溶血性貧血實(shí)驗(yàn)室檢查

根據(jù)病因和發(fā)病機(jī)制的貧血分類一、紅細(xì)胞生成不足（一）造血干細(xì)胞復(fù)制和分化異常再生障礙性貧血異常細(xì)胞或組織骨髓浸潤骨髓病性貧血原因不明或多種機(jī)制慢性系統(tǒng)性疾?。愿腥尽⒀装Y、惡性腫瘤、慢性腎病、肝病、風(fēng)濕性疾病、內(nèi)分泌病等）伴發(fā)的貧血（二）細(xì)胞分化和成熟障礙

DNA合成障礙葉酸及（或）維生素B12缺乏所致巨幼細(xì)胞貧血血紅蛋白合成障礙缺鐵性貧血、鐵粒幼細(xì)胞性貧血珠蛋白合成缺陷珠蛋白生成障礙性貧血（海洋貧）二、紅細(xì)胞破壞過多紅細(xì)胞內(nèi)在缺陷（遺傳性缺陷）紅細(xì)胞外來因素（獲得性因素）三、失血急性失血急性失血后貧血慢性失血同缺鐵性貧血溶血性貧血

的實(shí)驗(yàn)室檢查02什么叫溶血性貧血？hemolyticanemia----指各種原因?qū)е录t細(xì)胞生存時(shí)間縮短、破壞增多或加速，骨髓代償造血功能不足時(shí)所發(fā)生的一類貧血。什么叫溶血性疾?。恐腹撬璐鷥斈芰ι凶阋匝a(bǔ)償紅細(xì)胞的損耗而不出現(xiàn)貧血。01RBC膜缺陷：遺傳球PNHB結(jié)構(gòu)異常：海洋性貧血RBC內(nèi)酶缺陷：G-6PD缺乏癥RBC內(nèi)在缺陷所致的溶貧AIHA、藥物、化學(xué)因素、感染因素RBC外來因素所致的溶貧溶血性貧血的分類(病因和發(fā)病機(jī)制)01血管內(nèi)溶血：RBC在循環(huán)血液中直接破壞，如血型不合輸血PNH02血管外溶血：RBC在脾臟破壞，如球形RBC增多癥、脾亢03原位溶血：幼RBC在骨髓中溶血，如AL、巨幼貧溶血性貧血的分類（溶血的場所）AB第二步哪一類溶貧第一步確定是否有溶血如何診斷溶血性貧血？01找出RBC破壞增多的依據(jù)02RBC壽命縮短03血片見RBC碎片04血漿游離HB增高（血管內(nèi)溶血）05HB尿檢測（＋），醬油色06尿含鐵血黃素試驗(yàn)（＋）07血清非結(jié)合膽紅素（間接膽紅素）增高08尿膽原增高09血清結(jié)合珠蛋白減低10血漿高鐵血紅素清蛋白檢測（＋）電泳法：區(qū)帶首先確定有無溶血Hb代謝示意圖

珠蛋白血紅素鐵+卟啉單核巨噬系統(tǒng)脾臟血管外溶血RBC血管內(nèi)溶血血漿游離Hb腎臟血紅蛋白尿游離膽紅素肝臟結(jié)合珠蛋白近曲小管上皮細(xì)胞腎閾結(jié)合膽紅素糞膽原的腸肝循環(huán)含鐵血黃素尿

