葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程

葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程《葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程》分為六個(gè)部分：——第1部分：葡萄霜霉病抗性鑒定；——第2部分：葡萄白粉病抗性鑒定；——第3部分：葡萄黑痘病抗性鑒定；——第4部分：葡萄炭疽病抗性鑒定；——第5部分：葡萄灰霉病抗性鑒定；——第6部分：葡萄白腐病抗性鑒定。 第1部分葡萄霜霉病抗性鑒定1范圍《葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程》第1部分：葡萄霜霉病抗性鑒定，本部分規(guī)定了葡萄抗霜霉病鑒定技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、病原物接種體制備、室內(nèi)離體抗性鑒定、田間抗性鑒定、病情調(diào)查、抗性評(píng)價(jià)和鑒定結(jié)果記載方法。本部分適用于各種葡萄種質(zhì)資源對(duì)葡萄霜霉病抗性的鑒定和抗性評(píng)價(jià)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本部分。2.1抗病性diseaseresistance植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。2.2致病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起發(fā)病的能力。2.3抗性評(píng)價(jià)evaluationofresistance根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對(duì)特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的描述。2.4抗病性鑒定identificationofdiseaseresistance通過適宜技術(shù)方法鑒定植物對(duì)特定病害的抵抗水平。2.5人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體接于植物體適當(dāng)部位并使植物發(fā)病過程。2.6病情級(jí)別diseaseratingscale植物個(gè)體或群體發(fā)病程度的量化描述。2.7分離物isolate采用人工方法從植物發(fā)病部位分離獲得的病原體的純培養(yǎng)物。2.8接種體inoculum用于接種以引起病害的病原物或病原物的一部分。本標(biāo)準(zhǔn)接種體為新鮮配制的葡萄生單軸霜霉菌孢子囊。2.9接種體懸浮液suspension用于接種的含有定量接種體的液體。2.10病情指數(shù)diseaseindex（DI）通過對(duì)植物個(gè)體發(fā)病程度（病情級(jí)別）數(shù)值的計(jì)算所獲得的群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述形式。2.11葡萄霜霉病grapedownymildew由葡萄生單軸霜霉菌[Plasmoparaviticola(BerketCurtis)BerletdeToni]引起的一種主要危害葡萄葉片，產(chǎn)生受葉脈限制的多角形黃褐色病斑癥狀，后期葉背病斑產(chǎn)生白色霜狀霉層的葡萄病害。3病原物接種體制備3.1病原物采集從田間采集新鮮的葡萄霜霉病發(fā)病葉片，用無(wú)菌毛刷蘸取無(wú)菌水刷去病葉背面上的病菌和雜物，用吸水紙將葉背表面水分吸干，葉背朝上放置在底部墊有浸水濾紙的保濕盤內(nèi)，用PE保鮮膜密封后置于人工氣候培養(yǎng)箱中，22℃，相對(duì)濕度（RH）90%，12h黑暗/12h光照交替保濕培養(yǎng)，待長(zhǎng)出白色霜狀霉層后，用無(wú)菌毛刷蘸取無(wú)菌水將病斑上新形成的孢子囊刷于無(wú)菌水中，獲得分離物。分離物經(jīng)鑒定確認(rèn)為葡萄生單軸霜霉菌(Plasmoparaviticola)后，稀釋至接種濃度用于接種。3.2病原物保存病原物保存采用以下兩種方法：（1）病原物寄主活體保存：在適宜環(huán)境條件下，定期將病原菌人工接種于感病葡萄品種上，以保存病原物；（2）低溫冷凍保存：將病原菌分離物加入5%二甲基亞砜，置于-80℃超低溫冰箱里保存?zhèn)溆谩?.3接種體繁殖常用的繁殖方法有活體繁殖法和離體繁殖法?；铙w繁殖法是將霜霉病菌接種在預(yù)先種植的健康感病品種葉片背面進(jìn)行繁殖；離體繁殖法是將霜霉病菌接種在離體健康感病品種葉片背面進(jìn)行繁殖。待葉背面長(zhǎng)出大量新鮮菌體后，接種前用無(wú)菌毛刷蘸取無(wú)菌水將葉片上長(zhǎng)出的新鮮孢子囊刷至無(wú)菌水中，經(jīng)充分混勻即得病原菌孢子囊懸浮液。4室內(nèi)離體抗性鑒定4.1鑒定室設(shè)置人工接種鑒定室應(yīng)具備人工調(diào)節(jié)溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發(fā)病環(huán)境。4.2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用山葡萄“雙優(yōu)（Shuangyou）”為抗病對(duì)照品種，“無(wú)核白（ThompsonSeedless）”為感病對(duì)照品種。4.3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)排列，針對(duì)同一個(gè)葡萄材料，鑒定試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次，每次重復(fù)10個(gè)葉盤。4.4鑒定材料選擇選取當(dāng)年生葡萄枝條自生長(zhǎng)點(diǎn)向下第3-5位健康無(wú)病完全展開的葉片，用直徑為1.5cm的打孔器打取葉盤。4.5接種濃度在光學(xué)顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)葡萄霜霉病菌孢子囊，用無(wú)菌水稀釋至2×105個(gè)孢子囊/mL的懸浮液用于接種。孢子囊懸浮液每次使用需現(xiàn)用現(xiàn)配。4.6接種方法采用點(diǎn)接種法。從田間小心取回生長(zhǎng)狀態(tài)良好的葡萄植株新稍上第3-5節(jié)位展開的葉片，迅速在流水下輕柔沖洗，再用無(wú)菌水清洗一次，在直徑為9cm的塑料培養(yǎng)皿底部鋪一層吸水紙，加入2mL無(wú)菌水以保濕，將葉盤背面朝上隨機(jī)擺放在吸水紙上。用微量移液器吸取接種體懸浮液接種于葉盤背面，每個(gè)葉盤接種20μL，蓋上培養(yǎng)皿蓋子以保持皿內(nèi)濕度在90%以上。4.7接種后管理接種后將培養(yǎng)皿置于鑒定室內(nèi)，22℃，RH=90%，12h黑暗/12h光照交替保濕培養(yǎng)。接種48h后，用吸水紙將接種菌液吸凈。每天觀察培養(yǎng)皿內(nèi)吸水紙的干濕情況，并及時(shí)補(bǔ)水保濕。5田間抗性鑒定5.1鑒定葡萄園地設(shè)置鑒定葡萄園地應(yīng)具備適宜葡萄生長(zhǎng)的土壤、良好的光溫濕條件，使人工接種后具有良好的發(fā)病環(huán)境。5.2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用山葡萄“雙優(yōu)（Shuangyou）”為抗病對(duì)照品種，“無(wú)核白（ThompsonSeedless）”為感病對(duì)照品種。5.3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)選取，每個(gè)品種重復(fù)3次，每重復(fù)10個(gè)葉片。5.4鑒定材料選擇從田間選取當(dāng)年生葡萄新稍上第3-5節(jié)位健康無(wú)病完全展開的葉片。5.5接種濃度在光學(xué)顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)葡萄霜霉病菌孢子囊，用無(wú)菌水稀釋至2×105個(gè)孢子囊/mL的懸浮液用于接種。孢子囊懸浮液每次使用需現(xiàn)用現(xiàn)配。5.6接種方法采用噴霧接種法。在陰涼無(wú)風(fēng)的天氣條件下，用手持噴霧器向葡萄葉片背面噴施接種體懸浮液使其布滿葉片。5.7接種后管理接種后將接種枝條套袋保濕24h以利于發(fā)病，之后去除套袋，定期噴水保濕。6病情調(diào)查6.1調(diào)查時(shí)間室內(nèi)離體、田間病情調(diào)查分別于接種后7d、12d進(jìn)行。6.2調(diào)查方法調(diào)查每份鑒定材料接種葉片（葉盤）發(fā)病情況，根據(jù)病害癥狀描述，逐份材料進(jìn)行調(diào)查，記載病情級(jí)別，計(jì)算出病情指數(shù)（DI）。