2025年高考生物復(fù)習(xí)之小題狂練300題（解答題）：現(xiàn)代生物技術(shù)及應(yīng)用（10題）

第1頁(yè)（共1頁(yè)）2025年高考生物復(fù)習(xí)之小題狂練300題（解答題）：現(xiàn)代生物技術(shù)及應(yīng)用（10題）一．解答題（共10小題）1．黑水虻是重要的資源昆蟲(chóng)，體內(nèi)H基因編碼的抗菌肽HI﹣3具有抗菌、抗癌和免疫調(diào)節(jié)作用。科研人員利用酵母菌生產(chǎn)抗菌肽HI﹣3，并避免基因污染。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增H基因，需根據(jù)H基因設(shè)計(jì)兩種引物，引物的作用有。A．為T(mén)aq酶提供結(jié)合位點(diǎn)B．決定擴(kuò)增產(chǎn)物大小C．決定反應(yīng)的特異性D．決定變性時(shí)間（2）已知H基因編碼鏈的編碼區(qū)序列是：5′﹣CTCGAGATGCTGCAG………GGATCCTC﹣TAGA﹣3′，擴(kuò)增H基因的編碼區(qū)段時(shí)，結(jié)合到編碼鏈上的引物序列是（方向?yàn)?′→3′，寫(xiě)出5′端8個(gè)堿基序列）。獲得H基因產(chǎn)物后需要進(jìn)行凝膠電泳，將符合要求的條帶以便提取純化并進(jìn)行測(cè)序。（3）由于抗菌肽HI﹣3會(huì)損傷酵母細(xì)胞，組成型表達(dá)（持續(xù)表達(dá)）H基因的酵母菌最大種群數(shù)量偏低，限制了最終產(chǎn)量。科研人員通過(guò)構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動(dòng)子來(lái)降低抗菌肽HI﹣3對(duì)酵母菌的傷害。在酵母菌基因組DNA中插入P和S基因，使質(zhì)粒上H基因的表達(dá)受紅光控制。紅光調(diào)控H基因表達(dá)的原理如圖1所示。P和S基因表達(dá)應(yīng)為（從“組成型表達(dá)”“紅光誘導(dǎo)型表達(dá)”選填）。紅光調(diào)控H基因表達(dá)的原理是S基因指導(dǎo)合成的S蛋白直接與啟動(dòng)子Jub結(jié)合，P基因表達(dá)的P蛋白在，啟動(dòng)H基因的表達(dá)過(guò)程。（4）發(fā)酵后菌體和產(chǎn)物分離是發(fā)酵工藝的基本環(huán)節(jié)。定位于細(xì)胞表面的F蛋白可使酵母細(xì)胞彼此結(jié)合，進(jìn)而沉淀在發(fā)酵罐底部?？蒲腥藛T引入藍(lán)光激活系統(tǒng)如圖2，在酵母菌基因組中插入了兩個(gè)均能合成E蛋白的基因（E1、E2），使F基因的表達(dá)受到藍(lán)光控制如圖3。圖3中E2基因持續(xù)性表達(dá)少量的E蛋白時(shí)，酵母細(xì)胞具有接受藍(lán)光刺激的能力，E1基因的作用是。（5）制藥過(guò)程中需避免工程菌泄露到環(huán)境中引發(fā)基因污染。科研人員利用兩種阻遏蛋白基因（T和L）和調(diào)控元件，使酵母細(xì)胞在紅光和藍(lán)光同時(shí)照射時(shí)才激活致死基因N的表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)工程菌死亡，如圖4。若圖中①選用的啟動(dòng)子為Jub，②處選用的啟動(dòng)子為CYC，則③④處結(jié)合的阻遏蛋白分別為。（6）請(qǐng)結(jié)合上述分析，利用該工程菌發(fā)酵生產(chǎn)抗菌肽HI﹣3各階段需控制的光照條件是：Ⅰ菌種培養(yǎng)階段；Ⅱ菌種發(fā)酵階段；Ⅲ產(chǎn)物分離階段；Ⅳ安全處理階段紅光、藍(lán)光同時(shí)照射。2．研究發(fā)現(xiàn)，人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品?？茖W(xué)家培育出轉(zhuǎn)入溶菌酶基因山羊，以大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶（從乳汁中提?。^(guò)程如圖所示，其中編號(hào)①～⑨表示過(guò)程。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）圖中轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)人溶菌酶運(yùn)用了等（至少填3項(xiàng)）現(xiàn)代生物工程技術(shù)。（2）過(guò)程①使用PCR技術(shù)在體外擴(kuò)增hLZ基因，擴(kuò)增時(shí)需要種引物。過(guò)程③形成重組質(zhì)粒需要的限制酶是。（3）將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入山羊成纖維細(xì)胞后，篩選出含重組質(zhì)粒的山羊胎兒成纖維細(xì)胞，用到的質(zhì)粒S中標(biāo)記基因?yàn)?。⑥過(guò)程未受精的卵母細(xì)胞去核過(guò)程中，去除的“核”實(shí)際上是。（4）過(guò)程⑧體外培養(yǎng)得到早期胚胎，應(yīng)在時(shí)期進(jìn)行胚胎的移植。此外，移植前要進(jìn)行性別鑒定和遺傳病篩選等，要從胚胎的細(xì)胞取樣。為檢測(cè)過(guò)程⑨得到的轉(zhuǎn)基因山羊是否成功，最簡(jiǎn)單的方法是。3．“中天楊”是由我國(guó)科學(xué)家采用生物轉(zhuǎn)基因技術(shù)，歷經(jīng)8年時(shí)間培育成功的抗鹽堿、耐干旱的楊樹(shù)新品種。該品種以八里莊楊為實(shí)驗(yàn)材料，經(jīng)轉(zhuǎn)mtl﹣D基因培育獲得。如圖為培育“中天楊”的操作流程，①～⑥表示操作過(guò)程，該過(guò)程中可能用到的限制酶如表所示。回答下列問(wèn)題。注：Ti質(zhì)粒中的Tetr為四環(huán)素抗性基因，Ampr為氨節(jié)青霉素抗性基因。限制酶BclⅠEcoRⅠXbaⅠSau3AⅠBamHⅠ切割位點(diǎn)T↓GATCAG↓AATTCT↓CTAGA↓GATCG↓GATCC（1）與雜交育種相比，基因工程育種的優(yōu)點(diǎn)有（填序號(hào)）。①操作方法簡(jiǎn)便②目的性強(qiáng)，能定向改造生物性狀③育種周期短④不受生殖隔離限制，能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙⑤安全性高，對(duì)生態(tài)沒(méi)有威脅（2）過(guò)程①需要的酶是，過(guò)程②需要的工具酶是。（3）采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，在PCR反應(yīng)體系中需加入引物，引物的作用是，若目的基因擴(kuò)增3代，則共用引物個(gè)。PCR完成以后，常采用法來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。（4）培育轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)的核心工作是，在進(jìn)行該工作時(shí)，應(yīng)在mtl﹣D基因的兩側(cè)添加限制酶的識(shí)別序列。（5）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞除圖示方法外，還有。為了確認(rèn)目的基因在植物細(xì)胞中是否成功表達(dá)，從分子水平通常使用法進(jìn)行檢測(cè)。4．如圖為單克隆抗體制備流程示意圖。據(jù)圖回答問(wèn)題：（1）給小鼠注射抗原后使其產(chǎn)生分泌相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞準(zhǔn)確地說(shuō)是一種細(xì)胞，此過(guò)程屬于特異性免疫中的免疫。（2）制備單克隆抗體過(guò)程中要用到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合技術(shù)，利用這種方法所得的雜交瘤細(xì)胞的主要特點(diǎn)是。（3）在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，一般會(huì)出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)和現(xiàn)象；培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、促生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，此外還要加入；培養(yǎng)時(shí)要向培養(yǎng)液中通入95%的空氣和5%的CO2的混合氣體，其中通入空氣的原因是。（4）細(xì)胞融合是隨機(jī)的過(guò)程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是，而為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到7～10個(gè)細(xì)胞/mL，每孔滴入0.1mL細(xì)胞稀釋液，其目的是。5．米諾環(huán)素（分子式：C23H27N3O7）是一種四環(huán)素類(lèi)抗生素，一般用于人類(lèi)疾病治療和畜禽養(yǎng)殖。