酶標(biāo)特染技術(shù)課件

宮頸異常細(xì)胞快速篩查試劑盒（FSC-811）合肥安旸生物醫(yī)藥有限公司二零一叁年叁月捌日HefeiAnyonBiopharmaceuticalsCo.,Ltd.酶標(biāo)特染技術(shù)酶標(biāo)特染技術(shù)癌細(xì)胞的代謝特征核酸代謝：合成DNA和RNA的聚合酶活性均較正常組織高，核酸分解過程明顯降低核酸增多是腫瘤迅速生長的物質(zhì)基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)代謝：腫瘤組織的蛋白質(zhì)合成及分解代謝都增強(qiáng)，但合成代謝超過分解代謝糖代謝：大多數(shù)正常組織在有氧時(shí)通過糖的有氧分解獲取能量，只有在缺氧時(shí)才進(jìn)行無氧糖酵解。腫瘤組織則即使在氧供應(yīng)充分的條件下也主要是以無氧糖酵解獲取能量。

酶系統(tǒng)：腫瘤組織酶活性的改變是復(fù)雜的。通常情況下，除個(gè)別酶外，酶的改變?cè)诓煌┘?xì)胞中是不同的。酶標(biāo)特染技術(shù)異常的酶表達(dá)腫瘤組織酶活性的改變是復(fù)雜的。除了一般在惡性腫瘤組織內(nèi)氧化酶（如細(xì)胞色素氧化酶及琥珀酸脫氫酶）減少和蛋白分解酶增加外，其他酶的改變?cè)诟鞣N腫瘤間各有不同，而且與正常組織比較只是含量的改變或活性的改變，并非是質(zhì)的改變。目前已發(fā)現(xiàn)多種酶類可作為腫瘤標(biāo)記物，臨床常用的有：

①γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)及同工酶②乳酸脫氫酶(LDH)③酸性磷酸酶（CervicalAcidPhosphatase，CAP）④神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）酶標(biāo)特染技術(shù)AfrHealthSci.2010;10(1):9–13酶標(biāo)特染技術(shù)宮頸癌的發(fā)生與人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染關(guān)系密切。分子和流行病學(xué)的研究表明絕大多數(shù)（90%以上）宮頸癌發(fā)病是由于暴露或接觸高風(fēng)險(xiǎn)類型的人乳頭狀瘤病毒（HPV）所致，后者的基因型共有14種，其中HPV16型、18型是超過70%宮頸癌患者的致病原。溶酶體在HPV感染中起著非常重要的作用。HPV與宮頸癌酶標(biāo)特染技術(shù)酸性磷酸酶（AcidPhosphatase，

ACP）是溶酶體的標(biāo)志性酶。研究發(fā)現(xiàn)，酸性磷酸酶可作為宮頸異常鱗狀上皮細(xì)胞的生物標(biāo)記物。最近的細(xì)胞分子實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示,HPV可誘導(dǎo)溶酶體的生成和增強(qiáng)溶酶體酶的活性。HPV的感染可能可以通過溶酶體的活性來反映。酶標(biāo)特染技術(shù)CAP在HeLa細(xì)胞中的表達(dá)酶標(biāo)特染技術(shù)酶標(biāo)特染技術(shù)安醫(yī)大一附院n(%)安徽省立醫(yī)院n(%)合計(jì)n(%)病例數(shù)16840208FSC-811陽性20(11.90)4(10.00)24(11.54)**確定陽性9(5.4%)3(7.5%)12(5.8%)敏感性100%100%100%特異性93.1%97.3%93.9%PAP陽性3(1.79)03(1.44)敏感性33.3%0%25%特異性100%100%100%TCT/LCT陽性1(0.61)1(2.50)2(0.99)敏感性11.1%33.3%16.7%特異性100%100%100%與PAP和TCT/LCT篩查方法比較，**p<0.001。FSC-811篩查宮頸異常細(xì)胞的臨床研究（2010年1月至5月）酶標(biāo)特染技術(shù)FSC-811產(chǎn)品的先進(jìn)性

