遺傳分析的一個(gè)基本原理是DNA的物理距離和遺傳距離方面...

1、7.28 春季 2001考試二1#姓名問(wèn)題1/30分問(wèn)題2/20分問(wèn)題3/25分問(wèn)題4125分總共/100分#問(wèn)題1. （30分）1A （6分）遺傳分析的一個(gè)基本原理是 DNA的物理距離和遺傳距離方面的距 離（舉例來(lái)說(shuō)，在一張遺傳圖譜上的距離）在整個(gè)的基因組上通常是成比例的。雖然 一些區(qū)域不尋常地表現(xiàn)出或高或低的重組頻率，基因組的所有區(qū)域都能夠參與同源重組?；谀銓?duì)同源重組機(jī)制的認(rèn)識(shí)，列出兩個(gè)能夠用來(lái)使所有的DNA序列都參與同源重組的過(guò)程的特點(diǎn)。并解釋你的答案。特點(diǎn)1: （3分）同源重組的其實(shí)是不依賴于DNA序列的。使一個(gè)雙鏈 DNA解鏈的可能性在整個(gè)DNA分子中都是一樣的。特點(diǎn)2: （3分）

2、修整DNA解鏈現(xiàn)象的元件是結(jié)構(gòu)專一性的，不依賴于序列。 RecBCD將轉(zhuǎn)載到任何一個(gè)松散的 DNA雙鏈的末端，RecA將轉(zhuǎn)載到任何一個(gè)單 鏈DNA區(qū)域。注意:過(guò)分強(qiáng)調(diào)Chi位點(diǎn)在這道題中并不正確。因?yàn)楫?dāng)你離開(kāi) Chi位點(diǎn)后，重組 頻率仍會(huì)改變。請(qǐng)閱讀以下實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，然后回答問(wèn)題。雖然重組頻率在整個(gè)染色體上是相當(dāng)一致的，針對(duì)特定的染色體區(qū)域的詳細(xì)分析表 明那一些區(qū)域存在著遠(yuǎn)高于一般的重組頻率 ，而其他區(qū)域重組頻率要低得多。你決 定在大腸桿菌中研究這種現(xiàn)象，以揭示負(fù)責(zé)這些“熱點(diǎn)”與“冷點(diǎn)”區(qū)域的分子機(jī) 制。實(shí)驗(yàn)步驟的設(shè)計(jì)如下所示。你通過(guò)進(jìn)行噬菌體調(diào)諧的轉(zhuǎn)導(dǎo)在染色體的 8個(gè)區(qū)域檢測(cè) 同源重組的頻率。受

3、體菌有多種營(yíng)養(yǎng)缺陷型標(biāo)記，意味著在8個(gè)區(qū)域中的每一個(gè)區(qū) 域，都有一個(gè)缺陷基因。供體菌則有這些缺陷基因的野生型等位基因。受體菌： his-, trp-, lac-, ara-, val-, leu-, thi-, ura- 供體菌：his+, trp+, lac+, ara+, val+, leu+, thi+, ura+轉(zhuǎn)導(dǎo)的噬菌體生長(zhǎng)在供體細(xì)胞上，噬菌體隨機(jī)地包裝供體細(xì)胞染色體基因組50kd區(qū)域。這些噬菌體再用來(lái)轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞，因此將供體細(xì)胞的染色體區(qū)域介導(dǎo)進(jìn)去。 如果在外來(lái) DNA和受體宿主細(xì)胞染色體之間的重組是成功的，那么，受體細(xì)胞將 獲得一個(gè)野生型的等位基因。下面是就每一個(gè)染色體定位上觀

4、察到的重組頻率表。表1野生型重組子的頻率:區(qū)域1His+0.2 %區(qū)域2Trp+0.2 %區(qū)域3Lac+0.02 %區(qū)域4Ara+0.2 %區(qū)域5Val+0.02 %區(qū)域6Leu+0.6 %區(qū)域7Thi+0.2 %區(qū)域8Ura+0.2 %為了探究重組頻率或高或低的機(jī)制，你決定更詳細(xì)地研究區(qū)域1,3,5,和6。為了做到這一點(diǎn)，你重復(fù)了相同類型的體內(nèi)重組分析。這一次與前面不同的是，受體菌在 以下位點(diǎn)還帶有一個(gè)突變：recB，recD 或ruvC。下面是反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一張表格。 在每一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，野生型重組的頻率（舉例來(lái)說(shuō) His+代表區(qū)域1）如表一所示。表2:野生型重組子的頻率:在受體菌中的突變r(jià)e