米諾環(huán)素進(jìn)入人體或動(dòng)物體內(nèi)后不能完全被吸收，其進(jìn)入環(huán)境后會(huì)在環(huán)境中殘留，造成環(huán)境污染。某研究人員在自然水域中通過(guò)篩選和分離得到了一種米諾環(huán)素高效降解菌DM13，并對(duì)該菌進(jìn)行了相關(guān)研究。如表是相關(guān)過(guò)程中使用的培養(yǎng)基種類(lèi)及培養(yǎng)基配方，回答下列問(wèn)題。培養(yǎng)基種類(lèi)配方BPM培養(yǎng)基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g，蒸餾水定容至1000mLBPMA培養(yǎng)基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂25.0g，蒸餾水定容至1000mL無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基MgSO4?7H2O0.15g、FeSO4?7H2O0.01g、CaCl20.02g、KH2PO41g、Na2HPO41g、NH4NO31g、葡萄糖0.5g，蒸餾水定容至1000mL（1）培養(yǎng)基的配制：按配方通過(guò)計(jì)算、稱(chēng)量、溶解等步驟配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后使用。（2）擴(kuò)大培養(yǎng)：在BPM培養(yǎng)基中添加一定濃度的，對(duì)采集的水樣中的微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng)，該物質(zhì)可以為微生物生長(zhǎng)提供。（3）分離高效降解菌：用法接種經(jīng)上述選擇培養(yǎng)得到的微生物，該步驟選擇的培養(yǎng)基為（填“BPM”“BPMA”或“無(wú)機(jī)鹽”）培養(yǎng)基。（4）測(cè)定降解效果：為了測(cè)定菌株DM13在自然水體中降解米諾環(huán)素的效果，應(yīng)該用配制四種不同初始質(zhì)量濃度的米諾環(huán)素溶液。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：①8h處理后，在米諾環(huán)素溶液初始質(zhì)量濃度為100μg/L的水體中，空白對(duì)照組測(cè)得的米諾環(huán)素溶液質(zhì)量濃度為41.8μg/L，加入菌株DM13的實(shí)驗(yàn)組測(cè)得的質(zhì)量濃度為24.3μg/L，相較于空白對(duì)照組，米諾環(huán)素降解菌DM13的降解率為（用百分?jǐn)?shù)表示，保留一位小數(shù)）。②為了測(cè)定菌株DM13的實(shí)際降解效果，可選擇表中的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基替換自然水體，這樣做的目的是。6．科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過(guò)乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路線(xiàn)如圖。請(qǐng)據(jù)圖回答：（1）B代表的技術(shù)是，C代表。由過(guò)程①獲得的A為，其組成成分一般包括。（2）在B之前，D的操作是，目的是。受體應(yīng)選用期的卵母細(xì)胞。（3）進(jìn)行C時(shí)，應(yīng)該選擇身體健康的代孕母羊，并進(jìn)行處理。由于代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。（4）采用綿羊胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆，理論上可獲得無(wú)數(shù)只轉(zhuǎn)基因綿羊，其原因是。（5）由重組細(xì)胞到轉(zhuǎn)基因綿羊的培育成功，體現(xiàn)了。7．生物合成基因簇（BGC）是一類(lèi)非常重要的基因集合類(lèi)型。普遍存在于各類(lèi)生物基因組中，并且發(fā)揮著重要的代謝和調(diào)控作用。CRISPR/Cas介導(dǎo)的切割可以發(fā)生在任意的DNA位點(diǎn)。阿卡波糖為一種新型口服降血糖藥，在腸道內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)性抑制葡萄糖甙酶，可降低多糖的分解，減緩吸收。已知阿卡波糖生物合成基因簇全長(zhǎng)大約41kb，克隆阿卡波糖生物合成基因簇過(guò)程如圖所示。回答下列問(wèn)題：（1）現(xiàn)在常用技術(shù)快速特異性地?cái)U(kuò)增目的基因，利用該方法進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)所需的引物需要滿(mǎn)足的條件是。（2）圖1中Cas9酶能催化鍵水解，在構(gòu)建重組DNA時(shí)，通常選擇（填“改造”或“未改造”）的質(zhì)粒作為載體，經(jīng)過(guò)酶處理后形成重組DNA。為提高獲得重組DNA的效率，下列需要考慮的因素有（填序號(hào)）。A．適宜的外界條件B．目的基因簇和質(zhì)粒濃度C．DNA連接酶活性D．質(zhì)粒的純度（3）酵母菌的純培養(yǎng)一般采用（填培養(yǎng)基名稱(chēng)）培養(yǎng)基。（4）步驟④進(jìn)行篩選的方法是：。8．三白草和魚(yú)腥草是同科不同屬的兩種藥用植物，二者因療效相近且具有疊加效應(yīng)常被用作“藥對(duì)”。科研人員將復(fù)方的配伍（兩種或兩種以上藥物配合使用）用到個(gè)體生長(zhǎng)或生產(chǎn)過(guò)程，并實(shí)現(xiàn)有效成分的工廠(chǎng)化生產(chǎn)的具體操作如圖1，進(jìn)一步研究不同的原生質(zhì)體密度對(duì)三白草和魚(yú)腥草原生質(zhì)體融合率的影響，結(jié)果如圖2。（1）圖1中①過(guò)程通過(guò)酶解法去除獲取原生質(zhì)體，并向三白草和魚(yú)腥草細(xì)胞酶解液中分別加入紅、綠熒光色素（帶熒光色素的原生質(zhì)體仍能融合和再生）。過(guò)程②利用化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)融合，隨后在熒光顯微鏡下選擇帶的雜種原生質(zhì)體。（2）由圖2可知，促進(jìn)三白草和魚(yú)腥草原生質(zhì)體融合的最適密度為個(gè)/mL。（3）通常情況下，能增加免疫器官的重量表明該物質(zhì)具有一定的增強(qiáng)免疫力的作用。為判斷融合體對(duì)動(dòng)物免疫力的影響，科研人員取同種小鼠30只，雌雄各半，隨機(jī)均分為三組，實(shí)驗(yàn)處理如表。組別A組B組C組（空白對(duì)照組）實(shí)驗(yàn)處理三白草和魚(yú)腥草雜種愈傷組織的蒸餾水提取物三白草和魚(yú)腥草直接混合后的蒸餾水提取物每天一次等量灌胃，連續(xù)一周，檢測(cè)各組小鼠的胸腺重量①表格中C組的實(shí)驗(yàn)處理為。②若實(shí)驗(yàn)結(jié)果為，則支持利用原生質(zhì)體融合技術(shù)將復(fù)方的配伍提前并實(shí)現(xiàn)有效成分的工廠(chǎng)化生產(chǎn)。9．毒物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子S在毒物誘導(dǎo)下可啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。研究人員將PCR擴(kuò)增得到的毒物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子S（如圖2，圖中箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向）插入圖1載體的P區(qū)，構(gòu)建表達(dá)載體并轉(zhuǎn)入大腸桿菌，獲得能夠檢測(cè)水中毒物的大腸桿菌M。回答下列問(wèn)題：（1）基因中啟動(dòng)子是識(shí)別和結(jié)合的部位。（2）切割質(zhì)粒載體最好用兩種限制酶，而啟動(dòng)子S上不含有這些限制酶的酶切位點(diǎn)，需要在引物上添加。圖2中引物I、Ⅱ分別加入限制酶的識(shí)別序列。（3）表達(dá)載體的P區(qū)有一段核苷酸序列為“5′﹣ATCTCGAGCGGG﹣3′”，則對(duì)該序列進(jìn)行剪切的XhoⅠ（酶切后產(chǎn)生黏性末端）識(shí)別的核苷酸序列（6個(gè)核苷酸）最可能為。（4）用處理大腸桿菌，便于轉(zhuǎn)入構(gòu)建好的表達(dá)載體?？梢允褂锰砑拥呐囵B(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)入載體的菌株。（5）請(qǐng)寫(xiě)出利用大腸桿菌M檢測(cè)水體是否被毒物污染的實(shí)驗(yàn)思路，并預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論。實(shí)驗(yàn)思路：。預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論：。10．轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以改善作物品質(zhì)、提高作物產(chǎn)量，減少農(nóng)藥使用量，在解決糧食需求和保障農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展等方面發(fā)揮重要作用。但是轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在種子公司轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專(zhuān)利保護(hù)問(wèn)題，還存在外源基因通過(guò)花粉和種子等途徑在種群之間漂移擴(kuò)散、帶來(lái)生態(tài)安全隱患以及人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性擔(dān)憂(yōu)的問(wèn)題。科學(xué)家采用葉綠體轉(zhuǎn)基因、“終結(jié)者”種子、“外源基因清除”技術(shù)試圖解決上述問(wèn)題。（1）轉(zhuǎn)基因技術(shù)能按照人們的愿望，賦予生物新的，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，轉(zhuǎn)基因技術(shù)是在DNA分子水平上進(jìn)行的設(shè)計(jì)和施工，其核心步驟是。（2）“終結(jié)者”種子技術(shù)是通過(guò)植入“終結(jié)者基因”，阻滯種子胚胎后期發(fā)育，最后得到成熟但不育的種子。“終結(jié)者”種子技術(shù)在一定程度上解決了轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在的問(wèn)題，但危害到了農(nóng)民自行留種的權(quán)利，也不能消除人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性的擔(dān)憂(yōu)。（3）“外源基因清除”技術(shù)將“外源基因清除”調(diào)控組件與基因表達(dá)載體的必備組件重組后構(gòu)建出新的基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中表達(dá)，待外源基因完成相應(yīng)的功能后，“外源基因清除”調(diào)控組件將全部外源基因從花粉、種子和果實(shí)等特定器官中徹底清除?！巴庠椿蚯宄闭{(diào)控組件由“特定器官特異啟動(dòng)子、重組酶（FLP）基因和融合識(shí)別位點(diǎn)（LF）”構(gòu)成，LF是利用噬菌體的Cre/LoxP系統(tǒng)和酵母的FLP/FRT系統(tǒng)創(chuàng)造出的融合識(shí)別位點(diǎn)。FLP基因在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間和空間表達(dá)后，重組酶FLP可識(shí)別融合識(shí)別位點(diǎn)LF并在L與F之間完成切割，從而將兩個(gè)融合識(shí)別位點(diǎn)之間的序列在特定時(shí)期從特定植物器官的細(xì)胞基因組中全部清除。其技術(shù)原理如圖所示：圖中基因表達(dá)載體的必備組件包括。通過(guò)插入不同的，以決定在不同器官中表達(dá)重組酶，從而將相應(yīng)器官中的某些基因序列從基因組中徹底清除，按需獲得不含外基因的種子、果實(shí)等。請(qǐng)?jiān)诖痤}卡方框中填寫(xiě)重組酶發(fā)揮清除作用后剩余的序列組合。

2025年高考生物復(fù)習(xí)之小題狂練300題（解答題）：現(xiàn)代生物技術(shù)及應(yīng)用（10題）參考答案與試題解析一．解答題（共10小題）1．黑水虻是重要的資源昆蟲(chóng)，體內(nèi)H基因編碼的抗菌肽HI﹣3具有抗菌、抗癌和免疫調(diào)節(jié)作用。科研人員利用酵母菌生產(chǎn)抗菌肽HI﹣3，并避免基因污染。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增H基因，需根據(jù)H基因設(shè)計(jì)兩種引物，引物的作用有ABC。A．為T(mén)aq酶提供結(jié)合位點(diǎn)B．決定擴(kuò)增產(chǎn)物大小C．決定反應(yīng)的特異性D．決定變性時(shí)間（2）已知H基因編碼鏈的編碼區(qū)序列是：5′﹣CTCGAGATGCTGCAG………GGATCCTC﹣TAGA﹣3′，擴(kuò)增H基因的編碼區(qū)段時(shí)，結(jié)合到編碼鏈上的引物序列是5'﹣TCTAGAGG﹣3'（方向?yàn)?′→3′，寫(xiě)出5′端8個(gè)堿基序列）。獲得H基因產(chǎn)物后需要進(jìn)行凝膠電泳，將符合要求的條帶切割和回收以便提取純化并進(jìn)行測(cè)序。（3）由于抗菌肽HI﹣3會(huì)損傷酵母細(xì)胞，組成型表達(dá)（持續(xù)表達(dá)）H基因的酵母菌最大種群數(shù)量偏低，限制了最終產(chǎn)量?？蒲腥藛T通過(guò)構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動(dòng)子來(lái)降低抗菌肽HI﹣3對(duì)酵母菌的傷害。在酵母菌基因組DNA中插入P和S基因，使質(zhì)粒上H基因的表達(dá)受紅光控制。紅光調(diào)控H基因表達(dá)的原理如圖1所示。P和S基因表達(dá)應(yīng)為組成型表達(dá)（從“組成型表達(dá)”“紅光誘導(dǎo)型表達(dá)”選填）。紅光調(diào)控H基因表達(dá)的原理是S基因指導(dǎo)合成的S蛋白直接與啟動(dòng)子Jub結(jié)合，P基因表達(dá)的P蛋白在紅光調(diào)控下，與結(jié)合在啟動(dòng)子上的S蛋白結(jié)合，啟動(dòng)H基因的表達(dá)過(guò)程。（4）發(fā)酵后菌體和產(chǎn)物分離是發(fā)酵工藝的基本環(huán)節(jié)。定位于細(xì)胞表面的F蛋白可使酵母細(xì)胞彼此結(jié)合，進(jìn)而沉淀在發(fā)酵罐底部?？蒲腥藛T引入藍(lán)光激活系統(tǒng)如圖2，在酵母菌基因組中插入了兩個(gè)均能合成E蛋白的基因（E1、E2），使F基因的表達(dá)受到藍(lán)光控制如圖3。圖3中E2基因持續(xù)性表達(dá)少量的E蛋白時(shí)，酵母細(xì)胞具有接受藍(lán)光刺激的能力，E1基因的作用是藍(lán)光照射后，快速表達(dá)大量E蛋白，進(jìn)而激活F基因的表達(dá)。（5）制藥過(guò)程中需避免工程菌泄露到環(huán)境中引發(fā)基因污染。科研人員利用兩種阻遏蛋白基因（T和L）和調(diào)控元件，使酵母細(xì)胞在紅光和藍(lán)光同時(shí)照射時(shí)才激活致死基因N的表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)工程菌死亡，如圖4。若圖中①選用的啟動(dòng)子為Jub，②處選用的啟動(dòng)子為CYC，則③④處結(jié)合的阻遏蛋白分別為T(mén)蛋白、L蛋白。（6）請(qǐng)結(jié)合上述分析，利用該工程菌發(fā)酵生產(chǎn)抗菌肽HI﹣3各階段需控制的光照條件是：Ⅰ菌種培養(yǎng)階段黑暗；Ⅱ菌種發(fā)酵階段紅光照射；Ⅲ產(chǎn)物分離階段藍(lán)光照射；Ⅳ安全處理階段紅光、藍(lán)光同時(shí)照射。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）ABC（2）5'﹣TCTAGAGG﹣3'切割和回收（3）組成型表達(dá)紅光調(diào)控下，與結(jié)合在啟動(dòng)子上的S蛋白結(jié)合（4）藍(lán)光照射后，快速表達(dá)大量E蛋白，進(jìn)而激活F基因的表達(dá)（5）T蛋白、L蛋白（6）黑暗紅光照射藍(lán)光照射【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等，標(biāo)記基因可便于目的基因的鑒定和篩選。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因——DNA分子雜交技術(shù)。②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA——分子雜交技術(shù)。③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)——抗原﹣抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。【解答】解：（1）引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸，引物之間或引物內(nèi)部不能互補(bǔ)配對(duì)，用于PCR的引物長(zhǎng)度通常為20﹣30個(gè)核苷酸，引物使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸，提供了DNA聚合酶所需的3'端（末端），即為T(mén)aq酶提供結(jié)合位點(diǎn)，引物的長(zhǎng)度和位置決定了PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小，引物的設(shè)計(jì)基于已知的目標(biāo)DNA序列，決定反應(yīng)的特異性，ABC正確。