《彩色馬蹄蓮組培快繁技術(shù)規(guī)程（報(bào)批稿）》

ICS65.020.20CCSB6232IDB32/TXXXX—XXXX 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4縮略語 下列縮略語適用于本文件 5無菌系的建立 5.1外植體獲取 5.2外植體的消毒 25.3不定芽的誘導(dǎo) 26培養(yǎng) 26.1初代培養(yǎng) 26.2繼代培養(yǎng) 26.3無菌仔球的培養(yǎng) 26.4生根培養(yǎng) 27煉苗及移栽 27.1環(huán)境條件 27.2煉苗 27.3移栽基質(zhì) 37.4移栽 38移栽后管理 38.1水分 38.2光照 38.3溫度 38.4濕度 38.5施肥 38.6病害防治 39一年生仔球的培養(yǎng) 39.1生產(chǎn) 39.2采收 39.3儲藏 4附錄A（規(guī)范性）不同培養(yǎng)階段培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)條件 附錄B（資料性）基質(zhì)消毒方法 2附錄C（資料性）常用細(xì)菌殺菌劑 DB32/TXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省園藝標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出、歸口并組織實(shí)施。本文件起草單位：江蘇省中國科學(xué)院植物研究所。本文件主要起草人：鄭玉紅、逯巖、韓福貴、蘆治國、李駿豪、馬玉磊、付嬌嬌。1DB32/TXXXX—XXXX彩色馬蹄蓮組培快繁技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了彩色馬蹄蓮組培快繁的無菌系的建立、培養(yǎng)、煉苗及移栽、移栽后管理和一年生仔球的培養(yǎng)等。本文件適用于采用組織培養(yǎng)的方式進(jìn)行彩色馬蹄蓮的繁殖。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5084農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1無菌系asepticline在無菌條件下，對外植體消毒滅菌后，形成的無菌群體。3.2無菌仔球aseptictuberlets通過組織培養(yǎng)的方法獲得無菌小塊莖。3.3一年生仔球one-year-oldtubers組培苗移栽后，經(jīng)過一個(gè)生長季的培養(yǎng)發(fā)育形成的塊莖。4縮略語下列縮略語適用于本文件6-BA：6-芐基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine)IBA：吲哚丁酸(3-Indolebutyricacid)MS：一種組織培養(yǎng)常用的基本培養(yǎng)基(Murashige和Skoog(1962))NAA：α-萘乙酸(α-Naphthyleneaceticacid)5無菌系的建立5.1外植體獲取2DB32/TXXXX—XXXX選取直徑2.5cm~4.0cm的健康的彩色馬蹄蓮塊莖，用800倍~1000倍廣譜性殺菌劑水溶液浸泡15min后，淺埋于經(jīng)高壓滅菌的濕潤細(xì)沙中，在光照強(qiáng)度3000lx、光照時(shí)間12h/d、(25±1)℃的條件下預(yù)培養(yǎng)7d～10d后，選取芽長約1cm的塊莖，作為外植體。5.2外植體的消毒用軟毛刷將塊莖刷洗干凈，避免損傷頂芽，將其切成長寬均約為1.5cm的帶芽小塊，放入含1%液體洗滌劑的溶液中振蕩洗滌20min~30min，之后流水沖洗40min~60min，轉(zhuǎn)入超凈工作臺，75％酒精消毒30s~45s后，無菌水沖洗2次~3次，再用有效氯含量2%~3%的次氯酸鈉溶液消毒25min～35min，無菌水沖洗4次～5次，無菌吸水紙吸干表面的水分。5.3不定芽的誘導(dǎo)將消毒好的彩色馬蹄蓮?fù)庵搀w切成大小約lcm3的帶芽小塊，接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件按附錄A執(zhí)行，直至外植體萌發(fā)出不定芽。6培養(yǎng)6.1初代培養(yǎng)將生長至4.0cm~6.0cm的不定芽連同部分塊莖一起切下，轉(zhuǎn)接到不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件按附錄A執(zhí)行，直至誘導(dǎo)出塊狀叢生芽。6.2繼代培養(yǎng)將塊狀叢生芽切成約1.0cm2小塊，接種到壯芽培養(yǎng)基上，進(jìn)行壯芽培養(yǎng)，培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件按附錄A執(zhí)行，培養(yǎng)周期60d~80d，直至叢生芽長成可以分切成單株的小苗。