病情指數(shù)按公式（1）計(jì)算：DI=×100…………（1）式中：DI——病情指數(shù)；s——各病情級(jí)別代表數(shù)值；n——各病情級(jí)別病葉（葉盤）數(shù)；N——調(diào)查總?cè)~（葉盤）數(shù)；S——最高病情級(jí)別代表值。6.3病情分級(jí)室內(nèi)離體病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表1。表1葡萄霜霉病室內(nèi)離體病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述0葉盤無(wú)癥狀1病斑面積占葉盤面積5%以下3病斑面積占葉盤面積6%～20%5病斑面積占葉盤面積21%～50%7病斑面積占葉盤面積51%以上田間病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表2。表2葡萄霜霉病田間病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述0葉片無(wú)癥狀1病斑面積占葉片面積5%以下3病斑面積占葉片面積6%～25%5病斑面積占葉片面積26%～50%7病斑面積占葉片面積51%～75%9病斑面積占葉片面積76%以上，或葉片枯死脫落7抗性評(píng)價(jià)7.1鑒定有效性判別當(dāng)感病對(duì)照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（DI﹥50），該批次抗霜霉病鑒定視為有效。7.2抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)鑒定材料的發(fā)病程度（病情指數(shù)）確定其對(duì)霜霉病的抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表3。表3葡萄對(duì)霜霉病抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)病情指數(shù)抗性評(píng)價(jià)DI=0免疫Immunity（I）0<DI≤5高抗Highlyresistant（HR）6<DI≤25抗病Resistant（R）26<DI≤50感病Susceptible（S）50<DI≤100高感Highlysusceptible（HS）8鑒定記載表格葡萄抗霜霉病鑒定結(jié)果記載表格見表4。表4葡萄抗霜霉病鑒定結(jié)果記載表編號(hào)品種名稱病情級(jí)別病情指數(shù)抗性評(píng)價(jià)總數(shù)0級(jí)1級(jí)3級(jí)5級(jí)7級(jí)9級(jí)接種時(shí)間：調(diào)查時(shí)間：調(diào)查員（簽字）：鑒定技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）：

附錄A(資料性附錄)A．1病原物學(xué)名和形態(tài)描述葡萄霜霉病的病原為葡萄生單軸霉[Plasmoparaviticola(BerketCurtis)BerletdeToni]，屬于鞭毛菌亞門，菌絲體在寄主細(xì)胞間蔓延，以瘤狀吸器深入寄主細(xì)胞內(nèi)吸取養(yǎng)料。發(fā)病部位的霜霉?fàn)钗?，即病菌的孢子囊梗及孢子囊。孢子囊梗自葉片病組織反面的氣孔抽出，或從果粒皮孔抽出，4-6枝成束狀，無(wú)色，單軸分枝3-6次，一般分枝2-3次，分枝處近直角，長(zhǎng)400-780微米，寬6-10微米。分枝末端有2-3個(gè)短的小梗，圓錐狀，末端鈍，孢子囊即著生在小梗上。孢子囊五色、單孢，卵形或橢圓形，透明，頂端有乳頭狀突起，大小為（12.6-25.2）微米×（11.2-16.8）微米，著生在樹枝狀的孢囊梗上。每個(gè)孢子囊產(chǎn)生4-8個(gè)游動(dòng)孢子，游動(dòng)孢子腎臟形，大小為（7.5-9）微米×（6-7）微米。在扁平的一側(cè)生有兩根鞭毛，能在水中游動(dòng)。一般游動(dòng)半小時(shí)后，鞭毛收縮，變圓而停止活動(dòng)，再經(jīng)15分鐘開始萌發(fā)產(chǎn)生芽管，經(jīng)由葉片氣孔侵入寄生。后期寄生葉片海綿組織內(nèi)形成卵孢子。卵孢子褐色球形，壁厚，直徑230-35微米。卵孢子在游離水中萌發(fā)，產(chǎn)生1個(gè)細(xì)芽管，偶爾也產(chǎn)生兩個(gè)芽管，芽管長(zhǎng)度不一，寬2-3微米。芽管萌發(fā)，產(chǎn)生梨形孢子囊，大小28微米×36微米，每個(gè)孢子囊形成30-60個(gè)游動(dòng)孢子。A．2主要癥狀葡萄霜霉病只危害葡萄地上部幼嫩組織，如葉片、新梢、花穗和果實(shí)等。葉片受侵后開始呈現(xiàn)半透明、邊緣不清晰的油漬狀小斑點(diǎn)，受葉脈限制病斑呈多角形，后發(fā)展為黃色至褐色病斑，病斑常相互愈合成大塊，天氣潮濕時(shí)在病斑背面形成幼嫩密集白色似霜物。發(fā)病嚴(yán)重時(shí)葉片提早脫落。感病品種病斑較大，抗病品種病斑小。新梢、卷須、穗梗及葉柄發(fā)病時(shí)開始時(shí)為半透明、油漬狀斑點(diǎn)，后后發(fā)展為黃色至褐色略微下陷的不定形，表面可著生白色霜霉層。病梢等生長(zhǎng)停滯、扭曲，甚至枯死。幼果染病后果色變灰色，表面滿布白色霜霉層，隨即皺縮脫落。果粒成熟時(shí)較少感病，老果粒發(fā)病后變褐色。在我省陜南地區(qū)，因潮濕多雨，此病危害較重。葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程第2部分葡萄白粉病抗性鑒定1范圍《葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程》第2部分：葡萄白粉病抗性鑒定，本部分規(guī)定了葡萄抗白粉病鑒定技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、病原物接種體制備、田間抗性鑒定、病情調(diào)查、抗性評(píng)價(jià)和鑒定結(jié)果記載方法。本部分適用于各種葡萄種質(zhì)資源對(duì)葡萄白粉病抗性的鑒定和抗性評(píng)價(jià)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本部分。2.1抗病性diseaseresistance植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。2.2抗病性鑒定identificationofdiseaseresistance通過適宜技術(shù)方法鑒定植物對(duì)特定病害的抵抗水平。2.3抗性評(píng)價(jià)evaluationofresistance根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對(duì)特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的描述。2.4致病性pathogenicity病原物所具有的破壞寄主植物和引起病變的能力。2.5人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體接于植物體適當(dāng)部位并使之發(fā)病的過程。2.6病情級(jí)別diseaseratingscale人為定量植物個(gè)體或群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述。2.7分離物isolate采用人工方法從植物發(fā)病部位分離獲得的病原體的純培養(yǎng)物。2.8接種體inoculums用于接種以引起病害的病原物或病原物的一部分。本部分接種體為新鮮配制的葡萄白粉菌粉生孢子。2.9接種體懸浮液inoculumssolution用于接種的含有定量接種體的液體。2.10病情指數(shù)diseaseindex（DI）通過對(duì)植物個(gè)體發(fā)病程度（病情級(jí)別）數(shù)值的計(jì)算所獲得的群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述形式。2.11葡萄白粉病grapepowderymildew由葡萄鉤絲殼菌[Uncinulanecator(Schw.)Burr.]引起，主要危害葡萄葉片及幼嫩組織，產(chǎn)生不規(guī)則病斑癥狀，后期病斑產(chǎn)生白色粉狀物的葡萄病害。3病原物接種體制備3.1病原物采集采集具有典型白粉病病斑的葡萄葉片，用毛刷刷取葉片上的孢子于無(wú)菌水中，獲得分離物。分離物經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定確認(rèn)為(Uncinulanecator)后，稀釋至接種濃度用于接種或擴(kuò)繁備用。3.2接種體繁殖接種前需要進(jìn)行病原物接種體的繁殖。常用的繁殖方法是活體繁殖法，即將白粉病菌的分生孢子接種在預(yù)先種植的健康感病品種上繁殖。接種前用無(wú)菌毛刷刷取葉片上長(zhǎng)出的新鮮孢子于盛有無(wú)菌水的燒杯中，即得孢子懸浮液（每1000毫升無(wú)菌水懸浮孢子液加入7.8克葡萄糖，調(diào)整為白粉菌的最佳滲透壓），用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)分生孢子數(shù)稀釋至接種濃度。