44標準-辣椒抗疫病田間鑒定技術規(guī)程

Q/LB.□XXXXX-XXXX目次TOC\o"1-1"\h\t"標準文件_一級條標題,2,標準文件_附錄一級條標題,2,"前言 II1范圍 12 規(guī)范性引用文件 13 術語和定義 14 病原菌接種體的制備 15 抗病性鑒定圃設置 26 接種 27 病情調查 38 抗性評價 39 鑒定記載表 4附錄A（資料性）辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici） 5附錄B（資料性）辣椒抗疫病田間鑒定結果記載表 6前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替DB14/T1353—2024《辣椒抗疫病田間鑒定技術規(guī)程》，與DB14/T1353—2017相比，除結構調整和編輯性改動外，主要技術變化如下：——修訂了“抗病性田間鑒定”的定義（見3.2）——更改了“保存病原菌”中內容（見4.3.2）——合并“5.2試驗設計”與“5.3種植要求”，并修改相關內容（見5.2）——更改了“接種后的管理”中內容（見6.3）——合并“7.1調查時間”與“7.2調查方法”，并修改相關內容（見7.1）本文件由山西省農業(yè)農村廳提出、組織實施和監(jiān)督檢查。本文件由山西省市場監(jiān)督管理局對標準的組織實施情況進行監(jiān)督檢查。本文件由山西省農業(yè)標準化技術委員會（SXS/TC19）歸口。本文件起草單位：山西農業(yè)大學。本文件主要起草人：周建波、殷輝、趙曉軍、呂紅、秦楠、牛國飛、原宗英。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：——2017年首次發(fā)布為DB14/T1353—2017；——本次為第一次修訂。辣椒抗疫病田間鑒定技術規(guī)程范圍本文件規(guī)定了辣椒抗疫病田間鑒定的術語和定義、病原菌接種體制備、抗病性鑒定圃設置、接種、病情調查、抗病性評價及鑒定記錄表。本文件適用于各種辣椒資源對疫病抗性的田間鑒定及評價。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2060.1-2011辣椒抗病性鑒定技術規(guī)程第1部分：辣椒抗疫病鑒定技術規(guī)程術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1辣椒疫病由辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici）所引起的一種卵菌病害，主要危害葉片、莖桿及果實，莖基部、莖節(jié)分叉處最容易發(fā)病。受危害植株根部呈褐色，后期整個辣椒植株枯死；在近地面以及莖節(jié)分叉處莖桿最容易受危害，初期呈水漬狀、暗綠色病斑，病斑擴展繞莖一周后，病莖部縊縮、黑褐色，病部以上莖葉枯萎，最后整株死亡。3.2抗病性田間鑒定自然條件下，將病原菌孢子或者菌絲接種到田間特定生育期的植物特定部位上，一定時間后依據植株病情進行抗病性評價。3.3菌餅從菌落邊緣用打孔器打取的帶有菌絲的菌塊。病原菌接種體的制備4.1病原菌分離4.1.1培養(yǎng)基的制備V8培養(yǎng)基：V8蔬菜汁100mL，碳酸鈣0.2g，瓊脂粉15g，用蒸餾水定容至1000mL，121℃高壓濕熱滅菌20min。燕麥培養(yǎng)基：將燕麥片30g用蒸餾水煮沸60min，加瓊脂粉15g，雙層紗布過濾，用蒸餾水定容至1000mL，121℃高壓濕熱滅菌20min。4.1.2主要儀器及設備光學顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺。4.1.3分離病原菌采集發(fā)病植株葉片、莖基部及病果的典型病斑。從病斑邊緣病健交界處剪取約0.5cm×0.5cm大小的病組織，用75%乙醇消毒90s，然后用無菌水沖洗3次，用滅菌濾紙將水吸干，置于V8培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4.2病原菌的純化和鑒定將辣椒疫霉（Phytophthoracapsici）培養(yǎng)2d后，從菌落邊緣挑取挑取單菌絲接種至V8培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)5d。