DB21-T 4039-2024 花生種質(zhì)耐寒性鑒定技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSB0521IDB21/T4039—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)。本文件主要起草人：于海秋、張鶴、趙新華、王曉光、康樹立、蔣春姬、劉喜波、趙姝麗、王婧、鐘超、高士博。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實際情況依法進(jìn)行評估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號聯(lián)系電話文件起草單位通訊地址：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)（沈陽市沈河區(qū)東陵路120號聯(lián)系電話1DB21/T4039—2024花生種質(zhì)耐寒性鑒定技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了花生種質(zhì)萌發(fā)期和苗期耐寒性的評價方法和指標(biāo)。本文件適用于花生種質(zhì)耐寒性的鑒定和評價。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程發(fā)芽試驗GB4407.2經(jīng)濟(jì)作物種子第2部分：油料類NY/T855花生產(chǎn)地環(huán)境技術(shù)條件3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4萌發(fā)期耐寒性鑒定4.1樣品準(zhǔn)備選取籽粒飽滿、大小一致的種子樣品600粒，充分混合均勻，用1%的次氯酸鈉溶液浸泡消毒10min，自來水沖洗3次，去離子水沖洗3次。種子質(zhì)量應(yīng)符合GB4407.2的規(guī)定。4.2試驗設(shè)計采取樣品變溫培養(yǎng)的方式。將待測樣品于25℃條件下浸種12h后，均勻擺放至鋪有雙層濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，置于人工氣候箱內(nèi)，進(jìn)行紙間（BP）發(fā)芽試驗。低溫處理組于6℃條件下黑暗培養(yǎng)7d后，轉(zhuǎn)入28℃條件下恢復(fù)7d；對照組一直于28℃條件下黑暗培養(yǎng)。每個處理組3次重復(fù)，每次重復(fù)100粒種子。4.3樣品培養(yǎng)溫度處理同本文件4.2的規(guī)定，其他條件按照GB/T3543.4規(guī)定執(zhí)行。4.4指標(biāo)測定以露白（胚根伸出0.5mm）為標(biāo)準(zhǔn)，自第1粒種子發(fā)芽開始，逐日調(diào)查種子的發(fā)芽數(shù)，至連續(xù)3d沒有新增發(fā)芽種子數(shù)為止，計算如下種子活力指標(biāo)：發(fā)芽勢（Gp）＝G4／n×100%，其中G4為第4d發(fā)芽種子數(shù)，n為供試種子數(shù)發(fā)芽率（Gr）＝G10／n×100%，其中G10為第10d發(fā)芽種子數(shù)，n為供試種子數(shù)發(fā)芽指數(shù)（Gi）=ΣGt/Dt，其中Gt為時間t內(nèi)的發(fā)芽數(shù)，Dt為相應(yīng)的發(fā)芽天數(shù)，∑為總和活力指數(shù)（ViS×Gi，其中S為發(fā)芽結(jié)束后10粒發(fā)芽種子的平均胚根長度（mm）2DB21/T4039—20244.5耐寒性評價4.5.1性狀相對值計算為了消除不同種質(zhì)之間基礎(chǔ)性狀的差異，采用性狀的相對值對各種質(zhì)的耐寒性進(jìn)行評價，計算方法見公式（1）。式中：xi—第i個性狀的相對值xi—低溫處理組第i個性狀的測定值ci—對照組第i個性狀的測定值4.5.2隸屬函數(shù)值計算按照公式（2）和（3），計算各性狀的隸屬函數(shù)值。μxi=(xi?x?in)/(x?ax?x?in)（與耐寒性呈正相關(guān)的性狀） μxi=1?(xi?x?in)/(x?ax?x?in)（與耐寒性呈負(fù)相關(guān)的性狀） 式中：μ(xi)—第i個性狀的隸屬函數(shù)值x?in—第i個性狀的最小值x?ax—第i個性狀的最大值4.5.3加權(quán)隸屬函數(shù)值計算xi?wi(5)式中：wi—第i個性狀的權(quán)重系數(shù)pi—第i個性狀的貢獻(xiàn)率D—加權(quán)隸屬函數(shù)值4.5.4評價指標(biāo)當(dāng)D值≥0.75，為萌發(fā)期耐寒種質(zhì)；D值≤0.35，為萌發(fā)期寒敏感種質(zhì)。