類型二利用PCR技術鑒定目的基因的連接方式

【基本模型】

檢測目的基因在受體細胞內(nèi)是否穩(wěn)定存在是基因工程操作的重要步驟，可以借助載體上的標

記基因、PCR技術和核酸分子雜交技術等方法鑒定受體細胞中是否轉入了目的基因。在實際

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操作中，PCR技術不僅可以精準地鑒定受體細胞是否轉入目的基因，還可以通過引物的巧妙

設計鑒定目的基因的連接方式。

【典例突破】

2.(2019?江蘇，33節(jié)選)為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質粒，擬

設計引物進行PCR鑒定。圖示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質粒中的相應位置，PCR

鑒定時應選擇的一對引物是。某學生嘗試用圖中另外一對引物從某一菌落的質粒中

擴增出了400bp片段，原因是。

答案乙、丙目的基因反向連接

解析分析題圖可知，理論上可以選擇的引物組合有甲和丙、乙和丙兩種情況。如果選擇甲和

丙這對引物，則無論目的基因是否正確插入，擴增的片段都是50+300+100=450(bp),不符

合要求；如果選擇乙和丙這對引物，正向連接和反向連接后所得結果不同，所以應選擇乙和

丙這對引物進行PCR鑒定。如果目的基因和質粒反向連接，則引物乙會出現(xiàn)在重組質粒的外

側，此時若加入引物甲和乙，則可以擴增出300+100=400(bp)的片段。

類型三利用PCR技術引導基因定點突變

【基本模型】

重疊延伸PCR技術是指在PCR技術的基礎上，采用具有互補末端的引物，使PCR產(chǎn)物形成

了重疊鏈，通過重疊鏈的延伸，將不同來源的片段重疊拼接起來的一項新技術。該技術在基

因的定點突變、長片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的擴增等方面有著獨特的應用。

【典例突破】

3.水蛭素是一種蛋白質，可用于預防和治療血栓。某科研團隊運用重疊延伸PCR技術在水

蛭素基因中的特定位點引入特定突變，使水蛭素第47位的天冬酰胺(密碼子為AAC、AAU)

替換為賴氨酸(密碼子為AAA、AAG),從而提高水蛭素的抗凝血活性。原理如圖。

注：圖中的引物2和3的突起處代表與模板鏈不能互補的突變位點。

(1)由以上事例可知，要對蛋白質的結構進行改造，需要通過來完成。

(2)若擬突變位點的堿基對為A-T,則需要讓其突變?yōu)椴拍苓_到目的。引物2

的突變位點(突起處)應設計為(假設引物為單鏈DNA)。

(3)在第一階段獲得2種具有重疊片段DNA的過程中，引物1、引物2組成的反應系統(tǒng)和引

物3、引物4組成的反應系統(tǒng)中均進行一次復制，共產(chǎn)生一種DNA分子。該階段必須將引

物1、2和引物3、4置于不同反應系統(tǒng)中，這是因為

O

(4)利用重疊延伸PCR技術還可以將兩個不同來源的DNA片段拼接起來。有人想利用該技術

把基因M和N拼接在一起，設計基因M的引物Mi、M2,基因N的引物NI、N2O在設計這

4種引物時，特別要注意的問題是

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答案(1)改造基因(或基因定點突變)(2)T—A或C-GA或G(3)3引物2和3中存在互補配對片

段，置于同一反應系統(tǒng)時會結合而失去作用

(4)Mi、M2中的一種引物與Ni、用中的一種引物必須具有互補配對的片段

解析(2)若擬突變位點的堿基對為A-T,則需要讓其突變?yōu)門-A或C-G,對應的密碼子由

AAU變成AAA或由AAC變成AAG,可使天冬酰胺替換為賴氨酸。(3)若兩個反應系統(tǒng)均進

行一次復制，則會產(chǎn)生3種不同的DNA分子，因為引物1和4產(chǎn)生的DNA分子是一樣的。

(4)重疊互補引物的設計是重疊延伸PCR技術成功的關鍵。拼接基因M和N時，設計引物時

需要注意的是，需要找到兩種基因的重疊部分，即Mi、M2中的一種引物與Ni、N2中的一種

引物必須具有互補配對的片段。

類型四利用PCR技術擴增未知基因序列

【基本模型】

利用PCR技術進行基因擴增時，為了便于設計引物，要求目的基因兩側的序列是已知的。

當DNA的某些序列已知，而需要擴增已知序列兩端的未知序列時，可采用反向PCR技術。

【典例突破】

4.(2020?江蘇，33節(jié)選)如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡捷地分析出