為了不影響接種效果，白粉病原菌孢子懸浮液放置時(shí)間最好不超過30min，因此從菌液制備到接種完成應(yīng)限制在2h內(nèi)。3.3病原物保存常用活體植株保存法：在適宜環(huán)境條件下，定期將病原菌人工接種于感病葡萄品種上，以保存病原物。4田間抗性鑒定4.1鑒定葡萄園地設(shè)置鑒定葡萄園地應(yīng)具備適宜葡萄生長(zhǎng)的土壤、良好的光溫濕條件，使人工接種后具有良好的發(fā)病環(huán)境。4.2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用山葡萄“雙優(yōu)（Shuangyou）”為抗病對(duì)照品種，“無(wú)核白（ThompsonSeedless）”為感病對(duì)照品種。4.3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)選取，每個(gè)品種重復(fù)3次，每次重復(fù)10個(gè)葉片或者10個(gè)果穗。4.4鑒定材料選擇從田間選取當(dāng)年生葡萄新稍上第3-5節(jié)位健康無(wú)病完全展開的葉片或者生長(zhǎng)健康一致的成熟果穗或者果實(shí)。4.5接種濃度在光學(xué)顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)葡萄白粉病菌分生孢子，用無(wú)菌水調(diào)至濃度為2×105個(gè)分生孢子/mL的懸浮液用于接種。分生孢子懸浮液每次使用需現(xiàn)用現(xiàn)配。4.6接種方法采用噴霧接種法。在陰涼無(wú)風(fēng)的天氣條件下，用手持噴霧器向葡萄葉片正反兩面、果穗或者果實(shí)均勻噴施接種體懸浮液直至有水滴滴出為止。4.7接種后管理接種后將接種枝條或者果穗/果實(shí)套袋保濕16-24h以利于發(fā)病，之后去除套袋，定期噴水保濕。5病情調(diào)查5.1調(diào)查時(shí)間田間病情調(diào)查于接種后12d進(jìn)行。5.2調(diào)查方法調(diào)查每份鑒定材料接種葉片和果實(shí)發(fā)病情況，根據(jù)病害癥狀描述，逐份材料進(jìn)行調(diào)查，記載病情級(jí)別，計(jì)算出病情指數(shù)（DI）。病情指數(shù)按公式（1）計(jì)算：DI=QUOTE錯(cuò)誤!未找到引用源?！?00…………（1）式中：DI——病情指數(shù)；s——各病情級(jí)別代表數(shù)值；n——各病情級(jí)別病葉（果實(shí)）數(shù)；N——調(diào)查總?cè)~（果實(shí)）數(shù)；S——最高病情級(jí)別代表值。5.3病情分級(jí)田間病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表1。表1葡萄白粉病田間病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述（葉片病斑面積或感病果實(shí)的百分率/%）0010.1～5.025.1～15.0315.1～30.0430.1～45.0545.1～65.0665.1～85.0785.1以上6抗性評(píng)價(jià)6.1鑒定有效性判別當(dāng)感病對(duì)照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（DI﹥55），該批次抗白粉病鑒定視為有效。6.2抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)鑒定材料的發(fā)病程度（病情指數(shù)）確定其對(duì)白粉病的抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表2。

表2葡萄對(duì)白粉病抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)病情指數(shù)抗性評(píng)價(jià)DI=0免疫Immunity（I）0.1<DI≤5.0高抗Highlyresistant（HR）5.1<DI≤25.0抗病Resistant（R）25.1<DI≤50.0感病Susceptible（S）50.1<DI≤100.0高感Highlysusceptible（HS）7鑒定記載表格葡萄抗白粉病鑒定結(jié)果記載表格見表3。表3葡萄抗白粉病鑒定結(jié)果記載表編號(hào)品種名稱病情級(jí)別病情指數(shù)抗性評(píng)價(jià)總數(shù)0級(jí)1級(jí)2級(jí)3級(jí)4級(jí)5級(jí)6級(jí)7級(jí)接種時(shí)間：調(diào)查時(shí)間：調(diào)查員（簽字）：鑒定技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）：

附錄A(資料性附錄)A．1病原物學(xué)名和形態(tài)描述葡萄白粉病原為葡萄鉤絲殼菌[Uncinulanecator(Schw.)Burr.]，屬于子囊菌亞門。發(fā)病部位的白粉層，即病菌的菌絲體、分生孢子梗及分生孢子。菌絲蔓延在寄主表皮外，白色。菌絲表生、半永久、有隔膜、透明，具有多裂片的附著胞，它突破短樁，突破角皮層和細(xì)胞壁后，在表皮細(xì)胞內(nèi)形成球狀吸器。菌絲直徑4-5微米，形成多隔膜分生孢子梗（長(zhǎng)10-400微米），菌絲是匐生長(zhǎng)，而分生孢子梗與菌絲垂直，分生孢子念珠狀串生，無(wú)色透明，橢圓形或卵圓形，單胞，內(nèi)含顆粒體（16.3-20.9）微米×30.3微米×34.9微米。閉囊殼散生，黑褐色，呈球形，直徑80-100微米，基部有10-13根附屬絲，附屬絲有分隔，基部褐色，頂端無(wú)色，向一方彎曲呈鉤狀，長(zhǎng)度為閉囊殼的2-3倍。閉囊殼內(nèi)含有4-6個(gè)子囊。子囊卵圓形至近球形，無(wú)色，大?。?0-60）微米×（25-35）微米，內(nèi)含4-6個(gè)卵形至橢圓形透明子囊孢子，成熟時(shí)多為4個(gè)。子囊孢子無(wú)色，單胞，大?。?0-25）微米×（10-12）微米。活的子囊孢子萌發(fā)時(shí)形成一條或多條短芽管，然后每個(gè)芽管迅速形成多裂片附著胞。A．2主要癥狀葡萄白粉病可以危害葉片、果實(shí)、枝蔓等所有綠色部分，但以幼嫩組織比較容易受到感染。葉片發(fā)病，葉色褪綠或呈灰白色斑塊，上覆蓋白粉，葉面不平，病斑輪廓不整齊，大小不等，嚴(yán)重時(shí)白粉布滿葉片，逐漸使葉片卷縮，枯萎而脫落。幼果發(fā)病，初期表面產(chǎn)生不規(guī)則斑塊，表面產(chǎn)生灰白色粉狀霉層，用手擦去白色粉狀物，能看到在果實(shí)的皮層上有褐色或紫褐色的網(wǎng)狀花紋。小幼果受害后不易生長(zhǎng)，果粒小，易枯萎脫落；大幼果得病后容易變硬、畸形，易縱向開裂；轉(zhuǎn)色期的果粒得病后糖分積累困難，味酸，容易開裂。新梢、果梗及穗軸發(fā)病時(shí)，出現(xiàn)黑褐色、網(wǎng)紋線紋，上覆蓋白色粉狀物。葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程第3部分葡萄黑痘病抗性鑒定1范圍《葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程》第3部分：葡萄黑痘病抗性鑒定，本部分規(guī)定了葡萄抗黑痘病鑒定技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、病原物接種體制備、室內(nèi)離體抗性鑒定、田間抗性鑒定、病情調(diào)查、抗性評(píng)價(jià)和鑒定結(jié)果記載方法。本部分適用于各種葡萄種質(zhì)資源對(duì)葡萄黑痘病抗性的鑒定和抗性評(píng)價(jià)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本部分。2．1致病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起發(fā)病的能力。2．2抗病性diseaseresistance植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。2．3抗病性鑒定identificationofdiseaseresistance通過適宜技術(shù)方法鑒定植物對(duì)特定病害的抵抗水平。2．4抗性評(píng)價(jià)evaluationofresistance根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對(duì)特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的描述。2．5人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體接于植物體適當(dāng)部位并使植物發(fā)病過程。2．6病情級(jí)別diseaseratingscale植物個(gè)體或群體發(fā)病程度的量化描述。