病理檢驗(yàn)技術(shù)（第3版）課件 第13章 電子顯微鏡技術(shù)

電子顯微鏡技術(shù)第十三章學(xué)習(xí)目標(biāo)1.了解電鏡的類型、基本結(jié)構(gòu)以及成像原理。2.熟練透射電鏡和掃描電鏡生物樣品制備技術(shù)、電鏡低溫制樣技術(shù)、電鏡細(xì)胞化學(xué)的基本方法以及免疫電鏡膠體金標(biāo)記技術(shù)。思維導(dǎo)圖第一節(jié)概述

電子顯微鏡，簡(jiǎn)稱電鏡，利用電子射線來代替可見光制成的顯微鏡。與光學(xué)顯微鏡比較光學(xué)顯微鏡以可見光為介質(zhì)，電子顯微鏡以電子束為介質(zhì)。電子顯微鏡的分辨率（約0.2納米）遠(yuǎn)高于光學(xué)顯微鏡的分辨率（約200納米）。光學(xué)顯微鏡的最大放大倍數(shù)約為2000倍，而現(xiàn)代電子顯微鏡最大放大倍數(shù)可達(dá)到百萬倍。電子顯微鏡購(gòu)買和維護(hù)的價(jià)格都比較高。第一節(jié)概述一電鏡的類型第一節(jié)概述二電鏡的基本結(jié)構(gòu)第一節(jié)概述三電鏡的成像原理掃描電鏡是用極細(xì)的電子束在樣品表面掃描，將產(chǎn)生的二次電子用特制的探測(cè)器收集，形成電信號(hào)運(yùn)送到顯像管，在熒光屏上顯示物體。透射電鏡是以電子束透過樣品經(jīng)過聚焦與放大后所產(chǎn)生的物像，投射到熒光屏上或照相底片上進(jìn)行觀察。

第二節(jié)透射電鏡與超薄切片技術(shù)一超薄切片術(shù)透射電鏡，即透射電子顯微鏡（TransmissionElectronMicroscope，簡(jiǎn)稱TEM），是使用最為廣泛的一類電鏡。由于電子易散射或被物體吸收，故穿透力低，必須制備更薄的超薄切片（通常為50～100nm）。

其制備過程與石蠟切片相似，但要求極嚴(yán)格。取材固定漂洗后固定脫水浸透聚合切片撈片和染色超薄切片機(jī)第一節(jié)透射電鏡與超薄切片技術(shù)二超薄切片染色技術(shù)常用的染色劑:醋酸鈾和檸檬酸鉛。染色方法：(1)組織塊染色在脫水至70%乙醇時(shí)，將組織塊放在用70%乙醇配制的飽和醋酸鈾溶液中，染色時(shí)間2小時(shí)以上，或在冰箱中過夜。

(2)超薄切片染色第三節(jié)掃描電鏡技術(shù)一掃描電鏡的工作原理掃描電鏡一種新型的電子光學(xué)儀器。它具有制樣簡(jiǎn)單、放大倍數(shù)可調(diào)范圍寬、圖像層次豐富、景深好等特點(diǎn)。紅細(xì)胞掃描電鏡圖第三節(jié)掃描電鏡技術(shù)

二掃描電鏡的標(biāo)本制備樣品的初步處理取材→清洗→固定→脫水→置換樣品的干燥掃描電鏡觀察樣品要求在高真空中進(jìn)行。無論是水或脫水溶液，在高真空中都會(huì)產(chǎn)生劇烈地汽化，不僅影響真空度、污染樣品，還會(huì)破壞樣品的微細(xì)結(jié)構(gòu)。因此，樣品在用電鏡觀察之前必須進(jìn)行干燥。樣品的導(dǎo)電處理

金屬鍍膜法第四節(jié)電鏡低溫制樣技術(shù)400目銅網(wǎng)第五節(jié)電鏡細(xì)胞化學(xué)技術(shù)基本原理基本要求基本步驟第六節(jié)免疫電鏡技術(shù)免疫電鏡技術(shù)是將電鏡的高分辨能力與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，在亞細(xì)胞水平上對(duì)抗原物質(zhì)進(jìn)行定位分析的一種高度精密而靈敏的方法。免疫鐵蛋白技術(shù)，免疫膠體金技術(shù)思考題1.