（與TCT/LCT診斷方法的比較）FSC-811液基薄層細(xì)胞制片聯(lián)合巴氏染色（TCT/LCT）靈敏度正在進(jìn)行中的臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)其敏感度達(dá)到95-100%17-89%原理針對(duì)宮頸異常鱗狀上皮細(xì)胞中高活性的磷酸酶為特異性的標(biāo)志物進(jìn)行酶組織化學(xué)染色樣本經(jīng)稀釋過濾后制成單層細(xì)胞薄片，通過巴氏染色使細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰診斷基礎(chǔ)染色陽性的鱗狀上皮細(xì)胞，只要出現(xiàn)核增大或不典型，均可認(rèn)為是異常細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞核形態(tài)制片效果宮頸異常鱗狀上皮細(xì)胞胞漿呈明顯的紅色顆粒細(xì)胞均勻分布，形態(tài)保持較好讀片難度只針對(duì)酸性磷酸酶染色陽性的細(xì)胞進(jìn)行核型分析，不考慮陰性細(xì)胞。減少病理醫(yī)生50%以上的工作量根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞核形態(tài)做判讀，耗時(shí)較長操作難度操作簡單無需特殊設(shè)備，也可結(jié)合TCT需要專業(yè)的設(shè)備和技術(shù)酶標(biāo)特染技術(shù)與TCT相比技術(shù)性能優(yōu)勢主要體現(xiàn)在：檢測異常宮頸鱗狀上皮細(xì)胞中高表達(dá)的CAP，提高診斷的敏感性；CAP作用底物產(chǎn)生的紅色顆粒位于胞漿，結(jié)合常規(guī)核染色，不僅增加了觀察的可視性，同時(shí)使細(xì)胞信息最大化；該方法不僅用于常規(guī)涂片，也可用于液基制片，可大大縮短檢測時(shí)間和減少閱片工作量。酶標(biāo)特染技術(shù)FSCTCTHCII敏感性高低高特異性高高高準(zhǔn)確率高低高花費(fèi)時(shí)間/h14價(jià)格/元<200<200>350原理酸性磷酸酶染色，形態(tài)觀察巴氏染色，形態(tài)觀察DNA-RNA分子雜交與常用檢測方法比較酶標(biāo)特染技術(shù)實(shí)例酶標(biāo)特染技術(shù)FSC-811產(chǎn)品的創(chuàng)新性FSC-811沿著宮頸異常細(xì)胞中酸性磷酸酶活性改變這一特點(diǎn)，采用新思路開發(fā)的新技術(shù)、新配方產(chǎn)品，該項(xiàng)技術(shù)屬國內(nèi)首創(chuàng)。創(chuàng)新性主要體現(xiàn)在：FSC－811是目前國內(nèi)首個(gè)上市以檢測宮頸酸性磷酸酶來鑒別宮頸異常細(xì)胞的臨床診斷試劑首次將宮頸酸性磷酸酶檢測用于液基薄層制片中首次將“胞漿染色+胞核形態(tài)”引入宮頸細(xì)胞學(xué)診斷，使細(xì)胞信息最大化首次將酶化學(xué)染色用于分子水平臨床診斷酶標(biāo)特染技術(shù)FSC-811產(chǎn)品是完全由公司自主研發(fā)和生產(chǎn)的宮頸癌診斷新型試劑，是國內(nèi)外首個(gè)上市將酸性磷酸酶染色用于宮頸異常細(xì)胞或?qū)m頸癌診斷的試劑盒。公司擁有其全部知識(shí)產(chǎn)權(quán)和核心技術(shù)，并擁有持續(xù)開發(fā)的能力。

其中“宮頸異常細(xì)胞快速篩查方法”和“宮頸酸性磷酸酶的檢測方法及其應(yīng)用”已申請(qǐng)國家專利。專利包含酸性磷酸酶在宮頸異常細(xì)胞檢查中的應(yīng)用以及試劑盒配比、操作方法等核心技術(shù)。

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