辣椒疫霉菌形態(tài)學特征鑒定方法參見附錄A。4.3病原菌的擴繁和保存4.3.1擴繁病原菌在接種前10d繁殖辣椒疫霉菌，選取已保存的菌種接于90mm含燕麥培養(yǎng)基的常規(guī)玻璃培養(yǎng)皿中，25℃培養(yǎng)黑暗7d。在菌落邊緣處用5mm滅菌打孔器打菌餅備用。4.3.2保存病原菌制作1.5mL離心管燕麥培養(yǎng)基小斜面，將待保存菌株接種至斜面，25℃培養(yǎng)待菌絲長滿斜面后，將離心管放置4℃~8℃保存。抗病性鑒定圃設置鑒定圃的選擇鑒定圃一般選擇在辣椒疫病常發(fā)田塊，且具備良好的自然發(fā)病環(huán)境。種植要求鑒定材料小區(qū)隨機排列，設置1組已知抗病和感病，對照材料選取PI201234辣椒品系為抗病對照品種、茄門辣椒為感病對照品種，每份鑒定材料重復3次。鑒定材料的育苗時間和移栽時間與大田生產時間相同或做適當調整，使植株接種期和發(fā)病期能夠與適宜的氣候條件相遇。鑒定小區(qū)面積15m2~20m2、行距40cm，株距35cm~40cm。土壤肥力水平和耕作管理與大田生產相同。接種接種時期接種時期為第6片真葉展平期。接種方法在辣椒植株的分枝處，用滅菌刀片將其頂部切掉，取4.1.6中制備的辣椒疫霉菌菌餅帶菌絲的一面貼在切口面處，用無菌濕棉球包裹接菌部位保濕，再用塑料薄膜包扎。接種后的管理接種后澆1次水并在接種24h后除去接種口處的包扎塑料薄膜。病情調查調查時間和方法在接種后7d~14d進行鑒定辣椒植株病情調查，調查各小區(qū)中的所有植株。方法為用直尺測量每份鑒定材料接種后病斑長度并記錄。依據辣椒疫病嚴重度分級標準，記載每份鑒定材料的嚴重度級別、參見附錄B，并計算每份鑒定材料的病情指數（DI）。病情指數按式（1）計算： (SEQ標準自動公式\*ARABIC1)式中：DI——病情指數；NI——各級發(fā)病株數；I——相對應的嚴重度級數值；M——調查總株數。病情分級辣椒疫病嚴重度分級及其相對應的癥狀描述見表1。辣椒疫病嚴重度分級級別病斑長度（cm）0接菌部位莖部變褐，病斑長度≤1cm，未越過植株分支點1接菌部位變褐，1cm＜病斑長度≤3cm，植株葉片不萎蔫或可恢復性萎蔫3接菌部位變褐，3cm＜病斑長度≤5cm，葉片不可恢復性萎蔫5接部位變褐或變黑，5cm＜病斑長度≤7cm，葉片不可恢復性萎蔫，上部葉片壞死7接菌部位變黑，7cm＜病斑長度≤10cm，整株萎蔫9接菌部位變黑，10cm＜病斑長度，整株枯死抗性評價鑒定有效性判別當感病對照材料達到其相應感病程度（DI>50），該批次抗疫病鑒定視為有效?？共⌒苑旨壏椒ㄒ罁b定材料3次重復的病情指數（DI）平均值確定其抗性水平，劃分標準見表2。辣椒對疫病抗性的評價標準病情指數（DI）抗性類型0＜DI≤10高抗（HR）10＜DI≤30抗?。≧）30＜DI≤50中抗（MR）50＜DI≤70感?。⊿）70＜DI高感（HS）8.3重復鑒定鑒定材料抗性初次鑒定為高抗、抗病、中抗，次年進行重復鑒定?？剐栽u價結果分析依據重復抗性鑒定結果對鑒定材料進行抗病性評價，抗性以記載的最高病情指數為準。鑒定記載表辣椒抗病性田間鑒定結果記載表參見附錄B。

（資料性）

辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici）在V8培養(yǎng)基上，典型菌株呈放射狀生長，菌絲絲狀、無隔膜，寬3.75μm~6.25μm；孢囊梗無色，絲狀；孢子囊頂生，近球形，單孢，卵圓形，大小28.01μm~59.00μm×24.80μm~43.50μm，有1~3個乳突，可脫落，每個孢子囊可以釋放7~40個游動孢子；游動孢子腎形或近梨形，大小15μm~20μm×9μm~16μm，鞭毛長17μm~30μm；藏卵器，球形，直徑29μm~35μm；雄器，球形，圍生，無色，15μm~20μm×9μm~16μm，平均17μm×15μ