5、cBrecDruvC區(qū)域1<0.001%0.6%<0.001%區(qū)域3<0.001%0.12%<0.001%區(qū)域5<0.001%0.6%<0.001%區(qū)域6<0.001%0.6%<0.001%1B（4分）.基于這些發(fā)現(xiàn)，就表1中區(qū)域5觀察到的異常重組頻率，建議一 個(gè)可能的機(jī)制。列出你模型的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。（2分）相比于其他區(qū)域，區(qū)域 5有一個(gè)低數(shù)量的chi位點(diǎn)，或者比其它區(qū)域更 遠(yuǎn)離chi位點(diǎn)。（2分）實(shí)驗(yàn)證據(jù)如表2所示。在一個(gè)recD突變體中（不再對(duì)chi 位點(diǎn)產(chǎn)生應(yīng)答），重組頻率甚至與其他區(qū)域同樣的水平。1C（4分）.就表1區(qū)域6中所顯示的異常高的重

6、組頻率，給出一個(gè)可能的機(jī)制列出你模型的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。（2分）相比于其他區(qū)域，區(qū)域 6有一個(gè)高數(shù)量的chi位點(diǎn)。或者比其它區(qū)域更靠 近c(diǎn)hi位點(diǎn)。（2分）這方面的實(shí)驗(yàn)證據(jù)如表 2所示。在一個(gè)recD突變體中（不再 對(duì)chi位點(diǎn)產(chǎn)生應(yīng)答），重組頻率保持不變。1D（10分）為了更進(jìn)一步探究機(jī)制，你從區(qū)域5中分離了一個(gè)15 kb片段，從區(qū)域 6中分離了一個(gè)15 kb片段。使用純化的 RecBCD酶系統(tǒng)在體外混合這兩種 DNA 片段進(jìn)行反應(yīng)。請(qǐng)圖示 DNA底物（表上重要的特征）和 DNA產(chǎn)物，你的圖示應(yīng)該 大致成比例。沒(méi)有必要畫一塊膠，僅僅用一條線代表 DNA即可。如果最終RecBCD 酶系統(tǒng)產(chǎn)生的DNA產(chǎn)

7、物是RecA的適宜底物，請(qǐng)?jiān)佼嬕粡垐D，表明 RecA結(jié)合的位 置。完整的圖應(yīng)包含以下內(nèi)容：底物:15kb平端雙鏈DNA。指出5'和3'端。區(qū)域5或者很少有chi位點(diǎn)，或者Vai Marker 遠(yuǎn)離chi位點(diǎn)。區(qū)域 6或者含有較多的 chi位點(diǎn)，或者 Leu Marker 靠近c(diǎn)hi位點(diǎn)。產(chǎn)物：與上相同，但是一個(gè) 3單鏈尾巴將被 RecBCD產(chǎn)生。RecA應(yīng)該被加載到 這個(gè)單鏈區(qū)域。1E（6分）.完成對(duì)區(qū)域5和6的分析，你轉(zhuǎn)回研究區(qū)域 3。因?yàn)闊o(wú)法解釋在區(qū) 域3所觀察到的低的重組率，你和你的實(shí)驗(yàn)室伙伴討論， 看看他們是否有好的主意。 一個(gè)聰明人建議你，立即檢測(cè)受體菌中l(wèi)ac-突變

8、位點(diǎn)附近的基因組序列。假定測(cè)序是可行的，你認(rèn)為這是一個(gè)好主意。你的朋友建議你找的是什么序列特征呢？這個(gè) 序列特征對(duì)解釋你觀察到的重組頻率數(shù)據(jù)有什么貢獻(xiàn)呢？（3分） 你會(huì)尋找RuvC 致序列，因?yàn)檫@些位點(diǎn)將會(huì)阻止分支遷移通過(guò)Lac編碼區(qū)域，從而抑制那個(gè)區(qū)域的重組。（3分）RuvC 致位點(diǎn)應(yīng)該在 Lac編碼區(qū)域附近。注意:答案不能是chi位點(diǎn)一致序列。因?yàn)橄啾扔谄渌麉^(qū)域，recD突變體的重組 頻率仍然較低。問(wèn)題2（20分）你正在研究細(xì)菌獲得并保持抗生素抗性基因的機(jī)制。你手頭上正在研究的是一個(gè)對(duì)氨芐青霉素有高度抗性的菌株（被命名為728A），在含有氨芐青霉素的平板上能夠 100%地形成細(xì)菌菌落。知道