已知序列兩側的序列，具體流程如圖(以EcoRi酶切為例)：

請據(jù)圖回答問題：

(1)步驟I用的EcoRI是一種酶，它通過識別特定的切

割特定位點。

(2)步驟H用的DNA連接酶催化相鄰核昔酸之間的3,一羥基與5'—磷酸間形成

；PCR循環(huán)中，升溫到95℃是為了獲得；ThqDNA聚合酶的

作用是催化

(3)若如表所列為已知的DNA序列和設計的一些PCR引物，步驟III選用的PCR引物必須是

(從引物①②③④中選擇，填編號)。

DNA序列(虛線處省略了部分核甘酸序列)

5^-AACTATGCGCTCATGA----GCAATGCGTAGCCTCT-3Z

已知序列11111111111111111111111111111111

3^-TTGATACGCGAGTACT----CGTTACGCATCGGAGA-5Z

①5'—AACTATGCGCTCATGA-3'

(2)5,-GCAATGCGTAGCCTCT-3'

PCR弓I物

③5'-AGAGGCTACGCATTGC-3'

@5'-TCATGAGCGCATAGTT-3'

答案⑴限制性內(nèi)切核酸(或限制)核甘酸序列

(2)磷酸二酯鍵DNA單鏈以DNA為模板的DNA鏈的延伸(3)②④

解析(3)PCR過程中，根據(jù)已知的DNA序列合成兩個引物，要注意模板鏈和引物的方向是相

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反的，引物的核昔酸序列要能夠和相應模板的核昔酸序列發(fā)生堿基互補配對，環(huán)狀DNA圖

中顯示PCR過程是從已知DNA序列的兩端分別向相反方向形成子鏈，一個引物是與已知

DNA序列的第一條鏈的左端互補結合，向右側方向延伸形成子鏈，該引物是④，另一個引物

是與已知DNA序列的第二條鏈的右端互補結合，向左側方向延伸形成子鏈，該引物是②。

類型五利用PCR技術快速檢測病原體

【基本模型】

病原體檢測是診斷和控制傳染病的重要手段，為迅速而準確地確定病原體的存在和種類，發(fā)

展了許多快速檢測方法。PCR技術是一種基于DNA擴增原理的快速病原體檢測方法，它能

夠在幾小時內(nèi)擴增和檢測極小量的病原體DNA,并且具備高度的特異性和敏感性。

【典例突破】

5.(2024?煙臺高三一模)人類猴痘由Yaba猴病毒(雙鏈DNA病毒)引起，實時熒光定量

PCR(qPCR)可用于Yaba猴病毒的快速檢測。進行qPCR時，在反應體系加入Taqman探針,

Taqman探針兩端連有熒光基團(R)和抑制熒光發(fā)出的淬滅基團(Q),完整的Taqman探針不發(fā)