Rous實(shí)驗(yàn)?zāi)懼S膽原腸道血液腎臟尿膽原高鐵血紅蛋白清蛋白/血紅素蛋白紅細(xì)胞壽命測定01方法：51Cr標(biāo)記紅細(xì)胞，檢測其半衰期02正常紅細(xì)胞半衰期25—32天03溶血性貧血者半衰期小于15天04確定溶血性貧血的可靠方法05溶血性貧血篩查血漿游離血紅蛋白測定01參考值：＜50mg/L(1-5mg/dl)02臨床意義：03血管內(nèi)溶血者明顯升高04AIHA、珠蛋白生成障礙性貧血者輕度升高05血管外溶血時(shí)正常06溶血性貧血篩查感染、創(chuàng)傷、糖皮質(zhì)激素治療、服用避孕藥物、肝外阻塞性黃疸可增高肝病、傳單、先天性無結(jié)合珠蛋白血癥減少或消失各種溶血均可減低，血管內(nèi)溶血減低最顯著臨床意義：參考值：血清結(jié)合珠蛋白測定溶血性貧血篩查方法：生化法：與硫化銨形成銨血色原，經(jīng)光譜儀測定558nm吸收光帶電泳法：醋酸纖維膜電泳正常值：陰性臨床意義：陽性者表示嚴(yán)重的血管內(nèi)溶血血漿高鐵血紅素清蛋白測定020103050604溶血性貧血篩查含鐵血黃素尿試驗(yàn)（Rous試驗(yàn)）原理：鐵離子+氰化鉀鐵氰化鐵（藍(lán)色）如腎小管上皮有含鐵血黃素，該試驗(yàn)陽性正常值：陰性臨床意義：陽性者表示慢性血管內(nèi)溶血，如PNH010302040506溶血性貧血篩查含鐵血黃素顯示紅細(xì)胞代償增生依據(jù)外周血網(wǎng)織紅增多；外周血紅細(xì)胞形態(tài)：大小不均，大紅細(xì)胞、嗜多色細(xì)胞及有核紅細(xì)胞，Howell-Jolly小體、Cabot環(huán)、點(diǎn)彩紅細(xì)胞等增生性貧血骨髓象：增生明顯活躍，紅系顯著增生，粒系相對減少，巨核系一般正常紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)紅細(xì)胞膜缺陷的檢驗(yàn)二、哪一類溶血性貧血？正常紅細(xì)胞為雙凹圓盤狀,在低滲鹽水中吸水膨脹的適應(yīng)性較大(可增加70%的體積而不破裂)本試驗(yàn)是測定紅細(xì)胞在一系列不同濃度低滲氯化鈉鹽水內(nèi)開始溶血和完全溶血的氯化鈉濃度，檢測其對不同濃度的低滲鹽水溶血的抵抗力。原理:遺傳性球形細(xì)胞增多癥等紅細(xì)胞的表面積/體積(S/V)的比值小,對低滲鹽水的適應(yīng)性小(脆性增大)1、細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)（erythrocyteosmoticfragilitytest)原理：低滲溶液紅細(xì)胞皺縮高滲溶液正常等滲溶液紅細(xì)胞膨脹甚至破裂低滲溶液030201

參考值

0.6-0.8%NaCl溶液——紅細(xì)胞不破裂

0.42-0.46%NaCl溶液——部分紅細(xì)胞破裂

0.28-0.34%NaCl溶液——紅細(xì)胞完全破裂NaCl0.85%0.6%0.42%0.34%0.8%0.7%對低滲溶液抵抗能力減小即RBC滲透脆性增加臨床意義脆性增高開始溶血及完全溶血時(shí)氯化鈉濃度較正常對照提前兩管，即0.04%以上;開始溶血＞0.5%，完全溶血＞0.38%主要見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥脆性減低小細(xì)胞低色素性貧血：海洋性貧血、缺鐵性貧血2、紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)原理37℃孵育24小時(shí)，細(xì)胞內(nèi)葡萄糖消耗增加，ATP減少，鈉離子泵出減少，細(xì)胞膨脹，脆性增高。參考值未孵育50%溶血4~4.45g/LNaCl孵育50%溶血4.65~5.9g/LNaCL臨床意義——常用于輕型遺傳球、遺傳性非球形細(xì)胞溶血的診斷脆性增高遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥脆性減低缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鐮形細(xì)胞貧血、脾切除術(shù)后先天性非球形紅細(xì)胞溶血患者紅細(xì)胞內(nèi)酶缺陷，葡萄糖酵解障礙，ATP不足不能維持細(xì)胞鈉泵作用患者紅細(xì)胞在自身血漿中孵育48h，溶血增強(qiáng)，可加入葡萄糖、ATP，觀察溶血能否被糾正參考值正常人孵育后輕微溶血、溶血度＜3.5%加葡萄糖和加ATP后，溶血明顯糾正，溶血度＜1%原理3、自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)3、自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)