9、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子常常帶有抗生素抗性基因，你分析 728A菌株，發(fā)現(xiàn)它含有一個(gè) 質(zhì)粒。為了研究這個(gè)細(xì)胞保持質(zhì)粒的機(jī)制，你把這個(gè)菌株進(jìn)行突變，分離到一個(gè)變 異體（命名為728B），它丟失了氨芐青霉素抗性表型的頻率較高。當(dāng)728B的液體培養(yǎng)物被涂布在含有氨芐青霉素的平板上，僅僅10- 15%的細(xì)胞長(zhǎng)出菌落。為了調(diào)查728B氨芐青霉素抗性質(zhì)粒遺傳性下降的原因，你從 728A和728B細(xì)胞培 養(yǎng)物中純化出質(zhì)粒 DNA，在瓊脂糖凝膠中分析 DNA。凝膠分析分別在用 EcoRI處 理DNA之前和之后進(jìn)行，EcoRI在DNA上僅僅有一個(gè)酶切位點(diǎn)。728 A728BEcoRI:1 1-+111 1-+11Aitid

10、Rolasmid a el2A （4分）.基于這一項(xiàng)分析,728 B 細(xì)胞在氨芐青霉素抗性平板上抗性效果下降的 合理的解釋是什么？如果質(zhì)粒在復(fù)制后經(jīng)歷了同源重組，它們形成多聚體，那么可以通過(guò)位點(diǎn)專一性 重組被分離。如果它們沒(méi)被分開(kāi)，那么，當(dāng)細(xì)胞分離后，僅有一個(gè)子細(xì)胞接受含 有氨芐青霉素抗性基因的質(zhì)粒。從728B中分離的質(zhì)粒存在單體、二聚體、三聚體和四聚體形式的話，當(dāng)用EcoRI作用時(shí)，因?yàn)樗诿總€(gè)質(zhì)粒上僅有一個(gè)切點(diǎn)，它們?nèi)慷紤?yīng)該呈現(xiàn)出相同大小的一條電泳帶。因此這個(gè)現(xiàn)象的原因應(yīng)該是重組酶有突變或者是它識(shí)別的位點(diǎn)有突變。注意雖然一個(gè)復(fù)制的轉(zhuǎn)座子會(huì)形成cointegrant ,它比最初的質(zhì)粒大,因

11、為復(fù)制的轉(zhuǎn)座子增加了額外的長(zhǎng)度，它不會(huì)切回原來(lái)的大小。2B （6分）進(jìn)一步的分析728 B細(xì)胞表明突變導(dǎo)致質(zhì)粒DNA的遺傳性大大降低。 而且，這個(gè)基因編碼一個(gè)反式作用元件 。簡(jiǎn)要描述一個(gè)或兩個(gè)支持這個(gè)結(jié)論的實(shí)驗(yàn) 證據(jù)。在這里，雖然有許多可能的實(shí)驗(yàn)，你必須檢測(cè)質(zhì)粒的遺傳性，而不能單單檢測(cè)啟 動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄。例如，用從野生型 728A中提取得到的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 728B細(xì)胞，用另一個(gè)標(biāo)記物, 比如卡那霉素抗性基因。如果突變?cè)谫|(zhì)粒上(順式元件)，那么這個(gè)新的質(zhì)粒將 被保留，細(xì)胞將表現(xiàn)出對(duì)卡那霉素的抗性。如果它編碼一個(gè)反式作用元件，細(xì)胞 將對(duì)氨芐青霉素表現(xiàn)抗性?；蛘咧v出質(zhì)粒上的突變，你可以用從728B從提取的突

12、變質(zhì)粒去轉(zhuǎn)化野生型的菌株，這個(gè)質(zhì)粒的保留性差。你還得再提出一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案來(lái)證明它是一個(gè)反式作用元 件。2C(6分)假定試驗(yàn)結(jié)果如PartA和PartB中所示，你提出一個(gè)假設(shè)，有關(guān)于在728B 細(xì)胞中突變的蛋白的類型。你決定使用一個(gè)生物化學(xué)方法分離純化這個(gè)野生型的蛋 白質(zhì)。請(qǐng)描述:(1) 純化蛋白后你所使用的分析方法；(2) 你會(huì)使用什么細(xì)胞作為原材料；(3) 假定你有任何進(jìn)行分析所需的小分子量輔助因子。分析：把從728 B細(xì)胞中分離的質(zhì)粒和細(xì)胞提取物混合在一起進(jìn)行反應(yīng)，然后檢測(cè)是否存在大分子聚合物(大分子量的條帶)，請(qǐng)注意生化方法本身并不是你說(shuō) 應(yīng)指出的全部分析內(nèi)容。你還需要指出一個(gè)分析的方法，