出熒光，當探針被水解后R基團會發(fā)出熒光(如圖所示)，隨循環(huán)次數(shù)的增加，熒光信號強度

增加。

(1)采用qPCR檢測Yaba猴病毒需在一定的溶液中才能進行，反應體系中還需提

供DNA模板、原料、、Tagman探針、7agDNA聚合酶、Mg2+等。qPCR過程中，

ZhqDNA聚合酶的兩個作用是o

⑵qPCR檢測病毒的核酸一般具有特異性強和靈敏度高的特點，這與反應體系中加入的

和有關。但有時也可能會出現(xiàn)“假陰性”的結果。可能的原因有

_______________________________________________________________________(答出兩點)。

(3)在PCR反應體系中一般都要加入Mg2+,原因是。為了探

究Mg2+對PCR擴增效果的影響，科研人員在PCR反應體系中加入不同濃度的Mg2+進行了

實驗。結果如圖所示，據(jù)此可得出的結論有________________________________________

答案(1)緩沖引物催化合成DNA子鏈；催化探針水解(2)引物探針取樣不規(guī)范；取樣所獲樣本

量不足；病毒發(fā)生了基因突變(3)7hqDNA聚合酶需要Mg2+激活在不含Mg2+的緩沖液中靶基

因幾乎無法擴增；在不同濃度的Mg2+緩沖液中靶基因的擴增效果不同；在實驗濃度下，4mM

為最佳濃度

解析(3)真核細胞和細菌的DNA聚合酶(7aqDNA聚合酶)都需要Mg2+激活；分析題圖可知，⑥

為陰性對照組，其熒光強度非常弱，意味著不加Mg2+的緩沖液中靶基因幾乎無法擴增；而加

了不同濃度的Mg2+的緩沖液對應的曲線①②③④⑤熒光強度均高于⑥，且③曲線(Mg2+濃度

為4mM)的峰值對應的熒光強度最高，說明在不同濃度的Mg2+緩沖液中靶基因的擴增效果不

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同；在實驗濃度下，4mM為最佳濃度。

課時精練

一、選擇題

1.（2024?廈門高三質檢）如圖表示PCR過程中某個階段反應體系的情況，①②③④表示相關

物質，L、R表示方向。下列敘述正確的是（）

A.②鏈從L到R的方向為3'-5',①②鏈均可作為子鏈合成的模板

B.PCR過程需要通過解旋酶斷開氫鍵，且為邊解旋邊復制

C.以1個DNA為模板經(jīng)3次循環(huán)需消耗8個引物③

D.物質③的5,端添加了某序列，至少需經(jīng)2次循環(huán)才可獲得該序列的雙鏈產(chǎn)物

答案D

解析根據(jù)DNA分子中兩條鏈的反向平行關系可判斷，②鏈從L到R的方向為5,-3',A

錯誤；PCR過程是通過高溫將雙鏈DNA之間的氫鍵斷開，并且是全部解旋之后才進行復制,

B錯誤；以1個DNA為模板經(jīng)3次循環(huán)產(chǎn)生的DNA分子數(shù)目為23=8,需消耗7個引物③,

C錯誤。

2.（2024?重慶高三質檢）不對稱PCR是利用不等量的一對引物來產(chǎn)生大量單鏈DNA（ssDNA）

的方法，如圖所示。不對稱PCR中加入的一對引物中含量較少的被稱為限制性引物，含量較

多的被稱為非限制性引物，兩者的比例通常為1：100,PCR反應最初的若干次循環(huán)中，其擴

增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA（dsDNA）,但當限制性引物消耗完后，就會產(chǎn)生大量的ssDNA。下列