臨床意義——常用于遺傳球、遺傳性非球形細(xì)胞溶血的鑒別診斷遺傳性球形細(xì)胞增多癥遺傳性非球形細(xì)胞性溶貧（Ⅰ型）葡萄糖6磷酸脫氫酶缺陷癥（Ⅱ型）丙酮酸激酶缺陷癥孵育后溶血增強(qiáng)增強(qiáng)增強(qiáng)加葡萄糖后溶血明顯糾正部分糾正不能糾正加ATP后溶血明顯糾正部分糾正糾正（二）紅細(xì)胞酶缺陷的檢驗(yàn)定義：紅細(xì)胞酶缺陷所致溶血性貧血又稱紅細(xì)胞酶病，指參與紅細(xì)胞代謝的酶由于基因缺陷，導(dǎo)致活性改變而發(fā)生溶血的一組疾病內(nèi)容：高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)氰化物-抗壞血酸試驗(yàn)變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定020304050601G6PD正常原理NADPH還原型輔酶Ⅱ煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH充足高鐵血紅蛋白亞鐵血紅蛋白1、高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)G6PD高鐵Hb還原酶G6PG6-PANADPNADPH還原型美蘭氧化型美蘭高鐵Hb（Fe3+）為褐色氧合HB（Fe2+）紅色結(jié)果：光電比色法，正常還原率＞75%，低于75%為異常，提示G6PD活力↓，74～31%為G-6PD缺乏的雜合子（紅棕色），30%以下為顯著缺陷的純合子（為棕色—目測比色法）。01.參考值02.高鐵血紅蛋白還原率＞75%03.高鐵血紅蛋白0.3~1.3g/L04.臨床意義05.G6PD缺陷導(dǎo)致高鐵血紅蛋白還原率下降06.見于蠶豆病、伯氨喹型藥物溶血性貧血1、高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)原理:6-磷酸葡萄糖NADPGSHH202

氧合血紅蛋白

6-磷酸葡萄糖酸NADPHGSSGH20高鐵血紅蛋白結(jié)果:正常人標(biāo)本呈紅色G-6PD2、氰化物-抗壞血酸試驗(yàn)臨床意義:正常血液數(shù)小時(shí)后變成暗色純合子G6PD缺乏者2h變色雜合子G6PD缺乏者3~4h變色3、變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)又稱“紅細(xì)胞包涵體”、“赫恩小體”、“Heinz小體”、“海因小體”原理：G-6PD缺乏致紅細(xì)胞內(nèi)GSH減少，高鐵血紅蛋白增高，形成變性珠蛋白小體，沉著于紅細(xì)胞膜上。

抗凝血+乙酰苯肼37℃溫育2～4h充分的氧化

其Hb氧化成Heinz小體（用結(jié)晶紫、甲紫或煌焦油蘭染色，油鏡觀察）結(jié)果：該小體為圓形或多角形色涵體，φ0.2～2um。多位于紅細(xì)胞邊緣，一個(gè)紅細(xì)胞含1～20個(gè)，多為1～2個(gè)，以含5個(gè)以上小體的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)正常人＜30%G6PD缺陷癥、不穩(wěn)定Hb、HbH病等常高于45%4、G6PD熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定原理:G6PD使NADP還原成NADPH,后者在紫外線照射下發(fā)出熒光

參考值：正常人強(qiáng)熒光；酶活性5U/gHb6-磷酸葡萄糖NADPGSHH202

氧合血紅蛋白

6-磷酸葡萄糖酸NADPHGSSGH20高鐵血紅蛋白G-6PDADP+PK磷酸丙酮酸丙酮酸NAPH乳酸NAD（無熒光）5、丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定原理:參考值正常PK活性熒光在20min內(nèi)消失酶活性15.1±4.99U/gHb臨床意義PK嚴(yán)重缺乏（純合子）熒光60min不消失雜合子熒光25~60min消失(三)、珠蛋白合成異常的檢測原卟啉血紅素Hb（四聚體）鐵血紅蛋白的結(jié)構(gòu)珠蛋白：由4條多肽鏈組成2條α鏈正常人HbA（22）97%HbA2（22）1.5-3%HbF（22）0.5-0.8%2條非α鏈血紅蛋白病珠蛋白肽鏈量的不正常(地中海貧血)血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)異常(異常血紅蛋白病)遺傳性溶血性疾病1.血紅蛋白電泳蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)—是由氨基酸的NH+與COO-

決定的。等電點(diǎn)—調(diào)節(jié)水溶液的pH，能使蛋白質(zhì)的NH+與COO-數(shù)目相等呈電中性，此時(shí)蛋白質(zhì)無電泳，在水中電解度小，并發(fā)生沉淀。

