(高清版)DB41∕T 2171-2021 牛妊娠診斷技術(shù)規(guī)程

41河南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 2 2 5 9本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1牛妊娠診斷技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了直腸檢查、超聲波診斷、妊娠相關(guān)糖蛋白（pregnancy-associatedglycoproteins,PAGs）檢測(cè)等牛妊娠診斷方法的操作技術(shù)規(guī)程。母牛妊娠后胎盤的滋養(yǎng)層雙核細(xì)胞與子宮上皮細(xì)胞融合后釋放的一種蛋白。一般最早可在妊娠4.1動(dòng)物準(zhǔn)備4.2人員準(zhǔn)備4.3排空蓄糞2操作人員直檢手手指并攏，以45°~60°角緩慢進(jìn)入直腸，排空蓄糞。4.4確定子宮頸位置4.5妊娠診斷跟蹤大小變化情況，從而確定母牛是否妊娠。妊娠期牛子宮變化應(yīng)符合附錄A的規(guī)4.6檢查結(jié)束5.1動(dòng)物準(zhǔn)備5.2人員準(zhǔn)備5.3排空蓄糞5.4開(kāi)機(jī)自檢按設(shè)備要求進(jìn)行預(yù)熱，根據(jù)B超儀屏幕影像質(zhì)量調(diào)節(jié)灰度、對(duì)比度、增益度及近場(chǎng)、遠(yuǎn)場(chǎng)5.5獲取影像妊娠狀況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，緊貼子宮不斷緩慢移動(dòng)調(diào)整探查角度，直至清晰影像出現(xiàn)。5.6妊娠診斷5.7檢查結(jié)束3采集配種28d后牛只血液并分離血清。采樣、運(yùn)輸過(guò)程應(yīng)符合NY用包被液將牛PAGs單克隆抗體稀釋至工作濃度，加入酶標(biāo)板孔中，每35ng），在2℃~8℃放置12h。每孔加入200μL的封閉液，置37℃孵育1h。按6.3.3規(guī)定操作。每孔加入50μL樣品緩沖液。分別將100μL標(biāo)準(zhǔn)品（A～F）和樣品加入到相蕩混勻。覆膜，37℃孵育60min或室溫（18℃~25℃)孵育90min。孵育后洗板，甩盡酶標(biāo)板內(nèi)液體，每孔加300μL洗滌液覆膜，37℃避光孵育60min或室溫（18℃~25℃)避光孵育90min。每孔加100μL底物溶液。勿覆膜，室溫（18℃~25℃)避光孵育30min。4），），0.99。根據(jù)樣品的OD值利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣被檢牛只PAGs檢測(cè)濃度＞1000pg/mL時(shí)，結(jié)果判斷為妊娠；PAGs檢測(cè)濃度＜300斷為空懷狀態(tài)；300pg/mL≤PAGs檢測(cè)濃度≤1000pg/mL時(shí)，結(jié)果判斷為高風(fēng)險(xiǎn)，存5(規(guī)范性)A.1未孕牛子宮卵巢均位于骨盆腔內(nèi)，2個(gè)子宮角大小相等，形狀相似，彎曲如綿A.2懷孕牛A.2.1初期：子宮變化不大，子宮壁有彈性，孕角側(cè)卵巢上有突出于卵巢表面的黃體，同時(shí)觀察是否圖A.1妊娠1個(gè)月子宮情況示例圖A.2妊娠2個(gè)月子宮情況示例6圖A.3妊娠3個(gè)月子宮情況示例A.2.54個(gè)月：子宮沉入腹腔，可清楚摸到子葉，體積稍小于卵巢(如黃豆大小),孕側(cè)子宮中動(dòng)脈較A.2.65個(gè)月：兩側(cè)卵巢全沉入腹腔，不能或只能摸到子宮的一部分，子葉更大(如蠶豆大小),孕側(cè)A.2.76個(gè)月：胎兒進(jìn)入腹腔，子葉更大(如鴿子蛋大小),子宮中動(dòng)脈粗大，孕脈明顯。A.2.87個(gè)月：子葉如核桃大，兩側(cè)子宮中動(dòng)脈均A.2.98個(gè)月：子葉更大，兩側(cè)中動(dòng)脈孕脈顯著,胎兒上移。7(規(guī)范性)B.1各時(shí)期B型超聲波子宮切面示例出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)規(guī)則的孕囊暗區(qū)或者胎兒骨骼影像即可確認(rèn)為早孕陽(yáng)性(圖B.2),否則為早孕陰圖B.3妊娠第27dd8圖B.6妊娠第43d圖B.8妊娠第66d將下列試劑按次序加入1000mL規(guī)格的容器中，加入800mL蒸餾水充分溶解或1mol/L氫氧化鈉（NaOH）調(diào)節(jié)至pH7包被液為碳酸鹽緩沖液（0.025mol/L，pH9.6）。將下列試劑按次序加入1000mL規(guī)格的容器中，加入800mL蒸餾水充分溶解，用1mol/L鹽酸（HCl）或1mol/L氫氧化鈉（NaOH）調(diào)節(jié)至p