2．7分離物isolate采用人工方法從植物發(fā)病部位分離獲得的病原體的純培養(yǎng)物。2．8培養(yǎng)基medium可以使病原物生長(zhǎng)的自然或人工配制的基質(zhì)。2．9接種體inoculum用于接種以引起病害的病原物或病原物的一部分。本標(biāo)準(zhǔn)接種體為新鮮配制的葡萄生單軸黑痘菌孢子囊。2．10接種體懸浮液suspension用于接種的含有定量接種體的液體。2．11病情指數(shù)diseaseindex（DI）通過對(duì)植物個(gè)體發(fā)病程度（病情級(jí)別）數(shù)值的計(jì)算所獲得的群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述形式。2．12葡萄黑痘病由葡萄痂囊腔菌[Elsinoeampelina(deBary)Shear]引起的主要危害葡萄綠色幼嫩部位如果實(shí)、果梗、葉片、葉柄、新梢和卷須等的一種真菌性病害。3病原物接種體制備3．1病原體制備與鑒定從田間采集植株的發(fā)病葉片，在葉片上的典型病斑處截取病健交叉組織，裁剪成小葉段用0.1%的升汞消毒、無(wú)菌水沖洗3次后置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)上，于25℃生化培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)，5-10天后長(zhǎng)出菌組織。繼而從菌生長(zhǎng)部位邊緣取小塊未污染菌組織進(jìn)行純化，重復(fù)進(jìn)行3次，25-28天后長(zhǎng)出分生孢子，然后在21℃培養(yǎng)箱中活化24小時(shí)備用。經(jīng)肉眼觀察以及顯微鏡形態(tài)學(xué)鑒定后確認(rèn)為葡萄痂囊腔菌(Elsinoeampelina)。3．2病原體擴(kuò)繁目前葡萄黑痘菌多數(shù)被認(rèn)定為半活體寄生，一般可在培養(yǎng)基上擴(kuò)繁和保存，即將分離純化獲得的病原菌直接接種于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)生長(zhǎng)，定期擴(kuò)繁，周期為30-40d。也可直接將培養(yǎng)基上的病原菌保存在20%的甘油里置于-80℃超低溫冰箱中保存，60d后孢子囊仍具有致病力。4室內(nèi)離體抗性鑒定4．1鑒定室設(shè)置人工接種鑒定室應(yīng)具備人工調(diào)節(jié)溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發(fā)病環(huán)境。4．2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用毛葡萄“商-24（Shang-24）”為抗病對(duì)照品種，“無(wú)核白（ThompsonSeedless）”為感病對(duì)照品種。4．3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)排列，針對(duì)同一個(gè)葡萄材料，鑒定試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次，每次重復(fù)10個(gè)葉盤。4．4鑒定材料選擇從田間選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的葡萄植株新稍上第3-5節(jié)位健康無(wú)病完全展開的葉片，用直徑為1.5cm的打孔器打取葉盤。4．5接種濃度刮取培養(yǎng)基表面的菌絲至蒸餾水中，振蕩渦旋，濾去菌絲殘?bào)w，獲得清液，在光學(xué)顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)葡萄黑痘病菌孢子囊，用無(wú)菌水調(diào)至濃度為2×106個(gè)孢子囊/mL的懸浮液用于接種。孢子懸浮液每次使用需現(xiàn)用現(xiàn)配。4．6接種方法采用點(diǎn)接種法。從田間小心取回生長(zhǎng)狀態(tài)良好的葡萄植株新稍上第3-5節(jié)位展開的葉片，迅速在流水下輕柔地沖洗，再用無(wú)菌水清洗一次，晾干后插入到托盤內(nèi)的WA（含0.8%瓊脂的瓊脂培養(yǎng)基）上。用微量移液器吸取接種體懸浮液接種于葉盤正面，每個(gè)葉盤接種20μL后晾干，再將保鮮膜上噴一層薄薄的無(wú)菌水水霧后覆蓋托盤，以保持托盤內(nèi)濕度在90%以上。4．7接種后管理接種后將培養(yǎng)托盤置于鑒定室內(nèi)，23℃，RH=90%，前24h在黑暗條件下，接下來(lái)的時(shí)間按照12h光照/12h黑暗交替進(jìn)行。每天觀察托盤內(nèi)保鮮膜的干濕情況，及時(shí)補(bǔ)水保濕。5田間抗性鑒定5．1鑒定葡萄園地設(shè)置鑒定葡萄園地應(yīng)具備適宜葡萄生長(zhǎng)的土壤、良好的光溫濕條件，使人工接種后具有良好的發(fā)病環(huán)境。5．2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用毛葡萄“商-24（Shang-24）”為抗病對(duì)照品種，“無(wú)核白（ThompsonSeedless）”為感病對(duì)照品種。5．3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)選取，每個(gè)品種重復(fù)3次，每重復(fù)10個(gè)葉片或者10個(gè)果穗。5．4鑒定材料選擇從田間選取當(dāng)年生葡萄新稍上第3-5節(jié)位健康無(wú)病完全展開的葉片或者生長(zhǎng)健康一致的成熟果穗或者果實(shí)。5．5接種濃度刮取培養(yǎng)基表面的菌絲至蒸餾水中，振蕩渦旋，濾去菌絲殘?bào)w，獲得清液，在光學(xué)顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)葡萄黑痘病菌孢子囊，用無(wú)菌水調(diào)至濃度為2×106個(gè)孢子囊/mL的懸浮液用于接種。孢子懸浮液每次使用需現(xiàn)用現(xiàn)配。5．6接種方法采用噴霧接種法。在陰涼無(wú)風(fēng)的天氣條件下，用手持噴霧器向葡萄葉片正反兩面、果穗或者果實(shí)噴施接種體懸浮液使其布滿葉片。5．7接種后管理接種后將接種枝條或者果穗/果實(shí)套袋保濕24h以利于發(fā)病，之后去除套袋，定期噴水保濕。6病情調(diào)查6．1調(diào)查時(shí)間室內(nèi)離體、田間病情調(diào)查分別于接種后5d、10d進(jìn)行。6．2調(diào)查方法調(diào)查每份鑒定材料接種葉片（葉盤/果實(shí)）發(fā)病情況，根據(jù)病害癥狀描述，逐份材料進(jìn)行調(diào)查，記載病情級(jí)別，計(jì)算出病情指數(shù)（DI）。病情指數(shù)按公式（1）計(jì)算：DI=×100…………（1）式中：DI——病情指數(shù)；s——各病情級(jí)別代表數(shù)值；n——各病情級(jí)別病葉（葉盤/果實(shí)）數(shù)；N——調(diào)查總?cè)~（葉盤/果實(shí)）數(shù)；S——最高病情級(jí)別代表值。6．3病情分級(jí)室內(nèi)離體病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表1。表1葡萄黑痘病室內(nèi)離體病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述0葉盤無(wú)癥狀1病斑面積占葉盤面積5%以下2病斑面積占葉盤面積5.1%～10.0%3病斑面積占葉盤面積10.1%～35.0%4病斑面積占葉盤面積35.1%～50.0%5病斑面積占葉盤面積50.1%以上田間病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表2。表2葡萄黑痘病田間病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述0葉片或果實(shí)無(wú)癥狀1病斑面積或感病果實(shí)的百分率0.1%～5%2病斑面積或感病果實(shí)的百分率5.1%～15.0%3病斑面積或感病果實(shí)的百分率15.1%～30.0%4病斑面積或感病果實(shí)的百分率30.1%～45.0%5病斑面積或感病果實(shí)的百分率45.1%～65.0%6病斑面積或感病果實(shí)的百分率65.1%～85.0%7病斑面積或感病果實(shí)的百分率85.1%以上7抗性評(píng)價(jià)7．1鑒定有效性判別當(dāng)感病對(duì)照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（DI﹥50），該批次抗黑痘病鑒定視為有效。7．2抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)鑒定材料的發(fā)病程度（病情指數(shù)）確定其對(duì)黑痘病的抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表3。表3葡萄對(duì)黑痘病抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)病情指數(shù)抗性評(píng)價(jià)DI=0免疫Immunity（I）0.1<DI≤5.0高抗Highlyresistant（HR）5.1<DI≤25.0抗病Resistant（R）25.1<DI≤50.0感病Susceptible（S）50.1<DI≤100.0高感Highlysusceptible（HS）8鑒定記載表格葡萄抗黑痘病鑒定結(jié)果記載表格見表4。表4葡萄抗黑痘病鑒定結(jié)果記載表編號(hào)品種名稱病情級(jí)別病情指數(shù)抗性評(píng)價(jià)總數(shù)0級(jí)1級(jí)2級(jí)3級(jí)4級(jí)5級(jí)6級(jí)7級(jí)接種時(shí)間：調(diào)查時(shí)間：調(diào)查員（簽字）：鑒定技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）：