故選：ABC。（2）引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸，已知H基因編碼鏈的編碼區(qū)序列是：5'﹣CTCGAGATGCTGCAG………GGATCCTC﹣TAGA﹣3'，擴(kuò)增H基因的編碼區(qū)段時(shí)，結(jié)合到編碼鏈上的引物序列是5'﹣TCTAGAGG﹣3'；獲得H基因產(chǎn)物后需要進(jìn)行凝膠電泳，將符合要求的條帶切割和回收以便提取純化并進(jìn)行測(cè)序。（3）由圖可知，P和S基因的表達(dá)不需要其他物誘導(dǎo)，因此屬于組成型表達(dá)，H基因?qū)儆诩t光誘導(dǎo)型表達(dá)；由圖可知，在沒(méi)有紅光誘導(dǎo)時(shí)，S基因指導(dǎo)合成的S蛋白直接與啟動(dòng)子Jub結(jié)合，紅光調(diào)控下，P基因指導(dǎo)合成的P蛋白與結(jié)合在啟動(dòng)子上的S蛋白結(jié)合，啟動(dòng)H基因的表達(dá)（轉(zhuǎn)錄）過(guò)程。（4）依據(jù)題意可知，科研人員引入藍(lán)光激活系統(tǒng)目的是激活F基因表達(dá)產(chǎn)生F蛋白，使酵母細(xì)胞彼此結(jié)合，進(jìn)而沉淀在發(fā)酵罐底部，與CYC相連的E1基因的作用是接受照射藍(lán)光后，快速表達(dá)大量E蛋白，進(jìn)而激活F基因的表達(dá)。（5）依據(jù)題干可知，啟動(dòng)子Jub接受紅光的誘導(dǎo)調(diào)控，啟動(dòng)子CYC接受藍(lán)光的誘導(dǎo)調(diào)控，③和④為阻遏蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，其與阻遏蛋白結(jié)合后會(huì)抑制相關(guān)基因的表達(dá)。致死基因N的表達(dá)會(huì)誘導(dǎo)工程菌死亡，若①選用的啟動(dòng)子為Jub，②處啟動(dòng)子為CYC，在紅光和藍(lán)光同時(shí)照射時(shí)，紅光調(diào)控Jub啟動(dòng)子啟動(dòng)T基因表達(dá)出T蛋白，結(jié)合在③處，抑制了L基因的表達(dá)，④處無(wú)L阻遏蛋白與之結(jié)合，在藍(lán)光調(diào)控下，CYC啟動(dòng)N基因的表達(dá)而使酵母菌死亡，故③④分別是T蛋白、L蛋白。（6）根據(jù)題目信息，紅光照射使產(chǎn)物增多，藍(lán)光照射使產(chǎn)物凝集，紅藍(lán)光同時(shí)照射使工程菌死亡，I菌種培養(yǎng)階段應(yīng)在黑暗條件下培養(yǎng)至種群數(shù)量達(dá)到最適，Ⅱ菌種發(fā)酵階段紅光照射至抗菌肽HI﹣3在培養(yǎng)液中達(dá)到適宜濃度，II產(chǎn)物分離階段藍(lán)光照射至工程菌凝集，回收發(fā)酵產(chǎn)物；IV安全處理階段紅光藍(lán)光同時(shí)照射，殺死工程菌。故答案為：（1）ABC（2）5'﹣TCTAGAGG﹣3'切割和回收（3）組成型表達(dá)紅光調(diào)控下，與結(jié)合在啟動(dòng)子上的S蛋白結(jié)合（4）藍(lán)光照射后，快速表達(dá)大量E蛋白，進(jìn)而激活F基因的表達(dá)（5）T蛋白、L蛋白（6）黑暗紅光照射藍(lán)光照射【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。2．研究發(fā)現(xiàn)，人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品?？茖W(xué)家培育出轉(zhuǎn)入溶菌酶基因山羊，以大規(guī)模生產(chǎn)人溶菌酶（從乳汁中提?。^(guò)程如圖所示，其中編號(hào)①～⑨表示過(guò)程。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）圖中轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)人溶菌酶運(yùn)用了基因工程、PCR技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等（至少填3項(xiàng)）現(xiàn)代生物工程技術(shù)。（2）過(guò)程①使用PCR技術(shù)在體外擴(kuò)增hLZ基因，擴(kuò)增時(shí)需要2種引物。過(guò)程③形成重組質(zhì)粒需要的限制酶是BclⅠ和HindⅢ。（3）將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入山羊成纖維細(xì)胞后，篩選出含重組質(zhì)粒的山羊胎兒成纖維細(xì)胞，用到的質(zhì)粒S中標(biāo)記基因?yàn)樗沫h(huán)素抗性基因。⑥過(guò)程未受精的卵母細(xì)胞去核過(guò)程中，去除的“核”實(shí)際上是紡錘體﹣染色體復(fù)合物。（4）過(guò)程⑧體外培養(yǎng)得到早期胚胎，應(yīng)在桑葚/囊胚時(shí)期進(jìn)行胚胎的移植。此外，移植前要進(jìn)行性別鑒定和遺傳病篩選等，要從胚胎的滋養(yǎng)層細(xì)胞取樣。為檢測(cè)過(guò)程⑨得到的轉(zhuǎn)基因山羊是否成功，最簡(jiǎn)單的方法是檢測(cè)轉(zhuǎn)基因山羊乳汁中是否含有人溶菌酶?！究键c(diǎn)】基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用；動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)；體外受精和胚胎移植；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；胚胎工程．【答案】（1）基因工程、PCR技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植（2）2BclⅠ和HindⅢ（3）四環(huán)素抗性基因紡錘體﹣染色體復(fù)合物（4）桑葚/囊胚滋養(yǎng)層檢測(cè)轉(zhuǎn)基因山羊乳汁中是否含有人溶菌酶【分析】分析題圖可知，過(guò)程①通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增物質(zhì)A，過(guò)程②為對(duì)目的基因進(jìn)行切割，過(guò)程③為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，過(guò)程④表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的過(guò)程，過(guò)程⑤為攝取山羊胎兒的成纖維細(xì)胞核，過(guò)程⑥為對(duì)未受精的卵母細(xì)胞去核，過(guò)程⑦為構(gòu)成重組細(xì)胞，過(guò)程⑧為早期胚胎培養(yǎng)，過(guò)程⑨為胚胎移植。【解答】解：（1）由題圖可知，圖中轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)人溶菌酶運(yùn)用了基因工程，PCR技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等現(xiàn)代生物工程技術(shù)。（2）在利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，由于DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈，用兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時(shí)被擴(kuò)增，則題圖過(guò)程①使用PCR技術(shù)在體外擴(kuò)增hLZ基因，擴(kuò)增時(shí)需要兩種引物。過(guò)程③為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，由題圖質(zhì)粒S和B中的限制酶種類(lèi)可知，選用BclⅠ和HindⅢ分別對(duì)質(zhì)粒S和B進(jìn)行酶切。（3）由題圖質(zhì)粒S和B中的限制酶種類(lèi)可知，選用BclⅠ和HindⅢ分別對(duì)質(zhì)粒S和B進(jìn)行酶切，則將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入山羊成纖維細(xì)胞后，篩選出含重組質(zhì)粒的山羊胎兒成纖維細(xì)胞，用到的質(zhì)粒S中標(biāo)記基因?yàn)樗沫h(huán)素抗性基因。減數(shù)分裂Ⅱ中期（MⅡ期）卵母細(xì)胞中的“核”其實(shí)是紡錘體﹣染色體復(fù)合物；⑥過(guò)程未受精的卵母細(xì)胞去核過(guò)程中，去除的“核”實(shí)際上是紡錘體﹣染色體復(fù)合物。（4）過(guò)程⑧體外培養(yǎng)得到早期胚胎，應(yīng)在桑葚胚或囊胚階段才能進(jìn)行移植。此外，移植前要進(jìn)行性別鑒定和遺傳病篩選等，要從胚胎的滋養(yǎng)層細(xì)胞取樣。為檢測(cè)過(guò)程⑨得到的轉(zhuǎn)基因山羊是否成功，最簡(jiǎn)單的方法是檢測(cè)轉(zhuǎn)基因山羊乳汁中是否含有人溶菌酶。