DB32T 4368-2022 飼料中玉米赤霉烯酮的測(cè)定 時(shí)間分辨熒光免疫層析定量法　　

32DeterminationofzearalenoneinfeedsTimeresolvedfluorescenceimmunochromatographyquan 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位：江蘇省家禽科學(xué)研究所、上海雄圖生物科技有本文件主要起草人：施壽榮、汪勁能、張鵬飛、肖蘊(yùn)祺、胡艷、邵丹、沈一茹、張珊、王飼料中玉米赤霉烯酮的測(cè)定時(shí)間分辨熒光免疫層析定量法本文件規(guī)定了飼料中玉米赤霉烯酮測(cè)定的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、樣品制備、樣品前處本文件適用于飼料原料、濃縮飼料、配合飼料、精下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格時(shí)間分辨熒光微球timeresolvedfluoresce形狀為球形，直徑在幾納米至幾十微米之間，微球表面或內(nèi)部負(fù)載有熒光物質(zhì)，在受到一定的能量激發(fā)時(shí)能夠發(fā)出熒光的微粒，比普通熒光半衰期長(zhǎng)。微球表面修飾有合適密度的羧基或其它功能基團(tuán)，用于與蛋白或抗體的共價(jià)偶聯(lián)；微球所包理的鑭系稀土元素經(jīng)過(guò)了鰲合，無(wú)需解離增強(qiáng)步驟。用時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記抗原或抗體制作層析試紙條，根據(jù)時(shí)間分辨熒光微球的發(fā)光特點(diǎn)，用時(shí)間分辨技術(shù)測(cè)量熒光，同時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)和時(shí)間兩個(gè)參數(shù)進(jìn)行信號(hào)分辨的方法，可有效地排除非特異性熒試樣中玉米赤霉烯酮與時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合后，抑制了層析過(guò)程中標(biāo)記抗體2標(biāo)記物濃度與樣品中玉米赤霉烯酮的濃度無(wú)關(guān)。層析結(jié)束后，通過(guò)儀器檢測(cè)計(jì)算試紙條T線(xiàn)和C線(xiàn)的時(shí)間分辨熒光強(qiáng)度比值和設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行準(zhǔn)確定量分析。5試劑和材料混勻，用于樣品上清的稀釋。C線(xiàn)圖1玉米赤霉烯酮時(shí)間分辨熒光免疫層析定量試紙條結(jié)構(gòu)示意圖6.2渦旋振蕩器：0r/min～2500讀取試紙條的熒光信號(hào)并自動(dòng)計(jì)算定量的檢測(cè)渦旋振蕩器（6.2）振蕩提取5min，用離心機(jī)（6.3）4000r/mi），），9標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制定），9.2分別吸取玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.13）0.000mL、0.004mL、0.010mL、0.020mL、0.060mL、0.120mL、0.200mL、0.300別相當(dāng)于0ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、1000ng/mL、1500行檢測(cè)（10）。儀器軟件可根據(jù)T線(xiàn)信號(hào)值與C線(xiàn)信號(hào)值的比值（T/C）和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度的自然對(duì)9.4同批次試紙條只需建立一次標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，將建立好的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)與項(xiàng)目信息存儲(chǔ)于ID卡中，便于樣10.3從鋁箔袋中取出玉米赤霉烯酮熒光免疫定量檢測(cè)試紙條（5.15），水平放置于干式恒溫孵育器10.5孵育結(jié)束后將試紙條（5.15）插入熒光免疫定量分析儀（6樣品中玉米赤霉烯酮含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)X計(jì)，數(shù)值以微克每千克(μg/kg）表示