附錄A(資料性附錄)A．1病原物學(xué)名和形態(tài)描述葡萄黑痘病病原菌是葡萄痂囊腔菌（Elsinoeampelina(deBary)Shear），屬于子囊菌亞門、痂囊腔菌屬，中國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)。無(wú)性階段為葡萄痂圓孢菌（Sphacelomaampelium(deBary)），屬于半知菌亞門痂圓孢菌屬。病菌的無(wú)性階段致病，有性階段病菌很少見。病菌的無(wú)性階段致病。病菌在病斑的外表形成分生孢子盤，半埋于寄生組織內(nèi)，分生孢子梗短，不分枝，無(wú)色，單胞，大小為6.6-13.2微米×1.3-2.0微米，頂部生有橢圓形或卵形的分生孢子，無(wú)色、單胞，兩端各有一個(gè)油球，大小為4.8-11.6微米×2.2-3.7微米。在水上分生孢子產(chǎn)生芽管，迅速固定在基物上，秋天不再形成分生孢子盤，但在新梢病部邊緣形成菌塊即菌核，這是病菌主要越冬結(jié)構(gòu)。春天菌核產(chǎn)生分生孢子。子囊果初埋于病組織內(nèi)，后突破表皮外露，全體為一塊狀不規(guī)則的由擬薄壁組織構(gòu)成的子座，外面有一層皮殼，其內(nèi)有多個(gè)排列不整齊的腔穴，每個(gè)腔穴著生1個(gè)子囊，子囊無(wú)色，近球形，其內(nèi)藏有4-8個(gè)子囊孢子。子囊孢子無(wú)色，香蕉形，具有3個(gè)隔膜，大小為15-16微米×4-4.5微米。A．2主要癥狀葡萄黑痘病主要危害葡萄的綠色幼嫩部位，如果實(shí)、果梗、葉片、葉柄、新梢和卷須等。葉片：開始出現(xiàn)針頭大紅褐色至黑褐色斑點(diǎn)，周圍有黃色暈圈。后病斑擴(kuò)大呈圓形或不規(guī)則形，中央灰白色，稍凹陷，邊緣暗褐色或紫色，直徑1-4毫米。干燥時(shí)病斑自中央破裂穿孔，但病斑周緣仍保持紫褐色的暈圈。葉脈：病斑呈梭形，凹陷，灰色或灰褐色，連邊緣暗褐色。葉脈被害后，由于組織干枯，常使葉片扭曲，皺縮。穗軸：發(fā)病使全穗或部分小穗發(fā)育不良，甚至枯死。果梗患病要使果實(shí)干枯脫落或僵化。果實(shí)：綠果被害，初為圓形深褐色小斑點(diǎn)，后擴(kuò)大，直徑可達(dá)2-5毫米，中央凹陷，呈灰白色，外部仍為深褐色，而周緣紫褐色似“鳥眼”狀。多個(gè)病斑可連接成大斑，后期病斑硬化或龜裂。病果小而酸，失去食用價(jià)值。染病較晚的果粒，仍能長(zhǎng)大，病斑凹陷不明顯，但果味較酸。病斑限于果皮，不深入果肉。空氣潮濕時(shí)，病斑上出現(xiàn)乳白色的粘質(zhì)物，此為病菌的分生孢子團(tuán)。新梢、蔓、葉柄或卷須：發(fā)病時(shí)，初現(xiàn)圓形或不規(guī)則小斑點(diǎn)，以后呈灰黑色，邊緣深褐色或紫色，中部凹陷開裂。新梢未木質(zhì)化以前最易感染，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，病梢生長(zhǎng)停滯，萎縮，甚至枯死。葉柄染病癥狀與新梢上相似。葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程第4部分葡萄炭疽病抗性鑒定1范圍《葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程》第4部分：葡萄炭疽病抗性鑒定，本部分規(guī)定了葡萄抗炭疽病鑒定技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、病原物接種體制備、室內(nèi)離體抗性鑒定、田間抗性鑒定、病情調(diào)查、抗性評(píng)價(jià)和鑒定結(jié)果記載方法。本部分適用于各種葡萄種質(zhì)資源對(duì)葡萄炭疽病抗性的鑒定和抗性評(píng)價(jià)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本部分。2．1致病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起發(fā)病的能力。2．2抗病性diseaseresistance植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。2．3抗病性鑒定identificationofdiseaseresistance通過適宜技術(shù)方法鑒定植物對(duì)特定病害的抵抗水平。2．4抗性評(píng)價(jià)evaluationofresistance根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對(duì)特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的描述。2．5人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體接于植物體適當(dāng)部位并使植物發(fā)病過程。2．6病情級(jí)別diseaseratingscale植物個(gè)體或群體發(fā)病程度的量化描述。2．7分離物isolate采用人工方法從植物發(fā)病部位分離獲得的病原體的純培養(yǎng)物。2．8培養(yǎng)基medium可以使病原物生長(zhǎng)的自然或人工配制的基質(zhì)。2．9接種體inoculum用于接種以引起病害的病原物或病原物的一部分。2．10病情指數(shù)diseaseindex（DI）通過對(duì)植物個(gè)體發(fā)病程度（病情級(jí)別）數(shù)值的計(jì)算所獲得的群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述形式。2．11葡萄炭疽病由膠胞炭疽菌[Colletotrichumgloeosporioide(Penz.)Sacc]引起的一種主要危害葡萄果實(shí)，嚴(yán)重時(shí)造成果實(shí)腐爛的葡萄病害。3病原物接種體制備3．1病原體分離采用單病斑分離法從發(fā)病葡萄果實(shí)的典型病斑上分離炭疽病病原物。經(jīng)分離純化后，形態(tài)學(xué)鑒定為葡萄膠胞炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioide)。3．2病原體培養(yǎng)葡萄炭疽病病菌可以離體培養(yǎng)，菌種在4℃保存?zhèn)溆?，?80℃長(zhǎng)期保存。將病原菌接種于PDA固體培養(yǎng)基上，28℃下黑暗培養(yǎng)，待菌絲布滿后，在超凈工作臺(tái)里用接種針劃傷菌絲促進(jìn)產(chǎn)生孢子。3．2接種體懸浮液制備在產(chǎn)生孢子的培養(yǎng)皿中加入適量無(wú)菌水，淹沒菌絲體靜置10min，再用滅菌的接種環(huán)在菌絲表面輕輕來(lái)回刮動(dòng)，使游動(dòng)孢子充分釋放到水中，將孢子懸浮液吸到三角瓶中，在光學(xué)顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)葡萄炭疽病原菌孢子數(shù)，用無(wú)菌水將制備的孢子懸浮液稀釋至2×106個(gè)孢子/mL用于接種。4室內(nèi)離體抗性鑒定4．1鑒定室設(shè)置人工接種鑒定室應(yīng)具備人工調(diào)節(jié)溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發(fā)病環(huán)境。4．2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用山葡萄“雙優(yōu)（Shuangyou）”為抗病對(duì)照品種，“無(wú)核白（ThompsonSeedless）”為感病對(duì)照品種。4．3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)排列，針對(duì)同一個(gè)葡萄材料，鑒定試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次，每次重復(fù)10個(gè)葉片或者30粒果實(shí)。