故答案為：（1）基因工程、PCR技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植（2）2BclⅠ和HindⅢ（3）四環(huán)素抗性基因紡錘體﹣染色體復(fù)合物（4）桑葚/囊胚滋養(yǎng)層檢測(cè)轉(zhuǎn)基因山羊乳汁中是否含有人溶菌酶【點(diǎn)評(píng)】本題考查胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，具備運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。3．“中天楊”是由我國(guó)科學(xué)家采用生物轉(zhuǎn)基因技術(shù)，歷經(jīng)8年時(shí)間培育成功的抗鹽堿、耐干旱的楊樹(shù)新品種。該品種以八里莊楊為實(shí)驗(yàn)材料，經(jīng)轉(zhuǎn)mtl﹣D基因培育獲得。如圖為培育“中天楊”的操作流程，①～⑥表示操作過(guò)程，該過(guò)程中可能用到的限制酶如表所示?；卮鹣铝袉?wèn)題。注：Ti質(zhì)粒中的Tetr為四環(huán)素抗性基因，Ampr為氨節(jié)青霉素抗性基因。限制酶BclⅠEcoRⅠXbaⅠSau3AⅠBamHⅠ切割位點(diǎn)T↓GATCAG↓AATTCT↓CTAGA↓GATCG↓GATCC（1）與雜交育種相比，基因工程育種的優(yōu)點(diǎn)有②③④（填序號(hào)）。①操作方法簡(jiǎn)便②目的性強(qiáng)，能定向改造生物性狀③育種周期短④不受生殖隔離限制，能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙⑤安全性高，對(duì)生態(tài)沒(méi)有威脅（2）過(guò)程①需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶，過(guò)程②需要的工具酶是限制酶和DNA連接酶。（3）采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，在PCR反應(yīng)體系中需加入引物，引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸，若目的基因擴(kuò)增3代，則共用引物14個(gè)。PCR完成以后，常采用瓊脂糖凝膠電泳法來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。（4）培育轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)的核心工作是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在進(jìn)行該工作時(shí)，應(yīng)在mtl﹣D基因的兩側(cè)添加限制酶XbaⅠ、BclⅠ的識(shí)別序列。（5）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞除圖示方法外，還有花粉管通道法。為了確認(rèn)目的基因在植物細(xì)胞中是否成功表達(dá)，從分子水平通常使用抗原—抗體雜交法進(jìn)行檢測(cè)。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）②③④（2）逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶限制酶和DNA連接酶（3）使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸14瓊脂糖凝膠電泳（4）基因表達(dá)載體的構(gòu)建XbaⅠ、BclⅠ（5）花粉管通道法抗原—抗體雜交【分析】基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲?。虎诨虮磉_(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)。其中，基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。【解答】解：（1）與雜交育種相比，基因工程育種的操作方法較復(fù)雜，容易造成基因污染進(jìn)而對(duì)生態(tài)產(chǎn)生威脅，但基因工程育種的目的性強(qiáng)，能定向改變生物性狀，且育種周期短，不受生殖隔離限制，能克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙。（2）過(guò)程①以RNA為模板合成DNA并進(jìn)行PCR，該過(guò)程需要逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶。過(guò)程②是將目的基因與Ti質(zhì)粒進(jìn)行連接，需要限制酶切割目的基因和Ti質(zhì)粒，然后利用DNA連接酶將二者進(jìn)行連接。（3）采用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，在PCR反應(yīng)體系中需加入引物，引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸，若目的基因擴(kuò)增3代，則共用引物14個(gè)。PCR完成以后，常采用瓊脂糖凝膠電泳法來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物。（4）基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心工作，在進(jìn)行基因表達(dá)載體的構(gòu)建時(shí)，據(jù)題意可知，BamHⅠ和EcoRⅠ會(huì)破壞復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因，不能選用，選用Sau3AⅠ也會(huì)導(dǎo)致復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因，因此需要用XbaⅠ、BclⅠ切割質(zhì)粒，應(yīng)選擇兩種限制酶切割目的基因和Ti質(zhì)粒，因此需要在mtl﹣D基因的兩側(cè)添加限制酶XbaⅠ、BclⅠ的識(shí)別序列。（5）圖中利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，除此方法外，還有花粉管通道法等。為了確認(rèn)目的基因在植物細(xì)胞中是否成功表達(dá)，通常用抗原—抗體雜交法從分子水平進(jìn)行檢測(cè)。故答案為：（1）②③④（2）逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶限制酶和DNA連接酶（3）使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸14瓊脂糖凝膠電泳（4）基因表達(dá)載體的構(gòu)建XbaⅠ、BclⅠ（5）花粉管通道法抗原—抗體雜交【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程基本操作程序的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系、分析題意以及解決問(wèn)題的能力。4．如圖為單克隆抗體制備流程示意圖。據(jù)圖回答問(wèn)題：（1）給小鼠注射抗原后使其產(chǎn)生分泌相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞準(zhǔn)確地說(shuō)是一種漿細(xì)胞，此過(guò)程屬于特異性免疫中的體液免疫。（2）制備單克隆抗體過(guò)程中要用到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合技術(shù)，利用這種方法所得的雜交瘤細(xì)胞的主要特點(diǎn)是既能產(chǎn)生特定的抗體，也能無(wú)限增殖。（3）在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，一般會(huì)出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制現(xiàn)象；培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、促生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，此外還要加入動(dòng)物血清或血漿；培養(yǎng)時(shí)要向培養(yǎng)液中通入95%的空氣和5%的CO2的混合氣體，其中通入空氣的原因是氧氣為細(xì)胞代謝必需物質(zhì)。（4）細(xì)胞融合是隨機(jī)的過(guò)程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是篩選出雜交瘤細(xì)胞，而為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到7～10個(gè)細(xì)胞/mL，每孔滴入0.1mL細(xì)胞稀釋液，其目的是使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，以達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的?！