DB4505T 0009-2023 島礁石斑魚(yú)資源養(yǎng)護(hù)技術(shù)規(guī)范

4505TechnicalspecificationforrI 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 4 5A.1抽樣 5 5 5 5A.5魚(yú)類物種鑒定 5 8本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定廣西精工海洋科技有限公司、湛江市東海島東方實(shí)業(yè)有1島礁石斑魚(yú)資源養(yǎng)護(hù)技術(shù)規(guī)范GB/T12763.9海洋調(diào)查規(guī)范第9部分：海洋生態(tài)調(diào)GB/T18654.2養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn)第2部分：SC/T9401.4水生生物增殖放流技術(shù)規(guī)程第SC/T9401.6水生生物增殖放流技術(shù)規(guī)程第6部SC/T9401.7水生生物增殖放SC/T9401.11水生生物增殖放流技術(shù)規(guī)程第11部分：投放SC/T9403.5海洋漁業(yè)資源調(diào)查規(guī)范第5部分：SC/T9405.5島礁水域生物資源調(diào)查評(píng)估技術(shù)規(guī)范第5部分：礁棲SC/T9405.7島礁水域生物資源調(diào)查評(píng)估技術(shù)規(guī)范第7部分SC/T9417.4人工魚(yú)礁資源養(yǎng)護(hù)效果評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范SC/T9417.5人工魚(yú)礁資源養(yǎng)護(hù)效果評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范礁棲石斑魚(yú)reef-inhabitingg生物資源養(yǎng)護(hù)biologicalresourceconserv24海域選擇4.1養(yǎng)護(hù)礁棲石斑魚(yú)資源的島礁海域應(yīng)符合國(guó)家和地方的國(guó)土空間規(guī)劃、旅游規(guī)劃、漁業(yè)發(fā)展規(guī)劃和4.2根據(jù)島礁環(huán)境特點(diǎn)，結(jié)合歷史資料、捕撈生產(chǎn)信息以及資源生態(tài)環(huán)境的本底調(diào)查結(jié)果，針對(duì)不同4.3養(yǎng)護(hù)海域應(yīng)符合SC/T9401.4的規(guī)定，且滿足下述條件：島礁為巖礁，水流較緩且附近底質(zhì)起伏而又多石礫；溶解氧≥5mg/L,鹽度22～35。5調(diào)查與評(píng)估5.1按照SC/T9405.5規(guī)定的方法5.2按照SC/T9417.5規(guī)定的方法和內(nèi)容對(duì)擬進(jìn)行資源養(yǎng)護(hù)海域的底質(zhì)和水文狀況等環(huán)境要素進(jìn)行調(diào)5.3按照GB/T12763.9規(guī)定的方法對(duì)擬進(jìn)行資源養(yǎng)護(hù)海域的海洋生物群落結(jié)構(gòu)、海洋生態(tài)系統(tǒng)功能6養(yǎng)護(hù)方法6.1魚(yú)種選擇根據(jù)目標(biāo)海域的功能定位和海域環(huán)境，選擇目標(biāo)海區(qū)及其周邊海區(qū)現(xiàn)有或歷史上存在的石斑魚(yú)種鰓棘鱸(Plectropomusleopardus)為目標(biāo)種類。b)性腺發(fā)育良好、雌性親魚(yú)腹部膨大且柔軟，輕壓雄性親魚(yú)腹部能流出乳白色精液；c)反應(yīng)靈敏、活力好。36.3苗種投放培育苗種的親魚(yú)應(yīng)捕自天然海區(qū)或是原種場(chǎng)保種的原生種繁殖的F1代，不得使用近親繁殖親魚(yú)的8效果評(píng)估8.1環(huán)境要素按照本文件5.2中環(huán)境要素的調(diào)查和評(píng)估方法對(duì)石斑魚(yú)資源養(yǎng)護(hù)海域的底8.2生物要素8.3生態(tài)壓力按照本文件5.3中的評(píng)估方法對(duì)石斑魚(yú)資源養(yǎng)護(hù)海域的海洋生物群落結(jié)構(gòu)8.4漁業(yè)生產(chǎn)要素按照SC/T9405.7規(guī)定的方法對(duì)各類作業(yè)的努力量、漁4應(yīng)定期巡查石斑魚(yú)資源養(yǎng)護(hù)海域，防止非法捕撈養(yǎng)護(hù)區(qū)的石5積物處取1L海水，重復(fù)取樣3次，1L去離子水作為對(duì)照。A.3保藏A.5魚(yú)類物種鑒定A.5.1用于魚(yú)類鑒定的條形碼用于魚(yú)類屬、種鑒定的條形碼為12SrRNA基因，片段長(zhǎng)度為163bp～18MiFish-U-F：5’-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNGTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3’MiFish-U-R：5’-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTNNNNNNCATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3’在上述兩條引物中，前面的33個(gè)和34個(gè)核苷酸（nt）部分為高通量測(cè)序引物的結(jié)合位點(diǎn)，隨后的6個(gè)隨機(jī)引物（NNNNNN，如AAGGTT）用于促進(jìn)測(cè)序平臺(tái)流動(dòng)池（flowcell）DNA簇的分離，最后的21個(gè)和5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAXXXXXXXXACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT-3’在上述兩條引物中，8個(gè)連續(xù)X堿基代表Illumila測(cè)序技術(shù)通用的Index序列，可以用于區(qū)分不同樣連續(xù)X堿基后面的3’端序列是Illumila測(cè)6延伸15s，共30個(gè)循環(huán)；72℃再延伸5min。將第一輪PCR產(chǎn)物稀釋10倍作為第二輪PCR模板，PCR體系的A.5.5測(cè)序A.5.6石斑魚(yú)屬、種鑒定A.5.6.1序列聚類采用生物信息學(xué)軟件FastQC、Cutadapt和USEARCH，對(duì)原始測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量進(jìn)行分析并去除低質(zhì)量數(shù)據(jù)。采用QIIME2分析軟件，在97％的序列相似水平下，對(duì)高質(zhì)量的eDNA測(cè)序序列數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類，去A.5.6.2物種注釋通過(guò)序列比對(duì)方法，將所有的分類單元數(shù)據(jù)與已知物種的核糖體RNA序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行序列比對(duì)，從A.5.6.3分類鑒定A.5.7特定石斑魚(yú)屬、種的相對(duì)豐度計(jì)算A.5.7.1特定石斑魚(yú)屬的相對(duì)豐度為特定石斑魚(yú)屬序列條數(shù)占全部魚(yú)類序列條數(shù)的百分比，計(jì)算見(jiàn)公=(?)×100%······································Rg——特定石斑魚(yú)屬相對(duì)豐度，用％表示；7A.5.7.2特定石斑魚(yú)種的相對(duì)豐度為特定石斑魚(yú)種序列條數(shù)占全部魚(yú)類序列條數(shù)的百分比，計(jì)算見(jiàn)公=(?)×100%·····························································(A.2)Rs——特定石斑魚(yú)種相