4．4鑒定材料選擇從田間選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的葡萄當(dāng)年生新稍上第3-5節(jié)位健康無(wú)病完全展開的葉片和大小一致健康的成熟果實(shí)。4．5接種方法及接種后管理葉片抗性鑒定接種方法：選取健康葉片，清水沖洗后用70%酒精擦拭一遍，自然晾干后用于接種，每個(gè)處理10個(gè)葉片。對(duì)葉片進(jìn)行正面一針刺傷，刺傷時(shí)避開葉片主脈。在刺傷處滴30μL孢子懸浮液，每個(gè)葉片接種4~6處，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)，每隔24h調(diào)查1次，以接種5d后的病斑大小為鑒定數(shù)據(jù)。果實(shí)抗性鑒定接種方法：用清水沖洗果實(shí)，再放入70%酒精溶液中浸泡1min進(jìn)行表面快速消毒，在超凈工作臺(tái)晾干。每個(gè)單株的果實(shí)30粒，在果實(shí)表面噴灑孢子懸浮液。置于28℃黑暗培養(yǎng)，每48h調(diào)查1次，以接種6d后的病斑大小為鑒定數(shù)據(jù)。5田間抗性鑒定5．1鑒定葡萄園地設(shè)置鑒定葡萄園地應(yīng)具備適宜葡萄生長(zhǎng)的土壤、良好的光溫濕條件，使人工接種后具有良好的發(fā)病環(huán)境。5．2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用山葡萄“雙優(yōu)（Shuangyou）”為抗病對(duì)照品種，“無(wú)核白（ThompsonSeedless）”為感病對(duì)照品種。5．3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)選取，每個(gè)品種重復(fù)3次，每次重復(fù)10個(gè)果穗。5．4鑒定材料選擇從田間選取生長(zhǎng)狀態(tài)一致的葡萄新生果穗。5．5接種方法及接種后管理由于葡萄炭疽病菌可以侵染葡萄的一切幼嫩組織，因此在座果后，用硫酸紙袋套果穗，以防自然侵染。待果實(shí)成熟時(shí)，采用噴霧接種法在果穗表面均勻噴灑孢子懸浮液，套袋保濕3d后去掉紙袋，10d后調(diào)查果粒發(fā)病率。6病情調(diào)查6．1調(diào)查時(shí)間室內(nèi)離體、田間病情調(diào)查分別于接種后5d、10d進(jìn)行。6．2調(diào)查方法調(diào)查每份鑒定材料接種葉片或果實(shí)發(fā)病情況，根據(jù)病害癥狀描述，逐份材料進(jìn)行調(diào)查，記載病情級(jí)別，計(jì)算出病情指數(shù)（DI）。病情指數(shù)按公式（1）計(jì)算：DI=×100…………（1）式中：DI——病情指數(shù)；s——各病情級(jí)別代表數(shù)值；n——各病情級(jí)別病葉（果實(shí)）數(shù)；N——調(diào)查總?cè)~（果實(shí)）數(shù)；S——最高病情級(jí)別代表值。6．3病情分級(jí)室內(nèi)離體葉片病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表1。

表1葡萄炭疽病室內(nèi)離體葉片病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述0葉片無(wú)病斑1病斑面積占葉片面積5%以下3病斑面積占葉片面積6%～25%5病斑面積占葉片面積26%～50%7病斑面積占葉片面積51%～75%9病斑幾乎布滿葉片或葉片枯死室內(nèi)離體果實(shí)病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表2。表2葡萄炭疽病室內(nèi)離體果實(shí)病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述0全果無(wú)癥狀0.5果實(shí)腐爛面積1/4以下1果實(shí)腐爛面積1/4～1/22果實(shí)腐爛面積1/2～3/43果實(shí)腐爛面積3/4以上田間病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表3。表3葡萄炭疽病田間病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述0全果無(wú)癥狀1果粒發(fā)病率0.1%～5.0%2果粒發(fā)病率5.1%～15.0%3果粒發(fā)病率15.1%～30.0%4果粒發(fā)病率30.1%～50.0%5果粒發(fā)病率50.1%～100.0%7抗性評(píng)價(jià)7．1鑒定有效性判別當(dāng)感病對(duì)照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（DI﹥50），該批次抗炭疽病鑒定視為有效。7．2抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)鑒定材料的發(fā)病程度（病情指數(shù)）確定其對(duì)炭疽病的抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表3。表3葡萄對(duì)炭疽病抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)病情指數(shù)抗性評(píng)價(jià)DI=0免疫Immunity（I）0.1<DI≤5.0高抗Highlyresistant（HR）5.1<DI≤25.0抗病Resistant（R）25.1<DI≤50.0感病Susceptible（S）50.1<DI≤100.0高感Highlysusceptible（HS）8鑒定記載表格葡萄抗炭疽病鑒定結(jié)果記載表格見表4。表4葡萄抗炭疽病鑒定結(jié)果記載表編號(hào)品種名稱病情級(jí)別病情指數(shù)抗性評(píng)價(jià)總數(shù)0級(jí)1級(jí)2級(jí)3級(jí)4級(jí)5級(jí)6級(jí)7級(jí)接種時(shí)間：調(diào)查時(shí)間：調(diào)查員（簽字）：鑒定技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）：

附錄A(資料性附錄)A．1病原物學(xué)名和形態(tài)描述病原有性世代為圍小叢殼菌（Glomerellacingulata(Stonem)SpauldetSchrenk），屬于子囊菌亞門，中國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)。常見的無(wú)性階段為Colletotrichumgloeosporioide(Penz.)Sacc，異名為果生盤長(zhǎng)孢菌GloeosporiumfructigenumBerk，屬于半知菌亞門。病斑上的小黑點(diǎn)，即病菌的分生孢子盤，分生孢子盤為盤狀，埋生于寄主表皮下，后突破表皮外露，孢子盤大小為377.3-480.2微米，盤上聚生圓筒形或棍棒形、短小、單胞、無(wú)色的分生孢子梗。分生孢子梗大小為（12-26）微米×（3.5-4.0）微米，孢子梗頂端產(chǎn)生大量的分生孢子并有黏質(zhì)物。分生孢子橢圓形或圓筒形，單胞，無(wú)色，兩端鈍圓，內(nèi)有1個(gè)油點(diǎn)或不明顯，大小為（10.3-15.0）微米×（3.3-4.7）微米。A．2主要癥狀葡萄炭疽病主要發(fā)生在葡萄果實(shí)和穗軸上，也能侵害葉片、新梢、卷須、果梗等部位，但癥狀不如果實(shí)和穗軸上明顯。在花穗初期即開始感病，受侵染的花或花梗變褐腐爛，造成大量落花，后期整個(gè)花穗爛掉。幼果發(fā)病多從近地果穗頂部果粒開始，發(fā)病最初在果面產(chǎn)生針頭大小的褐色圓斑，后期隨著果實(shí)增大、含糖量增加、果實(shí)開始著色，病斑逐漸擴(kuò)大并凹陷，果肉變軟腐爛，表面產(chǎn)生輪紋狀排列的小黑點(diǎn)，即病菌的分生孢子器。天氣潮濕時(shí)，病斑中央有緋紅色粘質(zhì)物，即分生孢子團(tuán)。發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，病斑可擴(kuò)展到整個(gè)果面乃至全穗。在歐美雜交種葡萄上，病果多軟腐脫落；在歐洲種葡萄上，一般干縮成黑色僵果。侵染新梢和葉片時(shí)，穗柄和葉柄、葉緣也出現(xiàn)近圓形褐色病，濕度大時(shí)，也會(huì)產(chǎn)生粉紅色的分生孢子團(tuán)。葉片發(fā)病初為褐色小圓斑，梢凹陷，當(dāng)小病斑密布全葉，病斑相連時(shí)，往往使葉片枯黃脫落。新梢受害時(shí)呈現(xiàn)淡黃褐色病斑，被害部易脫落，殘痕處有緋紅色粘質(zhì)物。果?；蛩胼S發(fā)病，產(chǎn)生暗褐色長(zhǎng)圓形凹陷病斑，并有緋紅色粘質(zhì)物，嚴(yán)重時(shí)病部以下果穗干枯脫落。葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程第5部分葡萄灰霉病抗性鑒定1范圍《葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程》第5部分：葡萄灰霉病抗性鑒定，本部分規(guī)定了葡萄抗灰霉病鑒定技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、病原物接種體制備、抗性評(píng)價(jià)和鑒定結(jié)果記載方法。本部分適用于各種葡萄種質(zhì)資源對(duì)葡萄灰霉病抗性的鑒定和抗性評(píng)價(jià)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本部分。2．1抗病性diseaseresistance植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。2．2致病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起發(fā)病的能力。2．3抗病性鑒定identificationofdiseaseresistance通過適宜技術(shù)方法鑒定植物對(duì)特定病害的抵抗水平。2．4抗性評(píng)價(jià)evaluationofresistance根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對(duì)特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的描述。2．5人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體接于植物體適當(dāng)部位并使植物發(fā)病過程。2．6病情級(jí)別diseaseratingscale植物個(gè)體或群體發(fā)病程度的量化描述。2．7分離物isolate采用人工方法從植物發(fā)病部位分離獲得的病原體的純培養(yǎng)物。2．8培養(yǎng)基medium可以使病原物生長(zhǎng)的自然或人工配制的基質(zhì)。2．9接種體inoculum用于接種以引起病害的病原物或病原物的一部分。2．10接種體懸浮液inoculumssolution用于接種的含有定量接種體的液體。2．11病情指數(shù)diseaseindex（DI）通過對(duì)植物個(gè)體發(fā)病程度（病情級(jí)別）數(shù)值的計(jì)算所獲得的群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述形式。2．12葡萄灰霉病由灰葡萄孢菌[BotrytiscinereaPers]引起的危害葡萄葉片、花序等幼嫩組織和成熟果實(shí)，產(chǎn)生水漬狀病斑的葡萄病害。3病原物接種體制備3．1病原體來(lái)源和保存接種工作所使用的灰霉菌菌株是從感染灰霉病葡萄果實(shí)的典型病斑上分離純化后所得，該菌株在23℃黑暗條件下培養(yǎng)3-4周后自發(fā)產(chǎn)生分生孢子?？稍?℃條件下，短期保存?zhèn)溆?。長(zhǎng)期保存于-80℃超低溫冰箱中。3．2病原體的分離和鑒定選取發(fā)病部位和健康部位交叉的組織，用0.1%的升汞消毒、無(wú)菌水沖洗3次，取組織小塊放置在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）上，黑暗、23-25℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)，7-11天后長(zhǎng)出灰霉菌組織。從灰霉菌生長(zhǎng)部位邊緣取小塊菌組織進(jìn)行純化，重復(fù)進(jìn)行3次，3-4周后長(zhǎng)出分生孢子。3．3孢子懸浮液的配制刮取培養(yǎng)基表面的菌絲至蒸餾水中，振蕩渦旋，濾去菌絲殘?bào)w，獲得清液，用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，調(diào)整至需要的濃度。孢子懸浮液每次使用現(xiàn)用現(xiàn)配，如4℃放置過夜，可在使用前在23℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2h。4室內(nèi)離體抗性鑒定4．1鑒定室設(shè)置人工接種鑒定室應(yīng)具備人工調(diào)節(jié)溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發(fā)病環(huán)境。4．2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用山葡萄“雙優(yōu)（Shuangyou）”為抗病對(duì)照品種，“無(wú)核白（ThompsonSeedless）”為感病對(duì)照品種。4．3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)排列，針對(duì)同一個(gè)葡萄材料，鑒定試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次，每次重復(fù)10個(gè)葉片或者果實(shí)。接種4d后測(cè)量病斑面積，計(jì)算病情指數(shù)。4．4鑒定材料選擇從田間選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的葡萄當(dāng)年生新稍上第3-5節(jié)位健康無(wú)病完全展開的葉片或者發(fā)育一致的成熟果實(shí)。4．5接種方法及接種后管理在流水下輕柔地沖洗葉片或者果實(shí)15分鐘，再用無(wú)菌水清洗一次，晾干后插入到托盤內(nèi)含0.8%的水瓊脂培養(yǎng)基上。均勻一致地噴施適當(dāng)濃度的孢子懸浮液后，再將保鮮膜上噴一層薄薄的水霧后覆蓋托盤，以保持托盤內(nèi)濕度在90%以上。按照以上步驟噴施無(wú)菌水作為對(duì)照。放入23℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，前24h在黑暗條件下，接下來(lái)的時(shí)間按照12h光照/12h黑暗交替進(jìn)行。4．7最佳接種體和接種濃度用于葡萄灰霉病抗性鑒定的最佳接種體為直接由無(wú)菌水配制的孢子懸浮液，最佳接種濃度為1.5×106個(gè)孢子/mL。5田間抗性鑒定5．1鑒定葡萄園地設(shè)置鑒定葡萄園地應(yīng)具備適宜葡萄生長(zhǎng)的土壤、良好的光溫濕條件，使人工接種后具有良好的發(fā)病環(huán)境。5．2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用山葡萄“雙優(yōu)（Shuangyou）”為抗病對(duì)照品種，“無(wú)核白（ThompsonSeedless）”為感病對(duì)照品種。5．3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)選取，每個(gè)品種重復(fù)3次，每次重復(fù)10個(gè)葉片或者10個(gè)果穗。5．4鑒定材料選擇從田間選取當(dāng)年生葡萄新稍上第3-5節(jié)位健康無(wú)病完全展開的葉片或者生長(zhǎng)健康一致的成熟果穗或者果實(shí)。5．5接種方法及接種后管理配制孢子懸浮液（1.5×106個(gè)孢子/mL）用于接種，接種采用噴霧法。在陰涼無(wú)風(fēng)的天氣條件下，用手持噴霧器向葡萄葉片正反兩面、果穗或者果實(shí)均勻噴施孢子懸浮液直至有水滴滴出為止。接種后套袋保濕24h以利于發(fā)病。6病情級(jí)別與標(biāo)準(zhǔn)6．1調(diào)查時(shí)間室內(nèi)離體、田間病情調(diào)查分別于接種后4d、10d進(jìn)行。6．2病情分級(jí)室內(nèi)離體葉片病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表1。表1葡萄灰霉病室內(nèi)離體葉片病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述抗性類別縮寫類別0葉片無(wú)癥狀I(lǐng)免疫1病斑面積占葉片面積的5%以下HR高抗3病斑面積占葉片面積的6%～15%R抗病5病斑面積占葉片面積的16%～25%MR中抗7病斑面積占葉片面積的26%～50%S感病9病斑面積占葉片面積的50%以上HS高感室內(nèi)離體果實(shí)病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表2。表2葡萄灰霉病室內(nèi)離體果實(shí)病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述抗性類別縮寫類別0果實(shí)無(wú)病斑I免疫1病斑直徑小于0.1cmHR高抗3病斑直徑0.1cm～0.2cmR抗病5病斑直徑0.2cm～0.3cmMR中抗7病斑直徑0.3cm～0.4cmS感病9病斑直徑大于0.5cmHS高感田間病情分級(jí)及其對(duì)應(yīng)的癥狀描述見表3。