究键c(diǎn)】單克隆抗體及其應(yīng)用．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；克隆技術(shù)．【答案】（1）漿（或效應(yīng)B）體液（2）既能產(chǎn)生特定的抗體，也能無(wú)限增殖（3）接觸抑制動(dòng)物血清或血漿氧氣為細(xì)胞代謝必需物質(zhì)（或答保證細(xì)胞能夠進(jìn)行有氧呼吸）（4）篩選出雜交瘤細(xì)胞使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，以達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的（或篩選出雜交瘤細(xì)胞單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）【分析】單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。【解答】解：（1）能夠產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿細(xì)胞；漿細(xì)胞是體液免疫過(guò)程中產(chǎn)生的。（2）制備單克隆抗體過(guò)程中要用到動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合技術(shù)，利用這種方法所得的雜交瘤細(xì)胞的主要特點(diǎn)是既能產(chǎn)生特定的抗體（由特定的漿細(xì)胞產(chǎn)生），也能無(wú)限增殖（骨髓瘤細(xì)胞）。（3）在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，一般會(huì)出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制（細(xì)胞生長(zhǎng)到相互接觸時(shí)，生長(zhǎng)受抑制）現(xiàn)象；培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、促生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，此外還要加入動(dòng)物血清或血漿，以保證能正常生長(zhǎng)；培養(yǎng)時(shí)要向培養(yǎng)液中通入95%的空氣和5%的CO2的混合氣體，其中通入空氣的原因是氧氣為細(xì)胞代謝必需物質(zhì)。（4）細(xì)胞融合是隨機(jī)的過(guò)程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，目的是篩選出雜交瘤細(xì)胞，原因是在該培養(yǎng)基上未融合的細(xì)胞和同種融合的細(xì)胞都死亡；為選育出能產(chǎn)生高特異性抗體的細(xì)胞，要將從HAT培養(yǎng)基上篩選出的細(xì)胞稀釋到7～10個(gè)細(xì)胞/mL，每孔滴入0.1mL細(xì)胞稀釋液，其目的是使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，以達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的（或篩選出雜交瘤細(xì)胞單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）。故答案為：（1）漿（或效應(yīng)B）體液（2）既能產(chǎn)生特定的抗體，也能無(wú)限增殖（3）接觸抑制動(dòng)物血清或血漿氧氣為細(xì)胞代謝必需物質(zhì)（或答保證細(xì)胞能夠進(jìn)行有氧呼吸）（4）篩選出雜交瘤細(xì)胞使每個(gè)孔內(nèi)不多于一個(gè)細(xì)胞，以達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的（或篩選出雜交瘤細(xì)胞單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體的純度）【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查單克隆抗體的制備以及應(yīng)用的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。5．米諾環(huán)素（分子式：C23H27N3O7）是一種四環(huán)素類(lèi)抗生素，一般用于人類(lèi)疾病治療和畜禽養(yǎng)殖。米諾環(huán)素進(jìn)入人體或動(dòng)物體內(nèi)后不能完全被吸收，其進(jìn)入環(huán)境后會(huì)在環(huán)境中殘留，造成環(huán)境污染。某研究人員在自然水域中通過(guò)篩選和分離得到了一種米諾環(huán)素高效降解菌DM13，并對(duì)該菌進(jìn)行了相關(guān)研究。如表是相關(guān)過(guò)程中使用的培養(yǎng)基種類(lèi)及培養(yǎng)基配方，回答下列問(wèn)題。培養(yǎng)基種類(lèi)配方BPM培養(yǎng)基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g，蒸餾水定容至1000mLBPMA培養(yǎng)基蛋白胨5.0g、牛肉膏3.0g、氯化鈉5.0g、瓊脂25.0g，蒸餾水定容至1000mL無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基MgSO4?7H2O0.15g、FeSO4?7H2O0.01g、CaCl20.02g、KH2PO41g、Na2HPO41g、NH4NO31g、葡萄糖0.5g，蒸餾水定容至1000mL（1）培養(yǎng)基的配制：按配方通過(guò)計(jì)算、稱(chēng)量、溶解等步驟配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后使用。（2）擴(kuò)大培養(yǎng)：在BPM培養(yǎng)基中添加一定濃度的米諾環(huán)素溶液，對(duì)采集的水樣中的微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng)，該物質(zhì)可以為微生物生長(zhǎng)提供碳源、氮源。（3）分離高效降解菌：用平板劃線(xiàn)法或稀釋涂布平板法接種經(jīng)上述選擇培養(yǎng)得到的微生物，該步驟選擇的培養(yǎng)基為BPMA（填“BPM”“BPMA”或“無(wú)機(jī)鹽”）培養(yǎng)基。（4）測(cè)定降解效果：為了測(cè)定菌株DM13在自然水體中降解米諾環(huán)素的效果，應(yīng)該用自然水體中的水配制四種不同初始質(zhì)量濃度的米諾環(huán)素溶液。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：①8h處理后，在米諾環(huán)素溶液初始質(zhì)量濃度為100μg/L的水體中，空白對(duì)照組測(cè)得的米諾環(huán)素溶液質(zhì)量濃度為41.8μg/L，加入菌株DM13的實(shí)驗(yàn)組測(cè)得的質(zhì)量濃度為24.3μg/L，相較于空白對(duì)照組，米諾環(huán)素降解菌DM13的降解率為41.9%（用百分?jǐn)?shù)表示，保留一位小數(shù)）。②為了測(cè)定菌株DM13的實(shí)際降解效果，可選擇表中的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基替換自然水體，這樣做的目的是排除自然水體中其他微生物的影響?！究键c(diǎn)】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．【專(zhuān)題】表格數(shù)據(jù)類(lèi)簡(jiǎn)答題；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用．【答案】（1）高壓蒸汽（2）米諾環(huán)素溶液；碳源、氮源（3）平板劃線(xiàn)法或稀釋涂布平板；BPMA（4）自然水體中的水；41.9%；排除自然水體中其他微生物的影響【分析】培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)；分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因?yàn)樗鼈儊?lái)源于動(dòng)物原料，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。在提供上述幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的要求?！窘獯稹拷猓海?）培養(yǎng)基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。（2）分析題意可知，該步驟的目的是篩選并擴(kuò)大培養(yǎng)能降解米諾環(huán)素的降解菌，故應(yīng)在BPM培養(yǎng)基中添加一定濃度的米諾環(huán)素溶液。米諾環(huán)素的分子式是C23H27N3O7由此可知其可為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源。