器官移植和HLA配型

臨床免疫學(xué)檢驗吉林醫(yī)藥學(xué)院檢驗學(xué)院

器官移植與HLA分型檢測技術(shù)majorhistocompatibilitycomplex,MHC主要組織相容性復(fù)合體/HLA復(fù)合體123654人類白細(xì)胞抗原h(huán)umanleukocyteantigen,HLA/MHC抗原/MHC分子HLA的結(jié)構(gòu)HLA-Ⅱ類分子HLA-Ⅰ類分子公元4世紀(jì)羅馬教堂自體移植同種異基因移植移植物抗原刺激受者的免疫系統(tǒng)/受者組織抗原刺激移植物中的免疫細(xì)胞誘發(fā)的免疫應(yīng)答稱為移植排斥反應(yīng)同種同基因移植異種移植同種異型移植排斥反應(yīng)010305020406第1節(jié)MHC基因和遺傳特點（復(fù)習(xí)）MHC基因的構(gòu)成MHC基因的特性MHC基因的意義（一）定位第6號染色體短臂（6p21.31）全長3600kb，共有224個基因座位，128個表達(dá)產(chǎn)物。（二）基因區(qū)經(jīng)典Ⅰ類基因：B、C、A位點經(jīng)典Ⅱ類基因：DP、DQ、DR位點0102一、MHC基因的構(gòu)成Ⅰ類基因區(qū)HLA復(fù)合體3600kb長度224基因座位Ⅱ類基因區(qū)ACBDRDQDP著絲點Pq人6號染色體MHC-Ⅱ類分子MHC-Ⅰ類分子βαααBCαβDRAβαDQDPαβ二、MHC基因遺傳特點HLA為高度多態(tài)性基因MHC基因復(fù)合體是由多個位置相鄰的基因座位組成，可以編碼相同或相似的MHC抗原。MHC為共顯性表達(dá)Ⅱ類基因Ⅰ類基因αβDPDQDRBCAαβαβααα2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACBⅡ類基因Ⅰ類基因基因型別2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACBⅡ類基因Ⅰ類基因基因型別人群之中所有基因座位等位基因都相同的幾率：