相關說法錯誤的是0

A.用不對稱PCR方法擴增目的基因時，不需要知道基因的全部序列

B.進行最初若干次循環(huán)的目的是增加模板DNA的量

C.最后大量獲得的ssDNA與圖中乙鏈的堿基序列一致

D.因為雙鏈DNA和單鏈DNA的分子量大小不同，可通過電泳方法將其分離

答案C

解析不對稱PCR中加入的一對引物中含量較多的被稱為非限制性弓I物，非限制性引物是與乙

鏈結合，最后大量獲得的ssDNA與圖中甲鏈的堿基序列一致，C錯誤。

3.（2024?無錫高三模擬）重疊延伸PCR可實現(xiàn)定點基因誘變，其操作過程如圖所示（凸起處代

表突變位點）。下列說法正確的是0

A.過程①需要把兩對引物同時加入一個擴增體系以提高擴增效率

B.過程①需要2輪PCR才能得到圖中所示PCR產(chǎn)物

C.過程②的產(chǎn)物都可以完成延伸過程

D.若過程④得到16個突變基因則需要消耗15個通用引物RP2

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答案D

解析兩種突變引物能互補配對，因此過程①必須分兩個反應系統(tǒng)進行，A錯誤；過程①至少

需要3輪PCR才能得到圖中所示PCR產(chǎn)物，B錯誤；過程②獲得的產(chǎn)物不都可以完成延伸

過程，因為子鏈只能從引物的3'端開始延伸，C錯誤；若過程④得到16個突變基因，由于

模板中不含有通用弓I物，則產(chǎn)生16個突變基因共需要消耗16X2—2=30（個）通用弓I物，而需

要通用引物RP2的數(shù)量為30+2=15（個），D正確。

4.反向PCR是一種通過已知序列設計引物對未知序列（圖中L、R）進行擴增的技術，其過程

如圖所示。下列相關敘述不正確的是（）

A.過程①用同一種限制酶對未知序列兩端進行切割

B.過程②需要使用DNA連接酶，形成磷酸二酯鍵

C.過程③PCR體系需要添加耐高溫的DNA聚合酶和解旋酶

D.該技術可檢測T—DNA整合到植物染色體DNA的位置

答案C

解析過程③即PCR擴增，PCR技術中DNA解旋是在高溫下實現(xiàn)的，不需要加入解旋酶，C

錯誤。

5.IKK激酶參與動物體內(nèi)免疫細胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷（SCID）患兒的

區(qū)即基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃。為研究該患兒發(fā)病機制，研究人員應用大引物

PCR定點誘變技術獲得突變基因，如圖所示。下列說法錯誤的是（）

A.PCR中使用的引物有引物/、引物C

B.PCR2中使用的引物有引物8、大引物b鏈

C.PCR1過程需要擴增3輪才能獲得目標產(chǎn)物

D.PCR2過程中，為減少錯誤DNA片段的產(chǎn)生可適當升高復性溫度

答案C

解析在PCR中，需要兩種弓I物，將來在切取IKKp基因時，在基因的左側需要用限制酶HindHI

來切割，在基因的右側用限制酶SacI切割，因此在PCR|中結合到基因右端的引物選擇引物

C,從題圖中看，另一個引物應含有突變堿基C,所以選擇引物/,A正確；在PCR2中，有

一個引物結合到了基因的左端，應含有限制酶/"dill識別的序列，所以要用到引物3,而另

外的一個引物就是大引物中的一條鏈，它應該結合到基因的右端，且從5,端到3,端的序列

中開始部位應含有SacI識別的序列，從圖中看，它是大引物的b鏈，B正確；PCR過程主

要是為了獲得大引物，則擴增2輪即可獲得目標產(chǎn)物，C錯誤；由于大引物較長，含C與G

的堿基較多，為減少非目的基因的獲得，在PCR?復性過程中應適當提高溫度，便于引物與

模板鏈的結合，D正確。

6.（2024?安順高三調研）熒光定量PCR技術可定量檢測樣本中DNA含量，用于病毒檢測。其

原理是在PCR反應體系中加入引物的同時，加入與某條模板鏈互補的熒光探針。當耐高溫的

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DNA聚合酶催化子鏈延伸至探針處會水解探針，使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接收到熒光信號，即每擴增