（3）分離高效降解菌時(shí)，接種方法可采用平板劃線(xiàn)法或稀釋涂布平板法，此時(shí)應(yīng)選用固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基中含有凝固劑瓊脂，故該步驟選擇的培養(yǎng)基為BPMA培養(yǎng)基。（4）分析題意，要測(cè)定菌株DM13在自然水體中降解米諾環(huán)素的效果，應(yīng)該用自然水體中的水配制四種不同初始質(zhì)量濃度的米諾環(huán)素溶液。①8h處理后，在米諾環(huán)素溶液初始質(zhì)量濃度為100ug/L的水體中，空白對(duì)照組測(cè)得的米諾環(huán)素溶液質(zhì)量濃度為41.8ug/L，加入菌株DMI3的實(shí)驗(yàn)組測(cè)得的質(zhì)量濃度為24.3μgL，相較于空白對(duì)照組，米諾環(huán)素降解菌DM13的降解率為[（100﹣24.3）﹣（100﹣41.8）]÷41.8×100%≈41.9%。②為了測(cè)定菌株DM13的實(shí)際降解效果，應(yīng)選擇表中的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基替換自然水體，這樣可排除自然水體中其他微生物的影響。故答案為：（1）高壓蒸汽（2）米諾環(huán)素溶液；碳源、氮源（3）平板劃線(xiàn)法或稀釋涂布平板；BPMA（4）自然水體中的水；41.9%；排除自然水體中其他微生物的影響【點(diǎn)評(píng)】本題考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)記能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題的能力是解答本題的關(guān)鍵。6．科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過(guò)乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路線(xiàn)如圖。請(qǐng)據(jù)圖回答：（1）B代表的技術(shù)是核移植，C代表胚胎移植。由過(guò)程①獲得的A為含目的基因的表達(dá)載體，其組成成分一般包括啟動(dòng)子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)等。（2）在B之前，D的操作是去掉受體卵母細(xì)胞的核，目的是保證核遺傳物質(zhì)來(lái)自含目的基因的成纖維細(xì)胞。受體應(yīng)選用減數(shù)第二次分裂中（或MⅡ）期的卵母細(xì)胞。（3）進(jìn)行C時(shí)，應(yīng)該選擇身體健康的代孕母羊，并進(jìn)行同期發(fā)情處理。由于代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。（4）采用綿羊胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆，理論上可獲得無(wú)數(shù)只轉(zhuǎn)基因綿羊，其原因是整合有目的基因的成纖維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。（5）由重組細(xì)胞到轉(zhuǎn)基因綿羊的培育成功，體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞核的全能性。【考點(diǎn)】體外受精和胚胎移植．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；胚胎工程．【答案】（1）核移植胚胎移植含目的基因的表達(dá)載體啟動(dòng)子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)等（2）去掉受體卵母細(xì)胞的核保證核遺傳物質(zhì)來(lái)自含目的基因的成纖維細(xì)胞減數(shù)第二次分裂中（或MⅡ）（3）同期發(fā)情免疫排斥反應(yīng)（4）整合有目的基因的成纖維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)（5）動(dòng)物細(xì)胞核的全能性【分析】動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體?！窘獯稹拷猓海?）B代表的技術(shù)是核移植，C代表胚胎移植。由過(guò)程①獲得的A為含目的基因的表達(dá)載體，其組成成分一般包括啟動(dòng)子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)等。（2）在B核移植之前，D的操作是去掉受體卵母細(xì)胞的核，目的是保證核遺傳物質(zhì)來(lái)自含目的基因的成纖維細(xì)胞。受體應(yīng)選用減數(shù)第二次分裂中（或MⅡ）期的卵母細(xì)胞。（3）進(jìn)行C胚胎移植時(shí)，應(yīng)該選擇身體健康的代孕母羊，并進(jìn)行同期發(fā)情處理。由于代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。（4）采用綿羊胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆，理論上可獲得無(wú)數(shù)只轉(zhuǎn)基因綿羊，其原因是整合有目的基因的成纖維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。（5）由重組細(xì)胞到轉(zhuǎn)基因綿羊的培育成功，體現(xiàn)了動(dòng)物細(xì)胞核的全能性。故答案為：（1）核移植胚胎移植含目的基因的表達(dá)載體啟動(dòng)子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)等（2）去掉受體卵母細(xì)胞的核保證核遺傳物質(zhì)來(lái)自含目的基因的成纖維細(xì)胞減數(shù)第二次分裂中（或MⅡ）（3）同期發(fā)情免疫排斥反應(yīng)（4）整合有目的基因的成纖維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)（5）動(dòng)物細(xì)胞核的全能性【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是胚胎工程的基本技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。7．生物合成基因簇（BGC）是一類(lèi)非常重要的基因集合類(lèi)型。普遍存在于各類(lèi)生物基因組中，并且發(fā)揮著重要的代謝和調(diào)控作用。CRISPR/Cas介導(dǎo)的切割可以發(fā)生在任意的DNA位點(diǎn)。阿卡波糖為一種新型口服降血糖藥，在腸道內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)性抑制葡萄糖甙酶，可降低多糖的分解，減緩吸收。已知阿卡波糖生物合成基因簇全長(zhǎng)大約41kb，克隆阿卡波糖生物合成基因簇過(guò)程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）現(xiàn)在常用PCR技術(shù)快速特異性地?cái)U(kuò)增目的基因，利用該方法進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)所需的引物需要滿(mǎn)足的條件是兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補(bǔ)配對(duì)。（2）圖1中Cas9酶能催化磷酸二酯鍵鍵水解，在構(gòu)建重組DNA時(shí)，通常選擇改造（填“改造”或“未改造”）的質(zhì)粒作為載體，經(jīng)過(guò)酶處理后形成重組DNA。為提高獲得重組DNA的效率，下列需要考慮的因素有ABCD（填序號(hào)）。A．適宜的外界條件B．目的基因簇和質(zhì)粒濃度C．DNA連接酶活性D．質(zhì)粒的純度（3）酵母菌的純培養(yǎng)一般采用馬鈴薯瓊脂（填培養(yǎng)基名稱(chēng)）培養(yǎng)基。（4）步驟④進(jìn)行篩選的方法是：抗藥性篩選法?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合；微生物的純培養(yǎng)．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）PCR兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補(bǔ)配對(duì)（2）磷酸二酯鍵改造ABCD（3）馬鈴薯瓊脂（4）抗藥性篩選法【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定?！窘獯稹拷猓海?）現(xiàn)在常用PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)快速特異性地?cái)U(kuò)增目的基因，利用該方法進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)所需的引物需要滿(mǎn)足的條件是兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補(bǔ)配對(duì)。