5苗期耐寒性鑒定5.1幼苗期5.1.1樣品準(zhǔn)備選取種子樣品300粒，其他要求同本文件4.1的規(guī)定。5.1.2幼苗培養(yǎng)3DB21/T4039—2024將待測種子樣品在25℃條件下浸種12h，選取高16cm×底面直徑14cm的塑料盆缽20盆，裝等量蛭石后，每盆均勻播種5粒，置于人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度28℃/23℃（晝/夜）、光周期16h/8h5.1.3試驗設(shè)計采取變溫處理的方式。盆栽樣品幼苗生長至3葉1心時，分成對照組和低溫處理組，每組10盆，每盆保留3株。對照組繼續(xù)在人工氣候箱內(nèi)正常培養(yǎng)7d，低溫處理組置于培養(yǎng)條件為：溫度6℃/6℃（晝/夜）、光周期16h/8h（晝/夜）、光照強(qiáng)度400μmol·m-2·s-1～600μmol·m-2·s-1、相對濕度60%～70%的氣候箱內(nèi)培養(yǎng)7d。設(shè)3次重復(fù)。5.1.4性狀調(diào)查培養(yǎng)7d后，選取對照組和低溫處理組長勢一致的幼苗各5株，連根從蛭石中取出，用自來水沖洗干凈，吸干表面水分，要保持根部潮濕，測定株高、葉面積、地上部鮮重、地下部鮮重、地上部干重和地下部干重。5.1.5耐寒性評價5.1.5.1評價方法按照公式（6），采用主成分分析法，建立綜合指標(biāo)方程，計算主成分綜合得分。?I=ΣEQ\*jc3\*hps14\o\al(\s\up6(n),i)=1Bi×pi(i=1,2,3,?,n)按照公式（6），采用主成分分析法，建立綜合指標(biāo)方程，計算主成分綜合得分。式中：Bi—第i個性狀相對值的標(biāo)準(zhǔn)化處理pi—第i個性狀的貢獻(xiàn)率?I—主成分綜合得分5.1.5.2評價指標(biāo)當(dāng)?I值≥1.0，為幼苗期耐寒種質(zhì)；?I值≤-1.0，為幼苗期寒敏感種質(zhì)。5.2出苗期5.2.1樣品準(zhǔn)備選取帶殼種子。播種前10d～15d，選擇晴朗無風(fēng)天氣曬種2d～3d后，可采用人工或機(jī)械脫殼，挑選籽粒飽滿、大小一致的籽仁作種。種子質(zhì)量應(yīng)符合GB4407.2的規(guī)定。5.2.2地塊選擇選擇砂壤或輕砂壤土質(zhì)、肥力中等以上、2年內(nèi)未種過花生或其他豆科作物、無檢疫性有害生物的地塊。產(chǎn)地環(huán)境應(yīng)符合NY/T855的規(guī)定。5.2.3試驗設(shè)計采取分期播種的方式。處理組于耕層5cm處地溫連續(xù)3d穩(wěn)定在4℃以上時單粒播種，對照組于耕層5cm處地溫連續(xù)3d穩(wěn)定在15℃以上時單粒播種。田間其他管理措施與當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)管理相同。5.2.4田間調(diào)查4DB21/T4039—2024自播種之日起，每日調(diào)查各樣品的出苗數(shù)，至全部樣品連續(xù)3d不再出苗為止，調(diào)查出苗率和出苗能出苗率（EREn/n×100%，其中En為出苗數(shù)，n為供試樣品種子數(shù)出苗能力（EA）＝ER/Di×100%，其中Di為從播種到第i天出苗的相應(yīng)天數(shù)5.2.5耐寒性評價5.2.5.1評價方法根據(jù)出苗率和出苗能力，計算相對出苗率和相對出苗能力：相對出苗率（RERER試驗組/ER對照組×100%相對出苗能力（REA）＝EA試驗組/EA對照組×100%5.2.5.2評價指標(biāo)當(dāng)RER值≥80%，且REA值≥3，為出苗期耐寒種質(zhì)；RER值≤30%，且REA值≤1，為出苗期寒敏感種質(zhì)。6耐寒性綜合評價6.1評價方法按照公式（7）和（8），采用多重表型分析法，對萌發(fā)期和苗期耐寒性鑒定結(jié)果進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，作為耐寒性綜合評價的標(biāo)準(zhǔn)。式中：S—標(biāo)準(zhǔn)化值Si—某種質(zhì)萌發(fā)期或苗期耐寒性