1262381245593851276506≈1

1019

人群之中MHC抗原相同的幾率：

6924621028≈1

109

1.單體型遺傳（二）單體型和連鎖不平衡性意義：器官移植選擇供體順序自身﹥同卵雙生﹥兄弟姐妹﹥父母﹥親屬﹥無關(guān)人群父母與子女完全相同的幾率：父母與子女一半相同的幾率：子女間完全相同的幾率：子女間一半相同的幾率：子女間完全不同的幾率：0100%25%50%25%010203單體型遺傳連鎖不平衡性HLA為高度多態(tài)性基因（二）單體型和連鎖不平衡性第2節(jié)HLA與器官移植在三類HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ類分子是觸發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原。01次要組織相容性抗原ABO血型抗原系統(tǒng)其他組織特異性抗原02主要組織相容性抗原03決定移植“成敗”的抗原01自體移植（autograft）器官移植的類型02同種同基因移植（syngraft）同種異基因移植（allograft）皮膚，骨髓，軟骨和骨03異種移植（xenograft）同種異型移植同種異型排斥反應(yīng)的識別機(jī)制受者對T細(xì)胞對供者的MHC分子的直接與間接識別。直接識別機(jī)制：010203直接識別logo受者T細(xì)胞受者T細(xì)胞直接識別的靶結(jié)構(gòu)同種異型抗原的直接識別及其效應(yīng)01受者T細(xì)胞識別受者APC加工處理的供者的MHC分子02在急性排斥反應(yīng)中、晚期以及慢性排斥反應(yīng)中起重要作用。間接識別識別方式間接識別同種異型抗原的間接識別二、同種異型移植排斥反應(yīng)的類型及效應(yīng)機(jī)制宿主抗移植物反應(yīng)（hostversusgraftreaction,HVGR）依據(jù)反應(yīng)發(fā)生的時間及病理強(qiáng)度分為：超急性排斥反應(yīng)（術(shù)后開始至幾個小時）急性排斥反應(yīng)（術(shù)后幾天至幾周）慢性排斥反應(yīng)（術(shù)后數(shù)月至數(shù)年）超急性排斥反應(yīng)發(fā)生示意圖移植物抗宿主反應(yīng)（graftversushostreaction,GVHR）更為嚴(yán)重的一種排斥反應(yīng)原因：受者與供者HLA不相匹配；移植物中成熟的T細(xì)胞多；受者處于免疫功能極度低下的狀態(tài)常見于：骨髓移植（造血干細(xì)胞移植）、胸腺、脾移植及新生兒接受大量輸血。三、同種異體移植排斥反應(yīng)的防治尋求與受者M(jìn)HC相配的供者組織或器官是目前最為有效多見的方法。ABO血型抗原配型HLA抗原配型供者與受者HLA-A、B相配的位點越多存活率越高；上述的基礎(chǔ)上，HLA-DR、DQ盡可能的匹配；HLA-DR類型對存活率影響較大。使用免疫抑制藥物多為抑制T細(xì)胞藥物環(huán)孢菌素A（CsA），F(xiàn)K-506、Rapamycin去氧精胍菌素等抗生素類；阻斷T細(xì)胞的生長周期激素可溶性CK受體、抗CK抗體和抗粘附分子抗體logo阻斷協(xié)同刺激信號誘導(dǎo)T細(xì)胞失能誘導(dǎo)對移植抗原的特異性耐受免疫抑制劑的毒副作用（致死性感染和腫瘤）理想方法是誘導(dǎo)特異性耐受。新方案：誘導(dǎo)凋亡；誘導(dǎo)T細(xì)胞無應(yīng)答（anergy）包括輸入可溶性CTLA-4及CD40L-CD40、CD2-CD58等信息傳遞阻斷。第3節(jié)HLA分型檢測技術(shù)01分子生物學(xué)分型02血清學(xué)分型技術(shù)03細(xì)胞分型技術(shù)0420世紀(jì)60年代0520世紀(jì)80年代0620世紀(jì)70年代07血清學(xué)分型技術(shù)原理應(yīng)用一系列已知HLA特異性的分型血清與待測的淋巴細(xì)胞反應(yīng)，通過補體依賴的細(xì)胞毒性實驗，來檢測HLA抗原特異性。典型技術(shù)：定型板法（微量細(xì)胞毒實驗）0102反應(yīng)結(jié)果測定1.染料拒染法臺盼藍(lán)伊紅碘化丙啶7-AAD2.流式細(xì)胞術(shù)染料拒染法的判定標(biāo)準(zhǔn)死（著染）細(xì)胞（%）記分結(jié)果判斷0～101陰性11～202可疑陰性21～504弱陽性51～806陽性>808強(qiáng)陽性0未試驗或不能讀數(shù)23145DR,DQ（B細(xì)胞為靶細(xì)胞）B,C,AHLA-Ⅱ類分子:HLA-Ⅰ類分子:血清學(xué)分型可檢測的抗原（SD抗原）缺點優(yōu)點操作簡便易行節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好無需特殊設(shè)備耗時長不同批號抗血清結(jié)果常有不同3.方法學(xué)評價01040203細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)（LD抗原）原理混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，檢測細(xì)胞增殖（mixedlymphocyteculture,MLC）單向MLC雙向MLC1.單向MLC陰性分型法