13、在該分析方法中，突變 細(xì)胞的提取物不能表現(xiàn)出相應(yīng)的功能，而野生型蛋白質(zhì)則可以。最初的材料：728A細(xì)胞提取物，從中提取野生型蛋白質(zhì)。輔助因子：如果你針對(duì)的是重組酶，并不需要什么輔助因子。2D（4分）在你進(jìn)行蛋白質(zhì)純化時(shí)，你回過(guò)頭運(yùn)用遺傳學(xué)方法來(lái)解釋質(zhì)粒保留的機(jī)制。因此，你決心試一試，看看是否能分離到一個(gè)突變，它能夠抑制728B的表型為了大大目的，你開(kāi)始培養(yǎng)728B細(xì)胞，突變這些細(xì)胞，并篩選突變，看看它是否能夠在含有氨芐青霉素的平板上100%的表現(xiàn)抗性。你成功地篩選到一個(gè)這樣的菌株，并把它命名為728C。這一次，這個(gè)突變是位于細(xì)胞的染色體上，而非質(zhì)粒上。試推測(cè)出位于728C細(xì)胞中一個(gè)細(xì)胞染色體上

14、的基因， 它能夠?qū)е逻@種現(xiàn)象的出現(xiàn)。 并請(qǐng)予以解釋。涉及到同源重組的一個(gè)基因，比如RecA/B/C/D。質(zhì)粒的多聚體化是通過(guò)質(zhì)粒間的同源重組現(xiàn)象引起的。如果你的假定是正確的，你還期望728C細(xì)胞表現(xiàn)出什么其他表型?728C細(xì)胞將對(duì)引起雙鏈解鏈的因素敏感，比如X-射線。問(wèn)題3（25分）你正在研究一個(gè)對(duì)老鼠生理節(jié)奏控制十分關(guān)鍵的基因，稱作Earlyto Bed （簡(jiǎn)稱ETB）。使用啟動(dòng)子突變定位和突變啟動(dòng)之體內(nèi)分析技術(shù)，你已經(jīng)鑒 定出兩個(gè)關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄激活子的結(jié)合位點(diǎn)，這兩個(gè)因子誘導(dǎo)老鼠睡眠。你把這兩個(gè)因 子叫作SNZ1禾口 SNZ2。你純化并克隆了 SNZ1和SNZ2，來(lái)鑒定它們是否刺激轉(zhuǎn)錄。使用g

15、el shift assay（凝膠印跡技術(shù)），它們每一個(gè)都可以獨(dú)立結(jié)合到EBT啟動(dòng)子上，對(duì)另一個(gè)結(jié)合啟動(dòng)子沒(méi)什么效應(yīng)。你首先檢測(cè)了它們的體外轉(zhuǎn)錄激活活性，通過(guò)把純化的激活因子加入 到含有EBT啟動(dòng)子的質(zhì)粒、純化的 RNA聚合酶II，以及其他輔助因子（TFIIA ， TFIIB ，TFIID ，TFIIE ，TFIIF禾口 TFIIH）的反應(yīng)體系中。你得到的結(jié)果如下所示：激活劑體外轉(zhuǎn)錄單位沒(méi)有SNZ1SNZ2SNZ1+SNZ2200050 UU50 U2000 U3A（6分）建議兩個(gè)機(jī)制，針對(duì) SNZ2的體內(nèi)作用效應(yīng)，來(lái)解釋 SN2在體外分析中 沒(méi)有表現(xiàn)出的對(duì)轉(zhuǎn)錄的激活。 假定你所使用的純化的

