DB21T 2466-2015 禽流感病毒免疫層析(膠體金)檢測方法

ICS11.220B41DB21DB21/T2466—2015禽流感病毒免疫層析（膠體金）檢測方法Methodoftheimmunochromatogarphicassayforthedetectionofavianinfluenzavirus遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB21/T2466—2015本標準根據(jù)GB/T1.1-2009的有關(guān)規(guī)定進行制定。本標準由遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心提出。本標準由遼寧省畜牧獸醫(yī)局歸口。本標準由遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布。本標準負責(zé)起草單位：遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心、遼寧省動物醫(yī)學(xué)研究院。本標準起草人：李樹博、趙曉彤、金梅林、董曉輝、吳運譜、高志峰、于長泳、王志國、趙鵬、徐高原、王志勇1DB21/T2466—2015本標準規(guī)定了禽流感病毒免疫層析方法的材料設(shè)備、檢測樣品處理、檢測方法、判定標準、廢棄物處理。本標準適用于檢測禽排泄物、組織、雞胚尿囊液及細胞培養(yǎng)物中的禽流感病毒。本標準適用于生物安全二級實驗室操作。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T541-2002動物疫病實驗室檢驗采樣方法GB16548病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程GB/T16569畜禽產(chǎn)品消毒規(guī)范3材料設(shè)備3.1檢測卡禽流感病毒檢測試紙條裝在塑料卡中制成檢測卡，鋁箔密封，內(nèi)裝干燥劑，室溫或冷藏保存。測試卡結(jié)構(gòu)及測試部位如下圖所示。樣品孔（S）檢測區(qū)檢測線（T）質(zhì)控線（C）3.2樣品處理液TrisBase24.2g、Triton-x10010mL，加注射用水至1000mL，調(diào)pH值至9.0，過濾除菌，無菌分裝，1mL/管。2DB21/T2466—20153.3其他塑料吸管、棉拭子、高速冷凍離心機4檢測樣品處理4.1泄殖腔拭子檢測樣品的處理將收集的泄殖腔棉拭子插入到含有處理液的樣品管中，充分混合，使其充分洗脫，以2℃~8℃,12,000r/min離心10min，取上清待檢。4.2組織檢測樣品的處理稱取組織塊0.5g，置于勻漿器中，加生理鹽水1mL，研磨完全后取出組織浸出液，然后置2℃~8℃,12,000r/min離心10min，取上清4.3雞胚尿囊液樣品的處理尿囊液樣品以2℃~8℃,12,000r/min離心2min，取上清待檢。4.4細胞培養(yǎng)樣品的處理細胞培養(yǎng)液可直接用于檢測或者凍融一次后檢測。5檢測方法取適量的檢測樣品（80μL～120μL，滴管3滴～4滴），緩慢滴加到樣品孔中，當看到紅色液體在試紙條上移動時，放慢加樣速度。整個加樣過程控制在1min內(nèi)完成。加樣完成后將試紙條平放在桌面上，5min～30min內(nèi)觀察結(jié)果。6判定標準陽性結(jié)果：在試紙條上出現(xiàn)兩條紅色的條帶。陰性結(jié)果：在試紙條上僅在質(zhì)控線處出現(xiàn)一條紅色的條帶