實驗動物生物樣本處理規(guī)范征求意見稿

1實驗動物生物樣本處理規(guī)范GB/T41908-2022《人類糞便樣本采集與處理》GB/T42060-2022《醫(yī)學(xué)實驗室樣品采集、GB/T40352.1-2021《人類組織樣本GB/T38735-2020《人類尿液樣本采集與處理第1部分：手術(shù)切除組織》GB/T38576-2020《人類血液樣本采集與處理》GB/T37864-2019《生物樣本庫質(zhì)量和能GB/Z44314-2024《生物技術(shù)生物樣本保藏動物生物樣本保藏要求》T/CNSS017-2022《研究用人乳樣本4樣本處理前準(zhǔn)備4.1樣本處理方案的制定路線等；處理樣本類型（全血、血清、血漿或細(xì)胞）；4.2設(shè)備和耗材確認(rèn)24.3樣本儲存條件確認(rèn)4.4個人防護(hù)準(zhǔn)備必須按處理場地要求戴上手套、口罩、安全眼鏡或護(hù)目鏡，穿好實驗服，注意自我4.5場地、人員確認(rèn)場地應(yīng)是專屬場地，禁止辦公使用；場地有紫外和其他消毒設(shè)施，組織樣本處理實驗室應(yīng)符合GB14189-2008實驗室生物安全5.1組織樣本處理將新鮮組織樣本切割為厚度控制在0.5cm以內(nèi)的組織塊，在離體后30min內(nèi)，裝入置有RNAlater保在OTC包埋模具中放入OTC包埋劑，將提前分割至約為0.5cm×0.5cm×0.5cm的新鮮組織塊（離體過程應(yīng)避免在OTC包埋劑中產(chǎn)生氣泡，去除任何產(chǎn)生在組織樣本周圍的氣泡。將包埋好的組織放在液氮5.1.4.1固定將新鮮取材的組織樣本分割至大小約1.5c用合適的透明劑，將組織中的有機(jī)溶劑充分置換。用融化的石蠟將組織中的透明劑充分5.2血液樣本處理35.2.1.1將抗凝采血管放置于離心機(jī)中,離心力調(diào)至1500g~2000g5.2.1.2離心機(jī)停止后,取出采血管(不可顛倒),血樣分為三層:上層為淺黃色澄清的血漿層,中層為灰5.2.3.1將普通血清管(無添加劑采血管)室溫靜置1h或快速血清管(含促凝劑采血管)室溫靜置5min或惰性分離膠促凝管(含惰性分離膠和促凝劑采血管)室5.2.3.2然后將采血管放置于離心機(jī)中,離心力調(diào)至1500g~2000g層為暗紅色的血凝塊層,或三層(惰性分離膠促凝管),上層為淺黃色澄清血清層,中層為透明的分離膠5.2.3.4使用合適的移液槍或一次性巴氏吸管小心吸取血清層,避免吸取血凝塊層或分離膠層,將血清5.2.5.1取新鮮抗凝血(一般為EDTA抗凝血),進(jìn)5.2.5.3根據(jù)血量準(zhǔn)備合適體積的離心管,將適量體積的細(xì)胞分離液(具體參考試劑說明)注入離心管5.2.5.5離心后,離心管中由上至下細(xì)胞分為四層:第一層為血漿層,第二層為環(huán)狀乳白色單個核細(xì)胞層,5.2.5.6收集第二層單個核細(xì)胞至另一干凈離心管中,加入適量細(xì)胞洗滌液,離心,棄去上清,將沉淀細(xì)5.2.5.7收集所得血液中的單個核細(xì)胞按預(yù)期要求進(jìn)5.3唾液樣本的處理5.3.1根據(jù)預(yù)期研究目的，可選擇添加合適的唾液保存液(如脫氧核糖核酸酶(DNase)抑制劑、核糖核酸酶(RNase)抑制劑、蛋白酶抑制劑、5.3.2根據(jù)預(yù)期研究目的，可選擇對唾液進(jìn)行離心處理:5.4精液樣本的處理5.4.1精液樣本在處理前宜首先檢查其活率和密度,然后確定稀釋倍數(shù)。5.4.2將精液與稀釋液同時置30℃左右的恒溫箱或水5.4.3將稀釋液沿緩慢加入盛放精液樣本的容器,并輕輕搖動,使之混合均勻。如做高倍稀45.4.4稀釋完畢后,再進(jìn)行活率密度檢查,如活率與稀釋前一樣,則可進(jìn)行分裝、保5.5陰道內(nèi)液樣本的處理5.5.1根據(jù)后續(xù)實驗用途（細(xì)菌培養(yǎng)、核酸提取、代謝組、宏基5.5.2陰道內(nèi)液樣本采集完后，將拭子頭放入盛有保存液的保存管中，折斷拭子，保留拭子頭在保存5.5.3如采用沖洗法進(jìn)行采集，則將陰道沖洗液直接加入盛有保存液的保存管中，蓋上管蓋，振蕩混5.5.4應(yīng)用于檢查雌性動物的生理周期等特征時，直接進(jìn)行涂片染色。5.6乳汁樣本的處理5.6.1為維持樣本的完整性，宜在采集后4小時內(nèi)，在2℃~8℃條件下對乳樣進(jìn)行保存或處理。5.6.2乳樣可能含細(xì)胞和其他成分，宜在等分分樣5.7尿液樣本處理5.7.1預(yù)處理5.7.1.1防腐處理應(yīng)根據(jù)研究方案或樣本檢測目的,添加合適的防腐劑(如甲醛、甲苯、硼酸、疊氮鈉5.7.1.2蛋白酶抑制處理應(yīng)根據(jù)研究方案或樣本檢測目的,確定是否加入蛋白酶抑制劑以防止樣本中5.7.1.3核酸保護(hù)處理應(yīng)根據(jù)研究方案或樣本檢測目的,確定是否加入核酸保護(hù)液以防止樣本中核酸完成預(yù)處理的樣本在儲存前應(yīng)根據(jù)研究方案或樣本檢測目的選擇適宜的分裝量進(jìn)行分裝,確保滿足使用要求的同時避免了對樣本的反復(fù)凍融。分裝應(yīng)符合但不限于以下要求:5.7.2.1未經(jīng)離心處理的尿液樣本可直接分裝成全尿樣本進(jìn)行儲存或后5.7.2.2需離心處理的樣本應(yīng)根據(jù)研究方案或樣本檢測目的選擇適宜離心條件,獲得尿液上清和尿沉渣樣本,其分裝要求如下:5.7.2.3特殊處理的尿液樣本(如膜干燥真空保存部分尿液成分5.8糞便樣本處理5.8.1采用稱重法將1g-2g糞便55.8.2原始糞便樣本可進(jìn)一步處理以獲得相關(guān)