一次，就有一個熒光分子生成（如圖）。通過實時檢測熒光信號強度，可得Ct值（熒光信號達到

設定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)次數(shù)）。下列相關敘述錯誤的是（）

A.PCR每個循環(huán)包括變性、復性（引物和模板結合）、延伸3個階段

B.耐高溫的DNA聚合酶在該反應中的作用是形成磷酸二酯鍵

C.最終監(jiān)測的熒光強度與起始時反應管內(nèi)樣本DNA的含量呈正相關

D.Ct值越大表示被檢測樣本中病毒數(shù)目越多，患者危險性更高

答案D

解析Ct值越小，說明所需循環(huán)的次數(shù)越少，被檢測樣本中病毒數(shù)目越多，D錯誤。

7.（2024?襄陽高三模擬）通過設計引物，運用PCR技術可以實現(xiàn)目的基因的定點誘變。如圖

為基因工程中獲取突變基因的過程，其中引物1序列中含有一個堿基T不能與目的基因片段

配對，但不影響引物與模板鏈的整體配對，反應體系中引物1和引物2的5,端分別設計增

加限制酶a和限制酶b的識別位點。下列有關敘述不正確的是（）

A.引物中設計兩種限制酶識別位點有利于目的基因定向插入

B.復性溫度過高會導致引物不能與模板牢固結合，PCR擴增效率下降

C.第3輪PCR,引物1能與圖中②結合并且形成兩條鏈等長的突變基因

D.第3輪PCR結束后，含突變堿基對且兩條鏈等長的DNA占1/2

答案D

解析引物中設計兩種限制酶識別位點，可以配合載體的限制酶識別位點，幫助目的基因定向

插入載體，避免發(fā)生自身連接，A正確；PCR技術中，復性溫度過高會導致引物不能與互補

DNA鏈（模板）牢固結合，PCR擴增效率下降，B正確；第3輪PCR結束后，含突變堿基對

且兩條鏈等長的DNA有1個，而子代DNA有23=8（個），故含突變堿基對且兩條鏈等長的

DNA占1/8,D錯誤。

8.（2024-南通高三調研）如圖是被農(nóng)桿菌侵染的水稻植株的DNA片段，研究者將其連接成環(huán)，

并以此環(huán)為模板進行PCR,擴增出T—DNA插入位置兩側的未知序列，據(jù)此來確定T—DNA

插入的具體位置。下列有關說法錯誤的是（）

A.農(nóng)桿菌在自然條件下主要侵染雙子葉植物和裸子植物，T—DNA存在于其Ti質粒上

B.利用圖中的引物②③組合可擴增出兩側的未知序列

C.若擴增循環(huán)〃次，需要2〃+i—2個引物

D.將擴增出的未知序列與水稻基因組序列比對可確定T—DNA的插入位置

答案B

解析農(nóng)桿菌在自然條件下主要侵染雙子葉植物和裸子植物，對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能

力，A正確；耐高溫的DNA聚合酶可在引物的3,端延伸子鏈，因此利用圖中的引物①④組

合可擴增出兩側的未知序列，B錯誤；擴增循環(huán)n次，得到2"個DNA分子，總單鏈數(shù)為2X2”

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即2"+1條，只有最初的2條母鏈不需要引物，因此共需要2。+1—2個引物，C正確；不同的

DNA分子或DNA區(qū)段具有特異性，將擴增出的未知序列與水稻基因組序列比對可確定T—

DNA的插入位置，D正確。

9.實時熒光定量RT—PCR技術需要在常規(guī)PCR基礎上添加熒光染料或熒光探針，熒光染

料能特異性摻入DNA雙鏈中，從而發(fā)出熒光信號。在流感流行季節(jié)，對懷疑流感病毒感染

的患者，可以通過實時熒光定量RT—PCR技術進行核酸檢測。下列相關敘述不正確的是0

A.圖中的探針可能是利用熒光分子標記的流感病毒獨特的基因序列

B.核酸檢測是通過檢測熒光信號來確定樣本中是否有病毒核酸的

C.PCR技術利用了DNA雙鏈復制的原理，需要解旋酶和耐高溫的DNA聚合酶的催化

D.用熒光RT—PCR技術測定病毒的核酸具有特異性

答案C

解析PCR技術利用了DNA雙鏈復制的原理，不需要解旋酶，可通過高溫使DNA雙鏈解開,

但需要耐高溫的DNA聚合酶的催化，C錯誤。

二、非選擇題

10.(2023?江蘇，22節(jié)選)為了將某納米抗體和綠色熒光蛋白基因融合表達，運用重組酶技術

構建質粒，如圖1所示。請回答下列問題：

⑴分別進行PCR擴增片段F1與片段F2時，配制的兩個反應體系中不同的有

,擴增程序中最主要的不同是?

(2)將PCR產(chǎn)物片段與線性質粒載體混合后，在重組酶作用下可形成環(huán)化質粒，直接用于轉

化細菌。這一過程與傳統(tǒng)重組質粒構建過程相比，無需使用的酶主要有o

(3)轉化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選，下列敘述錯誤的有o

A.稀釋涂布平板需控制每個平板30-300個菌落

B.抗性平板上未長出菌落的原因一般是培養(yǎng)基溫度太高

C.抗性平板上常常會出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落

D.抗性平板上長出的單菌落無需進一步劃線純化

(4)為了驗證平板上菌落中的質粒是否符合設計，用不同菌落的質粒為模板、用引物Fl—F

和F2-R進行了PCR擴增，質粒P1?P4的擴增產(chǎn)物電泳結果如圖2。根據(jù)圖中結果判斷，

可以舍棄的質粒有。

(5)對于PCR產(chǎn)物電泳結果符合預期的質粒，通常需進一步通過基因測序確認，原因是

答案⑴模板、引物引物的設計(2)限制酶、(T4)DNA連接酶(3)ABC(4)P3、P4(5)電泳只能檢測

DNA分子的大小(長度)，無法確定待檢測DNA分子的堿基序列

解析⑴PCR反應進行的條件：弓I物、酶、dNTP、模板和緩沖液(其中需要Mg2+)。分別進行

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PCR擴增片段Fl與片段F2時，配制的兩個反應體系中不同的有模板（片段F1、片段F2）、