表3葡萄灰霉病田間病情級(jí)別劃分病情級(jí)別癥狀描述抗性類別縮寫類別0葉片無(wú)病斑I免疫1單葉片有病斑3個(gè)HR高抗3單葉片有病斑4個(gè)～6個(gè)R抗病5單葉片有病斑7個(gè)～10個(gè)MR中抗7單葉片有病斑11個(gè)～20個(gè)，部分密集成片S感病9單葉片有病斑密集，占葉面積四分之一以上HS高感7抗性評(píng)價(jià)7．1鑒定有效性判別對(duì)照感病品種的抗性級(jí)別達(dá)到7級(jí)-9級(jí)，該批次抗灰霉病鑒定視為有效。7．2抗性評(píng)價(jià)7.2.1鑒定試驗(yàn)結(jié)果中，如有2次及以上的抗性類別是一致的，則此抗性類別作為最終鑒定結(jié)論。7.2.2鑒定試驗(yàn)結(jié)果中，同一鑒定葡萄材料的抗性類別，有2次及以上不一致時(shí)，需要進(jìn)行重復(fù)鑒定。在連續(xù)兩次鑒定試驗(yàn)中，如有4次及以上的抗性類別是一致的，則此抗性類別作為最終鑒定結(jié)論。7.2.3對(duì)于達(dá)到高度抗病的葡萄材料，需在第二年做重復(fù)鑒定。當(dāng)連續(xù)兩年鑒定抗性類別一致時(shí)，則此抗性類別作為最終鑒定結(jié)論。7.2.4同一鑒定葡萄材料連續(xù)兩年的抗性類別不一致時(shí)，則需要做第三次及以上抗性鑒定，按本標(biāo)準(zhǔn)7.2.1~7.2.3規(guī)則重新劃分抗性類別。

附錄A(資料性附錄)A．1病原物學(xué)名和形態(tài)描述葡萄灰霉病的病原為灰葡萄孢霉（BotrytiscinereaPers），屬于半知菌亞門。分生孢子梗細(xì)長(zhǎng)灰褐色，樹枝狀分枝，自寄主表皮、菌絲體或菌核長(zhǎng)出，密集成叢；孢子梗細(xì)長(zhǎng)分枝，淺灰色，大小為（280-550）微米×（12-24）微米，頂端細(xì)胞膨大呈圓形，上面生出許多小梗，小梗上著生分生孢子，大量分生孢子聚集成葡萄穗狀。分生孢子圓形或橢圓形，單胞，無(wú)色或淡灰色，大小為（9-15）微米×（6.5-10）微米，菌核黑色，長(zhǎng)圓形，1-2毫米，外部為疏絲組織，內(nèi)部為擬薄壁組織。A．2主要癥狀葡萄灰霉病主要危害花序、幼果和已經(jīng)成熟的果實(shí)，也可危害新梢、葉片和果梗等?；ㄋ攵嘣陂_花前發(fā)病，花序受害初期似被熱水燙狀，呈暗褐色，病組織軟腐，表面密生灰色霉層，被害花序萎蔫，幼果極易脫落；果梗感病后呈黑褐色，有時(shí)病斑上產(chǎn)生黑色塊狀的菌核；葡萄花后，果穗染病初呈淡褐色水浸狀，很快變?yōu)榘岛稚?，整個(gè)果穗軟腐，此期若遇陰雨，2-3天后果穗上長(zhǎng)出一層淡灰色霉層；果實(shí)在近成熟期感病，先產(chǎn)生淡褐色凹陷病斑，很快蔓延全果，使果實(shí)腐爛。發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，整穗或一部分果穗腐爛，其上長(zhǎng)出鼠灰色霉層，發(fā)病后果梗變黑色，后期病部長(zhǎng)出黑色塊狀菌核，最終擴(kuò)展后整穗長(zhǎng)滿霉層且果實(shí)全部腐爛。新梢葉片也能感病，產(chǎn)生不規(guī)則的褐色病斑，病斑有時(shí)出現(xiàn)不規(guī)則輪紋，潮濕時(shí)生有不規(guī)則灰霉層，一般每片葉有病斑2-5塊，嚴(yán)重時(shí)病部也能長(zhǎng)出鼠灰色霉層，最后干枯。葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程第6部分葡萄白腐病抗性鑒定1范圍《葡萄主要真菌病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程》第6部分：葡萄白腐病抗性鑒定，本部分規(guī)定了葡萄抗白腐病鑒定技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、病原物接種體制備、室內(nèi)離體抗性鑒定、田間抗性鑒定、病情調(diào)查、抗性評(píng)價(jià)和鑒定結(jié)果記載方法。本部分適用于各種葡萄種質(zhì)資源對(duì)葡萄白腐病抗性的鑒定和抗性評(píng)價(jià)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本部分。2．1病性pathogenicity病原物所具有的侵染寄主植物引起發(fā)病的能力。2．2抗病性diseaseresistance植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。2．3抗病性鑒定identificationofdiseaseresistance通過適宜技術(shù)方法鑒定植物對(duì)特定病害的抵抗水平。2．4抗性評(píng)價(jià)evaluationofresistance根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對(duì)特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的描述。2．5人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體接于植物體適當(dāng)部位并使植物發(fā)病過程。2．6病情級(jí)別diseaseratingscale植物個(gè)體或群體發(fā)病程度的量化描述。2．7分離物isolate采用人工方法從植物發(fā)病部位分離獲得的病原體的純培養(yǎng)物。2．8培養(yǎng)基medium可以使病原物生長(zhǎng)的自然或人工配制的基質(zhì)。2．9接種體inoculum用于接種以引起病害的病原物或病原物的一部分。2．10病情指數(shù)diseaseindex（DI）通過對(duì)植物個(gè)體發(fā)病程度（病情級(jí)別）數(shù)值的計(jì)算所獲得的群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述形式。2．11葡萄白腐病由白腐盾殼霉菌[Coniothyriumdiplodiella（Speq.）Sacc]引起的主要危害果穗導(dǎo)致果實(shí)腐爛，也危害新梢和葉片的葡萄病害。3病原物接種體制備3．1病原體分離采用單病斑分離法從發(fā)病葡萄果實(shí)的典型病斑上分離白腐病病原物。經(jīng)分離純化后，形態(tài)學(xué)鑒定為葡萄白腐盾殼霉菌(Coniothyriumdiplodiella)。3．2病原體培養(yǎng)葡萄白腐病病菌為葡萄專性寄生，可以離體培養(yǎng)，將病原菌接種于PDA固體培養(yǎng)基上，28℃下黑暗培養(yǎng)，3d后菌絲均勻分布，但未產(chǎn)生孢子，4℃保存?zhèn)溆谩?室內(nèi)離體抗性鑒定4．1鑒定室設(shè)置人工接種鑒定室應(yīng)具備人工調(diào)節(jié)溫度、濕度及光照的條件，使人工接種后具備良好的發(fā)病環(huán)境。4．2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用刺葡萄♂(Vitisdavidii)為抗病對(duì)照品種，歐亞種“美人指（ManicureFinger）”為感病對(duì)照品種。4．3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)排列，針對(duì)同一個(gè)葡萄材料，鑒定試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次，每次重復(fù)10個(gè)葉片。4．4鑒定材料選擇從田間選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的葡萄當(dāng)年生新稍上第3-5節(jié)位健康無(wú)病完全展開的葉片。4．5接種方法及接種后管理從田間小心取回生長(zhǎng)狀態(tài)良好的葡萄植株新稍上第3-5節(jié)位展開的葉片，每個(gè)處理取10個(gè)葉片。病原菌采用PDA固體培養(yǎng)基，28℃黑暗培養(yǎng)3-5d，菌絲塊接種到葉片正面，刺傷時(shí)避開葉片主脈，每個(gè)葉片接種1～4處，分布于葉片的不同位置，將接種后的葉片放入大培養(yǎng)皿的下底內(nèi)，上蓋覆浸濕但不滴水的濾紙，不能接觸葉片，封口膜密封保濕，28℃黑暗培養(yǎng)。5田間抗性鑒定5．1鑒定葡萄園地設(shè)置鑒定葡萄園地應(yīng)具備適宜葡萄生長(zhǎng)的土壤、良好的光溫濕條件，使人工接種后具有良好的發(fā)病環(huán)境。5．2鑒定對(duì)照品種鑒定時(shí)可選用刺葡萄♂(Vitisdavidii)為抗病對(duì)照品種，歐亞種“美人指（ManicureFinger）”為感病對(duì)照品種。5．3鑒定設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)選取，每個(gè)品種重復(fù)3次，每重復(fù)10個(gè)葉片或者10個(gè)果穗。5．4鑒定材料選擇從田間選取當(dāng)年生葡萄新稍上第3-5節(jié)位健康無(wú)病完全展開的葉片或者生長(zhǎng)健康