16、SN2是正確折疊的，能夠結(jié)合 到DNA上，能夠正常行駛生物功能的。i）與 ii）有許多可能的答案。它們都涉及到一些條件，這些條件在體外實(shí)驗(yàn)中不完全具備， 但在體內(nèi)作用時(shí)卻是有的，比如一個(gè)輔因子，像Ca+，個(gè)修飾，像磷酸化修飾，或者使SN2恢復(fù)活性所需的蛋白質(zhì)激活劑。我們?cè)谶@里尋找的真正答案是關(guān)于核染色質(zhì)的。在體內(nèi)，染色質(zhì)對(duì)真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄 是起到抑制的作用的。在體外實(shí)驗(yàn)中，質(zhì)粒DNA上沒(méi)有染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。SN2作為一個(gè)組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶，或是一個(gè)染色質(zhì)改構(gòu)因子而激活轉(zhuǎn)錄的。3B（3分）為了進(jìn)一步闡述SNZ2為什么在體外實(shí)驗(yàn)中不表現(xiàn)激活效應(yīng)，你決定 定位SN2激活結(jié)構(gòu)域。描述一個(gè)實(shí)驗(yàn)方法，用來(lái)達(dá)到這個(gè)實(shí)驗(yàn)

17、目標(biāo)。為了定位一個(gè)活性結(jié)構(gòu)域，把一個(gè) DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域比如 LexA融合到SN2 上，以及做一系列的 SN2刪除突變體?；?LexA及報(bào)告基因LacZ，檢測(cè)這些 刪除突變體在體內(nèi)對(duì)啟動(dòng)子的效應(yīng)?？梢灶A(yù)計(jì)，發(fā)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)錄激活是必需的區(qū)域后，你可以一個(gè)一個(gè)地檢測(cè)以確定這些區(qū)域（對(duì)轉(zhuǎn)錄激活）是否是充分需要的。你最初檢測(cè)了一個(gè)啟動(dòng)子，它沒(méi)有 SN2結(jié)合結(jié)構(gòu)位點(diǎn)，但是你發(fā)現(xiàn)，在EBT的啟動(dòng)子上需要有 SN2的結(jié)合位點(diǎn)，以及 SN2DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，才能觀察到轉(zhuǎn)錄 激活。3C（5分）在這些條件下，你如何繼續(xù)進(jìn)行針對(duì)SN2激活結(jié)構(gòu)域的分析？請(qǐng)描述激活結(jié)構(gòu)與定位實(shí)驗(yàn)存在的局限性。理想情況下，做凝膠轉(zhuǎn)印實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)

18、 SN2的哪一個(gè)區(qū)域?qū)Y(jié)合 DNA是必需 的?；趲в蠸N2結(jié)合結(jié)構(gòu)位點(diǎn)和報(bào)告基因的測(cè)試啟動(dòng)子，檢測(cè) SN2刪除突變 對(duì)轉(zhuǎn)錄激活的效應(yīng)。這些實(shí)驗(yàn)可能會(huì)讓你檢測(cè)到 SN2上激活必需區(qū)域，而非DNA 結(jié)合區(qū)域。但是不太可能讓你檢測(cè)到對(duì)激活來(lái)說(shuō)是完全充分的區(qū)域。3D（3分）.使用你在3A部分中設(shè)計(jì)的兩個(gè)模型中的一個(gè)，你如何解釋SN2DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)ζ潴w內(nèi)轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)的重要性？如果SN2重新恢復(fù)染色質(zhì)改構(gòu)分子或 HAT功能，它結(jié)合核小體 DNA的能力是 非常重要的。大多數(shù) DNA結(jié)合蛋白，比如LexA，做不到這一點(diǎn)。有必要解釋一下為什么簡(jiǎn)單地使用其他蛋白質(zhì)恢復(fù)針對(duì)啟動(dòng)子的激活功能，比如LexA，卻不

19、奏效。例如，SN2在其結(jié)合位點(diǎn)可以和其它因子結(jié)合并協(xié)同作用， 以激活轉(zhuǎn)錄。3E（8分）你如何修正最初的體外轉(zhuǎn)錄分析實(shí)驗(yàn)，以觀察SN2的效應(yīng)？描述檢測(cè)轉(zhuǎn)錄必需的所有元件以及分析方法。-使質(zhì)粒DNA核小體化。（并不包括在體外如何進(jìn)行操作）-加入染色質(zhì)改構(gòu)因子和 ATP，或者HAT。-通過(guò)轉(zhuǎn)膜印跡或凝膠電泳，監(jiān)測(cè)整合入放射性標(biāo)記的 UTP，分析轉(zhuǎn)錄情況。（注 意在這里所提問(wèn)的問(wèn)題是你如何檢測(cè)轉(zhuǎn)錄，而不是你如何監(jiān)測(cè)染色質(zhì)是否被改 構(gòu)）使用其它模型進(jìn)行分析也是可取的，只要過(guò)程完整，包括進(jìn)去上面A部分體外轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)中所缺少的元件。問(wèn)題4（25分）你最近參加了 Ann Hochchild's的實(shí)驗(yàn)室，