其中，在30d~35d，采用同樣的配方進(jìn)行繼代培養(yǎng)。在第60d~65d，將分切成單株的小苗接種到壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件按附錄A執(zhí)行，直至長成塊莖直徑約0.5cm小苗。6.3無菌仔球的培養(yǎng)將塊莖約0.5cm小苗保留1.0cm~2cm葉柄，進(jìn)行瓶內(nèi)結(jié)球培養(yǎng)，培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件按附錄A執(zhí)行，培養(yǎng)周期30d~40d，直至每株小苗均膨大出直徑約0.8cm的仔球。6.4生根培養(yǎng)將無菌仔球保留1.0cm~1.5cm葉柄，進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件按附錄A執(zhí)行，直至每株苗均長成高度2.0cm~3.0cm、不定根3~5條組培苗。7煉苗及移栽7.1環(huán)境條件煉苗和移栽均宜在春季3月~4月或秋季9月~10月進(jìn)行。若其他季節(jié)進(jìn)行，需在溫度18℃~25℃,濕度60%~80%的溫室中進(jìn)行。7.2煉苗在組織培養(yǎng)的緩沖間將組培瓶蓋擰松，放置2d~3d；之后打開瓶蓋，再放置2d～3d。3DB32/TXXXX—XXXX7.3移栽基質(zhì)采用泥炭土:珍珠巖＝2:1時(shí)，可適量加入蛭石。第一次使用的基質(zhì)無需消毒，重復(fù)使用基質(zhì)應(yīng)消毒后使用，基質(zhì)消毒可采用物理消毒法或化學(xué)消毒法。具體的操作方法見附錄B。7.4移栽用鑷子將完成煉苗的組培苗從瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800倍~1000倍多菌靈浸泡8min~10min，移栽到50孔、孔徑4.5cm、孔深4.5cm的穴盤中。也可移栽到高40cm、寬90cm～120cm的苗床上；定植密度（600~700）株/m2，定植深度1.5cm~2.0cm，然后用噴霧法澆透水。8移栽后管理8.1水分采用EC值1.5以下，pH值6.5～7.2的灌溉水。水質(zhì)應(yīng)符合GB5084的要求。移栽后4w內(nèi)，保持基質(zhì)相對含水量60%～70%；4w后，進(jìn)行正常的水分管理。8.2光照夏季露地移栽時(shí)，應(yīng)加蓋一層遮光度30%～50%遮陽網(wǎng)進(jìn)行遮蔭。8.3溫度溫度宜控制在18℃~28℃,最高不超過30℃。夏季移栽，當(dāng)溫度超過28℃時(shí)，應(yīng)用微噴霧設(shè)備降溫，同時(shí)加大遮陰度，保持良好的通風(fēng)。8.4濕度移栽一周內(nèi)宜保持空氣濕度80%~90%，一周后可逐步降低，宜保持在60%以上。8.5施肥定植約4w后，應(yīng)進(jìn)行根外施肥?？墒褂肗:P:K=2:1:1，濃度0.3%~0.5%的液態(tài)肥，并按先低后高的原則，每7d~10d施肥一次。8.6病害防治以預(yù)防細(xì)菌性病害為主?？擅?w~3w進(jìn)行一次灌根。常用廣譜性殺菌劑見附錄C。9一年生仔球的培養(yǎng)9.1生產(chǎn)彩色馬蹄蓮組培苗在穴盤或苗床上栽培一個(gè)生長周期，85%以上的塊莖直徑達(dá)2.0cm后，即可通過斷水等方法強(qiáng)制其休眠，待葉片變黃后采收。9.2采收采收時(shí)應(yīng)盡量避免損傷塊莖表皮。4DB32/TXXXX—XXXX9.3儲藏采收后的塊莖應(yīng)置于陰涼、通風(fēng)處干燥，制成一年生仔球，用于大田生產(chǎn)。1DB32/TXXXX—XXXX不同培養(yǎng)階段培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)條件A.1不同培養(yǎng)階段培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)條件見表A.1。表A.1不同培養(yǎng)階段培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)條件培養(yǎng)階段培養(yǎng)基配方培養(yǎng)條件不定芽誘導(dǎo)MS+瓊脂（6.5mg/L~7.0mg/L）+蔗糖30g/L+6~BA（2.0~5.0）mg/L，pH5.75~5.85有無光照均可；若在光照條件下誘導(dǎo)，光照強(qiáng)度宜1000lx~3000lx，光照時(shí)長12h/d，培養(yǎng)溫度（25±1）℃不定芽增殖MS+瓊脂（6.5~7.0）mg/L+蔗糖30g/L+6-BA（2.0~4.0）mg/L，pH5.75~5.85光照強(qiáng)度為1000lx~3000lx，光照時(shí)長12h