引物。PCR過程需要兩種引物，能分別與目的基因兩條鏈的3'端通過堿基互補配對結合。

引物設計是決定PCR反應成敗的最主要因素。（2）傳統(tǒng)重組質粒構建需要使用限制性內(nèi)切核

酸酶（限制酶）切割質粒，使其具有與目的基因相同的黏性末端，之后再用DNA連接酶將目的

基因和質粒連接成重組質粒。將PCR產(chǎn)物片段與線性質粒載體混合后，在DNA連接酶的作

用下可形成環(huán)化質粒，不需要使用限制性內(nèi)切核酸酶（限制酶）。（3）用稀釋涂布平板法培養(yǎng)計

數(shù)時，為了使結果更準確，一般選擇菌落數(shù)為30?300的平板，A錯誤；培養(yǎng)基冷卻后才接

種，故抗性平板上未長出菌落不是因為培養(yǎng)基溫度太高，B錯誤；轉化后的大腸桿菌需采用

含有抗生素的培養(yǎng)基篩選，一般含有重組質粒的大腸桿菌才能發(fā)展為菌落，故不會出現(xiàn)大量

雜菌形成的菌落，C錯誤；稀釋涂布平板法和平板劃線法均為分離純化細菌的方法，用稀釋

涂布平板法接種后在抗性平板上長出的單菌落無需進一步劃線純化，D正確。（4）EGFP為

720bp,AnBl為390bp,二者的總大小為720+390=1100（bp）,用引物Fl—F和F2-R進行

PCR擴增，其大小接近于Pl、P2,根據(jù)圖中結果判斷，可以舍棄的質粒有P3、P4o（5）瓊脂

糖凝膠電泳技術僅能用于分析待檢測DNA分子的大小，無法確定待檢測DNA分子的堿基序

列，因此對于PCR產(chǎn)物電泳結果符合預期的質粒，通常需進一步通過基因測序確認。

11.基因工程在農(nóng)業(yè)方面的應用發(fā)展迅速，我國轉基因作物的種植面積在世界有較高排名。

請回答下列相關問題：

（1）目的基因的篩選與獲取是基因工程的第一步。為提高機會和可能，目的基因往往從相關的

_______________________的基因中進行篩選。

⑵目的基因可以人工合成、從基因文庫中獲取，還可以利用PCR技術獲取和擴增。如圖1

展示了PCR技術獲取和擴增目的基因的原理，請分析回答下列問題：

①PCR技術利用了DNA半保留復制原理和原理。PCR的一次循環(huán)包括變性、

復性和延伸三個過程，復性的作用是o

②將一個DNA分子進行擴增，理論上目的基因最早在第次循環(huán)后獲得；第5次循環(huán)

后，可擴增得到個目的基因。

⑶反向PCR可用于擴增未知序列，其原理如圖所示。圖中鏈狀DNA分子內(nèi)側是已知序歹U,

外側為未知序列。請回答相關問題：

①EcoRI酶切后得到的一AATT稱為黏性末端，“黏性”的含義是,EcoRI切

割得到黏性末端的原因是_________________________________________________________

②不直接在圖2中DNA分子的兩端設計引物并進行擴增，原因是

③圖4中環(huán)狀DNA進行PCR的過程中，沿引物A延伸子鏈的延伸方向是（填”順時

針”或“逆時針”），PCR產(chǎn)物（填“含有”或“不含"）EcoRI的酶切位點。

復習材料

答案⑴已知結構和功能清晰⑵①堿基互補配對使引物通過堿基互補配對與兩條單鏈結合

②322(3)①兩個末端互補的堿基之間可以自發(fā)形成氫鍵切割位點在識別序列中心軸線兩側

②DNA兩端序列未知，無法設計引物③逆時針含有

12.(2024?湖北華中師大附中高三模擬)幽門螺桿菌是一種常見的人類致病菌，其骨架蛋白

MreB通過影響胭酶活