20、想繼續(xù)將所了解的 Simon Dove的試驗(yàn)工作做下去。你特別想了解啟動(dòng)子和蛋白質(zhì)在體外的功能。你制備了一些質(zhì)粒 DNA，這些質(zhì)粒DNA有的具有野生型Prm，有的質(zhì)粒DNA 的Prm有在作業(yè)中提到的額外-35個(gè)堿基。在有或沒(méi)有 a-s70嵌合蛋白的情況下， 檢測(cè)lcI的Sa109強(qiáng)激活類型在刺激轉(zhuǎn)錄方面的活性?；谝粋€(gè)簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)膜印跡結(jié) 合實(shí)驗(yàn)，你得到如下試驗(yàn)結(jié)果：#lcI蛋白質(zhì)RNAP轉(zhuǎn)錄（每秒鐘計(jì)數(shù)）野生型Prm附加的-35Prm1沒(méi)有WT25 CPS25 CPS2lcI(Sa109)WT250 CPS25 CPS3lcI(Sa109)70 a-s25 CPS100 CPS你觀察到，含有RN

21、AP和35PRM的lcI（Sa109）誘導(dǎo)效應(yīng)很差（第3號(hào)實(shí)驗(yàn)），你對(duì)其感到很好奇。你想檢測(cè)一下，在兩個(gè)激活組合中的最初階段什么步驟被激活 了？（含有野生型 Prm的第2號(hào)實(shí)驗(yàn)和含有-35Prm第3號(hào)）4A（4分）描述一下你如何檢測(cè)在起始階段，當(dāng)加入lcl（Sa109）激活因子后，什么步驟被激活。（1分）為了檢測(cè)起始過(guò)程的哪一步被提高，你必須在存在或不存在激活劑時(shí)， LcI（Sa109），對(duì)下列每一種條件下進(jìn)行分析：（1分）為了分析帶有野生型或嵌合型RNAP及相應(yīng)啟動(dòng)子的關(guān)閉態(tài)復(fù)合體，進(jìn)行一個(gè)凝膠轉(zhuǎn)印或DnaseI保護(hù)分析。（1分）為了分析帶有野生型或嵌合型RNAP及相應(yīng)啟動(dòng)子的開(kāi)放態(tài)復(fù)合體，

22、進(jìn)行一個(gè) DNA Unwinding 分析。（1分）為了分析三重復(fù)合體構(gòu)成/啟動(dòng)子清除，使用放射性標(biāo)記的核酸進(jìn)行一個(gè)標(biāo) 準(zhǔn)的 Incorporation 分析。4B（6分）畫出你期待的結(jié)果，如果lcl（Sa109）蛋白質(zhì)激活了帶有野生型 RNAP 和PRm的開(kāi)放態(tài)復(fù)合體以及帶有嵌合型 RNAP和修飾的Prm的關(guān)閉態(tài)復(fù)合體（你只 需畫出發(fā)生激活現(xiàn)象時(shí)的分析結(jié)果圖就行了）野生型RNAP和PRm嵌合型 RNAP/修飾的PrmlcI(SalO9) + WT RNAP +-+ lcI(SalO9)-+ Chimeric RNAPRadiolabelled modified Prm12#RNAP和修飾的P

23、rm），incorporation 分析，但在你不感到驚訝的是關(guān)閉態(tài)復(fù)合體的激活情況（帶有嵌合型 但是你想研究一下，激活水平較低的原因。你進(jìn)行了一個(gè) 變性凝膠上分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。你獲得了如下的分析結(jié)果：RNA 卩 WT <xo7()Promoter WT Prm 2X -35 PrmXcl( Sal 09)+1500 bases600 bases300 bases20 bases3000 bases1234C(6分).建議一個(gè)存在嵌合型 RNAP和修飾過(guò)的PRM的情況下lcl(Sa109)激 活機(jī)制，解釋在第三道和第四道中觀察到的，弱轉(zhuǎn)錄對(duì)應(yīng)的較強(qiáng)的放射性感光效應(yīng) 和全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的較弱的放射性感光現(xiàn)象