2025年染色體畸變檢測實驗報告微核技術(shù)分析

式，微核發(fā)生率用來反應(yīng)誘變物質(zhì)對生物的遺傳危本試驗采用大蒜作為試驗材料，具有許多長處：①用鱗莖進行無性增殖，防止了有性生殖過程中的遺傳性變異，具有遺傳背景穩(wěn)定的優(yōu)勢；②分布廣、材料易得，不受地區(qū)和季節(jié)的限制；③培萌生新根的數(shù)目較多；④價格低廉，對誘變劑敏感，是一種理想的試驗材料。類接觸到的有潛在遺傳毒性的物質(zhì)越來越多，其中一種較為突出的就是廢舊電池的污染。廢舊電池大的危害?？Х鹊闹匾煞譃榭Х纫?。德國生態(tài)學(xué)《okeo-test》的研究人員發(fā)現(xiàn)，他們所檢測的所有24種品牌的研磨咖啡和7個品牌的濃咖啡中都具有致癌物質(zhì)——丙烯酰胺。檢測成果發(fā)現(xiàn)，丙烯酰胺也存2.試驗材料與措施h,選擇根長整潔一致，不定根長約0.5-1cm左右的大蒜隨機分組。將試驗材料分為六組，放入8ml不一樣成分的培養(yǎng)液中，其中1組為陰性對照組，培養(yǎng)液為清水；2、3組為陽性對照組，培養(yǎng)液分別為25mmol/L、50mmol/LNaN3溶液；5——8組培養(yǎng)液分別為0.50g/ml濃度的咖啡和0.25g/ml濃度的咖啡以及分別添加2.5g和5.0g的電池內(nèi)部粉末。將培養(yǎng)皿中置于20攝氏度左右室溫下培養(yǎng)24h。陰性對照組陽性對照組1組咖啡咖啡電池電池(試驗組采用的誘變劑是NaN?,既是試驗組，又是陽性對照組)陰性對照(清水)試驗組(NaN)1組卡諾固定液中固定24小時，如不立即檢測可移至70%乙醇中4℃下保留。①根尖用1MHCl處理的10min,水洗3次。②切取近根尖分生區(qū)的伸長區(qū)組織，用改良苯酚品紅染色10min。③壓片：加上蓋玻片后，用鉛筆輕敲使細胞分散，最終垂直壓下去。每個根尖計數(shù)1000個細胞，記錄含微核的細胞數(shù)，然后取平均值，即為該處理的微核千分率。2.3成果圖1含微核的細胞(10*40)圖2含微核的細胞(10*40)圖31組(10*40)圖42組(10*40)圖53組(10*40)圖64組(10*40)圖53組(10*40)圖75組(10*40)圖86組、7組(10*40)2.3.2試驗成果分析與記錄組別陰性對照組陽性對照組1組3組5組咖啡咖啡2.5g電電池微核檢出09算根據(jù)數(shù)據(jù)我們發(fā)現(xiàn)，咖啡存在一定的致癌率，但致癌作用要弱于NaN。伴隨咖啡濃度的升高，試驗分析微核是由有有絲分裂過程中的染色體斷片，或絲分裂后期喪失著絲粒的染色體產(chǎn)生的，這些染微核的鑒定原則：①凡主核大小的三分之一如下的小核；②小核著色不管深淺；③小核形態(tài)可的伸長區(qū)中，壓片觀測此區(qū)域中的細胞呈正方弱；已知NaN3有很強的誘變作用，因此用25、50mmol/1的NaN3作為陽性對照組，其中50mmol/1的NaN3的根尖壓片中可觀測到大量微核，其數(shù)量是所有試驗組中最大的，其千分率幾乎為100%。試驗活動，使細胞分裂活動延緩或終止停止，甚至死亡，后來的試驗設(shè)計中必須牢記從圖中可看出，本次試驗壓片效果不是很好，對微核率的記錄及試驗成果導(dǎo)致影響。圖6中細胞輪廓不清晰，并且與周圍細胞對比可看出裝片中有多層細胞重疊的狀況，壓片時沒有使細胞充足分散開。雖然本次試驗不需觀測染色體，對壓片沒有那么高的規(guī)定，但仍舊不能松懈，要做到視野中單層細胞，且細胞不重疊，計數(shù)才能更精確，才能獲得很好的試驗成果。1.由于培養(yǎng)大蒜的時候，放的大蒜不夠多，導(dǎo)致長出根的大蒜相對較少，根的數(shù)量有限，難以進行多組試驗。2.敲片的力度一定要掌握好，不能過重，也不能過輕。力度過大會導(dǎo)致細胞破裂，無法觀測和計數(shù)具有微核的細胞。過輕會導(dǎo)致出現(xiàn)多層細胞重疊的現(xiàn)象，也影響微核的觀測與計數(shù)。3.NaNs見光會分解，因此在用溶液處理材料時，不要把培養(yǎng)皿放置在窗臺，最佳放置在恒溫箱中，以免對試驗產(chǎn)生誤差。4.后續(xù)試驗中，可以在本次試驗的基礎(chǔ)上，再設(shè)置不一樣濃度梯度的咖啡試驗組，并且分別處理不一樣的時間，來觀測對應(yīng)的成果，進行定量分析。而對于電池粉末組則應(yīng)當(dāng)在充足閱讀有關(guān)文獻的基礎(chǔ)上，重新設(shè)計合適的濃度梯度的試驗組。6.切取根尖時要精確，若切取組織過大，制片后視野中細胞過多，且多層，影響觀測；若過小，則丟失細胞。兩種狀況都會導(dǎo)致觀測到微核偏少的現(xiàn)象。我們切取的應(yīng)是根尖伸長區(qū)的細胞7.在解離之前和之后，均要用清水洗滌根尖，否則前者影響解離，后者影響染色。8.若誘變因子濃度較低，則微核較少；壓片時也許壓入雜質(zhì)，染液也也許產(chǎn)生沉淀，因此在壓片之后需要認真地進行鏡檢，不遺漏一種微核，也不把雜質(zhì)誤認為微核。本次試驗，我們成功的通過微核檢測技術(shù)評價咖啡誘變狀況，所后來來應(yīng)當(dāng)少喝咖啡，并且本次試驗我們雖然沒有成功的檢測電池浸出液的誘變作用，不過也可以從試驗中驗證廢舊電池對生物的巨大危害，這提醒我們此后一定