電泳：一個(gè)帶電荷的離子或膠體顆粒在電場中可向一極移動。

原理：在一定的pH緩沖液中，緩沖液的pH大于Hb等電點(diǎn)，其帶負(fù)電，在電場中向陽極移動；反之向陰極移動。由于各種Hb珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)不同，其等電點(diǎn)不同，電泳方向和速度亦不同，故可分離出不同的區(qū)帶，對區(qū)帶進(jìn)行電泳掃描，可進(jìn)行Hb定量分析。電泳結(jié)果(+)HJKAGDE(-)

1.HbH增多是HbH病，為α-地中海貧血的一種；HbA2明顯增高見于輕型β地中海貧血；HbF明顯增高見于中重型β地中海貧血。

2.正常值：醋纖法（PH8.6）HbA96%~98%，HbA21.0%~3.1%，HbF＜2%CAA2FA異常正常胎兒蛋白HbF（22）酸洗脫試驗(yàn)：含HbF紅細(xì)胞著色原理：HbF抗酸力強(qiáng)臨床意義：臍帶血、新生兒、嬰兒陽性成人小于1%地中海貧血輕者少數(shù)紅細(xì)胞陽性地中海貧血重癥陽性細(xì)胞增多HbF定量測定（堿變性試驗(yàn)）:原理：堿性溶液中HbF不易變性沉淀，可測定濾液中Hb量臨床意義：2歲-成人HbF<2%，>4%為異常重型地貧80-90%AL、AA、淋巴瘤等可輕度升高0102HbA2定量測定診斷輕型地貧的重要依據(jù)限制性內(nèi)切酶譜分析基因診斷(四)、自身免疫性溶血性貧血檢測自身免疫性溶血性貧血

（autoimmunehemolyticanemia,AIHA)定義：體內(nèi)免疫異常，產(chǎn)生自身抗體、補(bǔ)體，結(jié)合在紅細(xì)胞膜上使紅細(xì)胞破壞加速分類：

可為原發(fā)性的，也可繼發(fā)于結(jié)締組織病、造血系統(tǒng)腫瘤、感染等病因：尚未完全闡明，可能因素：病毒感染可激活多克隆B細(xì)胞或化學(xué)物與紅細(xì)胞膜相結(jié)合，改變其抗原性，導(dǎo)致自身抗體產(chǎn)生按抗體反應(yīng)最適溫度分為溫抗體型和冷抗體型，后者又分為冷凝集素綜合征和陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿1.Coombs試驗(yàn)（抗人球蛋白試驗(yàn)）

原理：不完全抗體(IgG)，無法架接兩個(gè)鄰近的紅細(xì)胞，而只能和一個(gè)紅細(xì)胞抗原相結(jié)合?？谷饲虻鞍卓贵w是完全抗體,可與多個(gè)不完全抗體的Fc段相結(jié)合,導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象,稱為抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。

目的：檢查紅細(xì)胞表面的或血清中游離的不完全抗體，用于診斷AIHA。直接CoombsTest(+)說明病人RBC表面上包被有不完全抗體間接CoombsTest(+)則說明病人血清中存在著不完全抗體Coombs血清（抗人球蛋白血清）（1）直接試驗(yàn)１．正常人：陰性２．直接反應(yīng)陽性，最常見于AIHA（其他有藥物誘發(fā)的溶貧、陣發(fā)性冷性Hb尿、新生兒同種免疫溶血病、SLE、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、惡性淋巴瘤等）。目的：測定吸附于紅細(xì)胞表面的不完全抗體方法：結(jié)果：（2）間接試驗(yàn)有過?？贵w時(shí)直接、間接均為陽性。AIHA分三型：C3型12%，IgG型24%，IgG+C3型60%。冷凝集素病為IgM抗體。目的：測定血清中游離的不完全抗體方法：結(jié)果：間接陽性，見于AIHA，正常人為陰性。病人血清正常RBC抗IgG原理冷凝激素是可逆性抗體：低溫時(shí)可與自身紅細(xì)胞、O型紅細(xì)胞、患者同型紅細(xì)胞發(fā)生凝集，溫度升高時(shí)，凝集塊又復(fù)消失參考值效價(jià)低于1:40，反應(yīng)最高溫度4℃臨床意義某些AIHA很高2.冷凝集素試驗(yàn)冷熱雙相溶血試驗(yàn)原理：陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿癥（PCH）患者的血清中有雙相溶血素，在0