DB2102T 0083-2023 小新月菱形藻藻種提純復(fù)壯技術(shù)規(guī)程　　

DB2102CodeofpracticeforpurificationandrejuvenationofNitzschiaclosterium大連市市場監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。歸口管理部門通訊地址：大連市海洋發(fā)展局（大連市西崗區(qū)長春路186號），聯(lián)系電話：），1小新月菱形藻藻種提純復(fù)壯技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了水產(chǎn)養(yǎng)殖用小新月菱形藻本文件規(guī)定了水產(chǎn)養(yǎng)殖用小新月菱形藻NitzschiaClosterium藻種（以下簡稱藻種）提純復(fù)壯的術(shù)語本文件適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖用小新月菱形藻等低溫硅藻的一級藻種提SC/T2047-2006水產(chǎn)養(yǎng)殖用海洋微藻保種操作DB21/T2777-2017海洋浮游微藻分離和篩選技術(shù)規(guī)程藻種細胞提純復(fù)壯purificationand24水質(zhì)和設(shè)施設(shè)備條件4.1水質(zhì)條件4.2設(shè)施設(shè)備4.2.14.2.1清洗設(shè)備4.2.2消毒設(shè)備4.2.3操作觀察設(shè)備和1ml移液器及配套槍頭，用于培養(yǎng)的一次性無菌培養(yǎng)皿（直徑90mm～100mm）和20ml～40ml玻璃試管（配有帶砂芯乳膠塞），試管架、20ml一次性無菌4.2.4培養(yǎng)保種設(shè)備5藻種培養(yǎng)液和固體培養(yǎng)基的配制5.1營養(yǎng)液配制5.1.1康威培養(yǎng)基（以下簡稱A液）、康威培養(yǎng)基a)配制A液時，將DB21/T2777-2017表A.5.1.2藻種培養(yǎng)用尿素溶液配方見5.2固體培養(yǎng)基用抗生素溶液配制5.3藻種擴繁用培養(yǎng)液配制滅菌海水冷卻后，按照1000：1體積比分別加入滅菌的康威營養(yǎng)液、康威培養(yǎng)基—硅酸鈉溶液和尿向100ml海水中加入0.8g～1g瓊脂粉，加熱至溶解制成瓊脂海水基質(zhì)，高壓滅菌后置超凈工作臺中，于室溫下冷卻至45℃~55℃時按照1000：1體積比分別添加滅菌的康威營養(yǎng)液、康威培養(yǎng)基—硅酸3鈉溶液、尿素溶液和抗生素溶液后搖勻，立即向一次性滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)倒入約20ml，使培養(yǎng)基鋪滿每個培養(yǎng)皿底部，靜止放置至培養(yǎng)基凝固后，倒置于超凈臺按照SC/T2047-2006中5.1.1規(guī)定的微藻分離、保存用海水按照SC/T2047-2006中5.1.1規(guī)定的微藻分離、保存用海水素溶液應(yīng)采用0.22μm孔徑無菌針筒式濾膜塑料器具應(yīng)采用121℃高壓蒸汽滅菌15min，滅菌后置于80℃恒溫箱烘干；玻璃器具應(yīng)用135℃恒溫環(huán)境溫度17℃~20℃,光照度3000Lux～6000Lux下培養(yǎng)2d。2h～4h后，固體培養(yǎng)基上液體被基本吸收后，用封口膜纏繞培養(yǎng)皿側(cè)面，適宜條件下（見7.1.1）培養(yǎng)固體培養(yǎng)基上的藻種細胞，25d～30d后，在固體培養(yǎng)基上長出1mm當固體培養(yǎng)基上長出大于1mm的藻種克隆時，應(yīng)將培養(yǎng)皿放置于4℃~6℃透光低溫展示柜保存，保4秋季，室溫下降至20℃時，對固體培養(yǎng)基上藻種細胞進行提純7.1.1）培養(yǎng)，同時進行多個藻種克隆的篩選培養(yǎng)，一個藻種克隆培養(yǎng)一管，不同藻種克