/d，培養(yǎng)溫度（25±1）℃壯芽MS+瓊脂（6.5~7.0）mg/L+蔗糖30g/L+NAA（0~0.5）mg/L+6-BA（2.0~3.0）mg/L，pH5.75~5.85光照強(qiáng)度為1000lx~3000lx，光照時(shí)長12h/d，培養(yǎng)溫度（25±1）℃壯苗MS+瓊脂（6.5~7.0）mg/L+蔗糖30g/L+NAA（0~1.0）mg/L+6-BA（2.0~3.0）mg/L，pH5.75~5.85光照強(qiáng)度為1000lx~3000lx，光照時(shí)長12h/d，培養(yǎng)溫度（25±1）℃瓶內(nèi)結(jié)球MS+瓊脂（6.5~7.0）mg/L+蔗糖（40~60）g/L+NAA（0.5~1.0）mg/L+6-BA（1.0~2.0）mg/L，pH5.75~5.85~光照強(qiáng)度為1000lx~3000lx，光照時(shí)長16h/d，培養(yǎng)溫度（25±1）℃生根MS+瓊脂（6.5~7.0）mg/L+蔗糖30g/L+IBA（1.0~2.0）mg/L，pH5.75~5.85光照強(qiáng)度為1000lx~3000lx，光照時(shí)長12h/d，培養(yǎng)溫度（25±1）℃2DB32/TXXXX—XXXX（資料性）基質(zhì)消毒方法B.1物理方法一般采用蒸汽消毒，即將基質(zhì)堆成圓錐狀，高度不超過1.5m，將多孔的管子平放并埋入基質(zhì)約40cm、80cm、120cm高處，表面嚴(yán)實(shí)地覆蓋塑料薄膜，然后從蒸汽鍋爐中放出200℃左右蒸汽，使基質(zhì)溫度上升70℃~90℃保持0.5h~lh即可。B.2化學(xué)方法五氯硝基苯消40%可濕性粉劑，按照1:(20~40)拌細(xì)土，然后將待消毒的基質(zhì)平鋪，厚度30cm~40cm，按10g/m2用量均勻撒在基質(zhì)上，然后再噴一次灌溉水，讓基質(zhì)濕潤，最后用塑料薄膜覆蓋，四周壓實(shí)，15d后掀膜即可。1DB32/TXXXX—XXXX常用細(xì)菌殺菌劑C.1常用細(xì)菌殺菌劑見表C.1。表C.1常用細(xì)菌殺菌劑名稱用法用量注意事項(xiàng)銅制劑類Cu(OH)2500倍～700倍液每7d噴施1次，連續(xù)施用2次～4次。無機(jī)銅類制劑。不可與強(qiáng)酸、強(qiáng)堿性農(nóng)藥及肥料混用。硫酸銅鈣600倍~800倍液噴霧。無機(jī)銅類制劑。可與大多數(shù)不含金屬離子的殺蟲劑混用。波爾多液硫酸銅:石灰:水＝1:2:200配制而成；配制容器宜選用木缸、塑料桶、瓦缸或水泥池，不可用鋁制、鐵制等金屬容器。無機(jī)銅類制劑。不宜儲存，通常是現(xiàn)配現(xiàn)用。噻菌銅500倍~700倍液在發(fā)病初期噴淋或者800倍液灌根，每7d~10d施用一次，共用3次~4次。有機(jī)銅類制劑。遇強(qiáng)堿分解，在酸性條件下穩(wěn)定。絡(luò)氨銅共噴施2次~3次。有機(jī)銅類制劑。不可與酸性藥劑混用。松脂酸銅600倍~1000倍液葉面噴施或灌根。一般每7d~10d噴一次。有機(jī)銅類制劑。不可與強(qiáng)堿性農(nóng)藥混用。喹啉銅50%可濕性粉劑800倍~1000倍液噴霧施用，每7d~10d施用一次。有機(jī)銅類制劑。不可與強(qiáng)酸、堿性及含其他金屬離子的農(nóng)藥混用。乙酸銅20%可濕性粉劑300倍~400倍液葉面噴施，每7d~10d施用一次。有機(jī)銅類制劑。不可與堿性農(nóng)藥混用2DB32/TXXXX—XXXX表C.1常用細(xì)菌殺菌劑（續(xù)）名稱用法用量注意事項(xiàng)有機(jī)鋅類噻唑鋅噴霧施用，每7d噴施一次，連續(xù)防治2次~3次為宜。注意二次稀釋噴霧。常見制劑有3種：20%懸浮劑、40%懸浮劑、60%水分散顆粒劑。根據(jù)產(chǎn)品說明書使用。福美鋅72％可濕性粉劑350倍~600倍液，每14d施用一次。每生長季最多用藥4次。用量160g~240g/667m2。不可與堿性農(nóng)藥混合使用。宜與作用機(jī)制不同的殺菌劑輪換使用，以延緩抗性產(chǎn)生。代森鋅80%可濕性粉劑500倍～800倍液噴霧施用，每7d~10d施用一次。其他劑型按產(chǎn)品說明施用。有60%、65%和80%可濕性粉劑和4%粉劑四種制劑。不可與氧化劑、酸類、堿類物質(zhì)一起存放。代森錳鋅80%可濕性粉劑400倍~700倍液噴施，連噴3次~5次。不可與堿性農(nóng)藥、化肥和含銅的農(nóng)藥混用?？股仡愭溍顾?2%可溶性粉劑4000倍～6000倍液，每7d~10d施用一次。不可與堿性農(nóng)藥混合施用。中生菌素一次，共施用3次~4次。不可與堿性農(nóng)藥混合施用。春雷霉素2%水劑50倍~100倍液灌根或500倍~600倍液噴施，7d~10d后第2次用藥，共用2次即可。不可與堿性農(nóng)藥混合施用。乙蒜素80%乳油1000倍~2000倍液噴施。廣譜