陽性分型法

刺激細(xì)胞：已知HLA型別的分型細(xì)胞（預(yù)處理，使其失去增殖能力）反應(yīng)細(xì)胞：受檢者外周血單個核細(xì)胞（具有增殖能力）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化（形態(tài)學(xué)）3H-TdR摻入法MTT還原法刺激細(xì)胞01HLA-DP102受者T淋巴細(xì)胞03+04增殖弱HLA-DP105非HLA-DP1增殖強(qiáng)06純合子細(xì)胞只表達(dá)HLA-DP107照射處理08（1）陰性分型法預(yù)致T敏細(xì)胞01非HLA-DP102待測B淋巴細(xì)胞03+04增殖弱非HLA-DP105HLA-DP1增殖強(qiáng)06刺激細(xì)胞HLA-DP107除DP抗原外，其他HLA抗原相同08照射處理09（2）陽性分型法雙向MLC方法學(xué)評價：不能分型，但可全面地反應(yīng)供-受雙方組織相容性。遺傳型不同的兩個個體淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時，由于兩者HLA不同，能相互刺激導(dǎo)致對方淋巴細(xì)胞增殖，故稱雙向MLC。三、分子生物學(xué)分型技術(shù)(一）基本技術(shù)1.限制性片斷長度多態(tài)性分析（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）2.PCR/SSP3.PCR-SSCP分型法4.序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-sequencespecificoligonucleotide,PCR-SSO）5.基于序列的HLA分型法（sequence-basedHLAtyping,SBT）集成技術(shù)芯片技術(shù)原理：PCR-SSO反向斑點或印漬法的微型化。PCR-SSCP分型法（單鏈非變性電泳遷移分析）原理：對ssDNA進(jìn)行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳，序列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異和檢測出DNA多態(tài)性或點突變。1男，14歲。首診前3個月，感冒發(fā)燒病史。2首次就診原因:頭痛，乏力，眼瞼浮腫。實驗室檢查：蛋白尿，尿紅細(xì)胞陽性。抗炎癥治療1周，稍好，恢復(fù)上學(xué)，正常飲食。32月后，惡心、乏力，眼瞼浮腫加重，24小時尿量減少，蛋白管型。4住院治療2個月，腎臟衰竭加重，每周透析3到4次。5活檢見腎小球內(nèi)CIC沉淀，抗人IgA、IgG陽性。6建議：申請腎移植手術(shù)。親屬自愿做HLA配型，同時申請自無關(guān)人群尋找供體腎。一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。病例介紹半年后分配到合適供體腎（無關(guān)人群）；檢查身體，符合手術(shù)要求，進(jìn)行腎臟移植手術(shù)。術(shù)后臨床觀察并服用移植排斥抑制藥物，補充EPO。定期到醫(yī)院檢測血藥濃度，檢測免疫功能。（移植后8年后生存狀態(tài)良好，但長期服用抗移植排斥藥物。一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。病例介紹傳染性疾病病原學(xué)檢查ABO血型配型HLA配型符合要求供受雙方淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)陰性腎臟移植前選擇供者的檢查項目：01以ABO血型完全相同者為好，選擇最佳HLA配型的供者器官，供者無傳染性疾病。腎源選擇的原則：02T細(xì)胞總數(shù)、CD4/CD8比值、IL-2及其受體的檢測，判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評估免疫抑制劑治療效果；必要時做腎組織活檢；血藥濃度檢測，指導(dǎo)合理用藥，減肝、臟腎毒性和免疫抑制。移植后的臨床觀測:ABO血型抗原一致HLA配型主要做HLA-DR、A、B混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)：陰性受者血清細(xì)胞毒性實驗：陰性受者血清+供者細(xì)胞移植前免疫學(xué)檢測HLA匹配與移植排斥反應(yīng)02040608010006122436術(shù)后時間存活率供者與受者相差一個HLA基因供者與受者相差兩個HLA基因3位點6個基因均匹配時，移植腎的10年存活率為62%，5基因為47%，4基因為45%，3基因為40%，無1匹配時為33%，說明HLA配型可減少移植物的同種異型抗原性，有助于提高移植物的長期存活率HLA-A、B、DR配型與腎移植術(shù)后10年存活率6基因5基因4基因3基因無匹配在三類HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ類分子是觸發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原。次