DB51T 1077-2010 飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測定 高效液相色譜法　　

備案號：28167-2010DB51DB51/T1077—2010飼料中黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?的測定2010-06-01發(fā)布2010-07-01實(shí)施I 12規(guī)范性引用文件 1 14試劑和溶液 15儀器與設(shè)備 1 27分析步驟 28結(jié)果計(jì)算 29精密度 3附錄A(資料性附錄) 4DB51/T1077-2010本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省畜牧食品局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省飼料工作總站負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：柏凡、張靜、李云、馮婭、甄陽光、趙立軍。1DB51/T1077-2010飼料中黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?的測定高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測飼料中黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?的含量的高效液相色譜法(HPLC)。本標(biāo)準(zhǔn)中黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?的檢出限分別為2.0μg/kg、0.8μg/kg、2.5μg/kg、1.5μg/kg。下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3原理衍生-熒光檢測器檢測，外標(biāo)法計(jì)算黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?含量。4.6甲醇-水(70+30)提取液：量取甲醇700mL,加水300mL,混勻。液黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?濃度分別為200μg/L、50μg/L、200μg/L、50μg/L,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期6個(gè)月。的濃度為1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L,黃曲霉毒素B?、G?的濃度為0.25μg/L、0.50μg/L、1.25μg/L、2.50μg/L、5.00μg/L、12.50μg/L,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效25.1分析天平：感量0.1mg。5.2振蕩器。5.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速為5000r/min以上。5.4超純水處理器。5.5渦旋混合器。5.6高效液相色譜儀：配備熒光檢測器。5.7柱后光化學(xué)衍生器。5.8氮吹儀。5.90.45μm濾膜。6試樣制備按GB/T14699.1規(guī)定采集試樣后，按GB/T20195規(guī)定，選取具有代表性的實(shí)驗(yàn)室樣品1kg,四分法縮減分取200g左右，粉碎過1mm孔篩，混勻裝入磨口瓶中備用。7分析步驟7.1試樣溶液的制備稱取25g試樣(精確至0.01g)于錐形瓶中，加入125mL甲醇-水(70+30)提取液(4.6),振蕩提取40min,離心，取上清液過濾，準(zhǔn)確量取濾液10mL,加入30mLPBS(4.7)稀釋，混勻，待凈化。取10mLPBS活化小柱，將上述10mL提取液以1-2滴/秒的速度通過免疫親和柱，用10mLPBS(4.7)水淋洗，抽干柱子，用1mL甲醇(4.1)洗脫。洗脫液60℃氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確加入流動(dòng)相(7.2.3)1.0mL,渦旋30s,過0.45μm濾膜，上機(jī)測定。7.2色譜條件或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。7.2.2柱溫：30℃。7.2.4流速：1.0mL/min。7.2.5檢測器：熒光檢測器，Ex:370nm,Em:450nm。按上述色譜條件，分別將標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液上級測定，按照保留時(shí)間進(jìn)行定性，單點(diǎn)或多點(diǎn)校正外標(biāo)法定量。8結(jié)果計(jì)算試樣中黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?的含量X,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)微克每千克(μg/kg)表示，單點(diǎn)校正按式(1)計(jì)算：……(1)式中：V——上機(jī)定容體積，單位為毫升(mL);As——黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的色譜峰面積；A——試樣溶液對應(yīng)的色譜峰面積；Cs——黃曲霉毒素B?、B?、G?、G?標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度，單位為微克每升(μg/L);3DB51/T1077-2010m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);n——稀釋倍數(shù)。結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。9精密度在