（2）解：由圖可示，圖中Cas9酶的作用是切割基因，基因的基本組成單位是脫氧核糖核苷酸，脫氧核糖核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵連接，因此它能催化磷酸二酯鍵的水解。在構(gòu)建重組DNA時(shí)，通常選擇改造的質(zhì)粒作為載體，以去除質(zhì)粒中一些不必要的限制酶酶切位點(diǎn)并添加部分抗性基因位點(diǎn)用于后續(xù)的篩選。構(gòu)建重組DNA時(shí)，除了考慮適宜的外界條件、目的基因和質(zhì)粒的濃度和DNA連接酶活性外，還需考慮質(zhì)粒的純度、黏性末端的種類(lèi)和長(zhǎng)短、DNA連接酶濃度，ABCD正確。故選：ABCD。（3）培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基一般采用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基，因?yàn)槲⑸锊荒芊掷铆傊?，加入瓊脂不?huì)改變培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分。（4）④是將獲得的重組質(zhì)粒經(jīng)過(guò)富集培養(yǎng)后進(jìn)行抗性篩選，目的是獲得含有目標(biāo)基因的重組質(zhì)粒。使用的方法是抗藥性篩選法，具體步驟是將含有目標(biāo)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化菌株接種在含有安普霉素的培養(yǎng)基上，只有含有目標(biāo)質(zhì)粒的菌株才能生長(zhǎng)并形成菌落，從而實(shí)現(xiàn)篩選。故答案為：（1）PCR兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補(bǔ)配對(duì)（2）磷酸二酯鍵改造ABCD（3）馬鈴薯瓊脂（4）抗藥性篩選法【點(diǎn)評(píng)】本題考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，對(duì)生物學(xué)問(wèn)題作出準(zhǔn)確的判斷，難度適中。8．三白草和魚(yú)腥草是同科不同屬的兩種藥用植物，二者因療效相近且具有疊加效應(yīng)常被用作“藥對(duì)”?？蒲腥藛T將復(fù)方的配伍（兩種或兩種以上藥物配合使用）用到個(gè)體生長(zhǎng)或生產(chǎn)過(guò)程，并實(shí)現(xiàn)有效成分的工廠(chǎng)化生產(chǎn)的具體操作如圖1，進(jìn)一步研究不同的原生質(zhì)體密度對(duì)三白草和魚(yú)腥草原生質(zhì)體融合率的影響，結(jié)果如圖2。（1）圖1中①過(guò)程通過(guò)酶解法去除細(xì)胞壁獲取原生質(zhì)體，并向三白草和魚(yú)腥草細(xì)胞酶解液中分別加入紅、綠熒光色素（帶熒光色素的原生質(zhì)體仍能融合和再生）。過(guò)程②利用化學(xué)誘導(dǎo)劑聚乙二醇（PEG））誘導(dǎo)融合，隨后在熒光顯微鏡下選擇帶雙色的雜種原生質(zhì)體。（2）由圖2可知，促進(jìn)三白草和魚(yú)腥草原生質(zhì)體融合的最適密度為1×106個(gè)/mL。（3）通常情況下，能增加免疫器官的重量表明該物質(zhì)具有一定的增強(qiáng)免疫力的作用。為判斷融合體對(duì)動(dòng)物免疫力的影響，科研人員取同種小鼠30只，雌雄各半，隨機(jī)均分為三組，實(shí)驗(yàn)處理如表。組別A組B組C組（空白對(duì)照組）實(shí)驗(yàn)處理三白草和魚(yú)腥草雜種愈傷組織的蒸餾水提取物三白草和魚(yú)腥草直接混合后的蒸餾水提取物每天一次等量灌胃，連續(xù)一周，檢測(cè)各組小鼠的胸腺重量①表格中C組的實(shí)驗(yàn)處理為加入等量的蒸餾水。②若實(shí)驗(yàn)結(jié)果為A、B兩組小鼠的胸腺重量相同且都大于C組，則支持利用原生質(zhì)體融合技術(shù)將復(fù)方的配伍提前并實(shí)現(xiàn)有效成分的工廠(chǎng)化生產(chǎn)?！究键c(diǎn)】植物體細(xì)胞雜交技術(shù)及應(yīng)用．【專(zhuān)題】數(shù)據(jù)表格；植物的組織培養(yǎng)．【答案】（1）細(xì)胞壁聚乙二醇（PEG））雙色（2）1×106（3）①加入等量的蒸餾水②A、B兩組小鼠的胸腺重量相同且都大于C組【分析】植物體細(xì)胞雜交是指將不同種的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法：物理法（離心、振動(dòng)、電激等）和化學(xué)法（聚乙二醇等）?！窘獯稹拷猓海?）植物細(xì)胞壁的成分主要是纖維素和果膠，根據(jù)酶的專(zhuān)一性，可用纖維素酶和果膠酶去除植物細(xì)胞壁制備原生質(zhì)體；誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的化學(xué)試劑是聚乙二醇（PEG）；由于向三白草和魚(yú)腥草細(xì)胞酶解液中分別加入紅、綠熒光色素（帶熒光色素的原生質(zhì)體仍能融合和再生），故要選擇雜交的細(xì)胞，應(yīng)選擇雙色的。（2）據(jù)圖分析，圖2中原生質(zhì)體密度在1×106個(gè)/mL時(shí)融合體百分比最高，說(shuō)明促進(jìn)三白草和魚(yú)腥草原生質(zhì)體融合的最適密度為1×106個(gè)/mL。（3）①分析題意，本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖桥袛嗳诤象w對(duì)動(dòng)物免疫力的影響，因?yàn)镃組為對(duì)照組，因此根據(jù)對(duì)A、B兩組的處理，C組應(yīng)用等量的蒸餾水每天一次等量灌胃，連續(xù)一周。②若實(shí)驗(yàn)結(jié)果為A、B兩組的胸腺重量相同且都大于C組，則支持利用原生質(zhì)體融合技術(shù)將復(fù)方的配伍提前并實(shí)現(xiàn)有效成分的工廠(chǎng)化生產(chǎn)。故答案為：（1）細(xì)胞壁聚乙二醇（PEG））雙色（2）1×106（3）①加入等量的蒸餾水②A、B兩組小鼠的胸腺重量相同且都大于C組【點(diǎn)評(píng)】題本主要考查植物組織體細(xì)胞雜交和免疫調(diào)節(jié)等相關(guān)知識(shí)，考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解與應(yīng)用，題目難度適中。9．毒物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子S在毒物誘導(dǎo)下可啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。研究人員將PCR擴(kuò)增得到的毒物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子S（如圖2，圖中箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向）插入圖1載體的P區(qū)，構(gòu)建表達(dá)載體并轉(zhuǎn)入大腸桿菌，獲得能夠檢測(cè)水中毒物的大腸桿菌M?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）基因中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。（2）切割質(zhì)粒載體最好用兩種限制酶，而啟動(dòng)子S上不含有這些限制酶的酶切位點(diǎn)，需要在引物上添加。圖2中引物I、Ⅱ分別加入限制酶XhoⅠ、BamHⅠ的識(shí)別序列。（3）表達(dá)載體的P區(qū)有一段核苷酸序列為“5′﹣ATCTCGAGCGGG﹣3′”，則對(duì)該序列進(jìn)行剪切的XhoⅠ（酶切后產(chǎn)生黏性末端）識(shí)別的核苷酸序列（6個(gè)核苷酸）最可能為5'一CTCGAG—3'。（4）用Ca2+處理大腸桿菌，便于轉(zhuǎn)入構(gòu)建好的表達(dá)載體?？梢允褂锰砑影逼S青霉素的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)入載體的菌株。（5）請(qǐng)寫(xiě)出利用大腸桿菌M檢測(cè)水體是否被毒物污染的實(shí)驗(yàn)思路，并預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論。實(shí)驗(yàn)思路：將大腸桿菌M加入待測(cè)水體，檢測(cè)待測(cè)水體是否發(fā)出綠色熒光。預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論：若待測(cè)水體未發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明待測(cè)水體未被毒物污染；若待測(cè)水體發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明待測(cè)水體被毒物污染?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）RNA聚合酶（2）XhoⅠ、BamHⅠ（3）5'一CTCGAG—3'（4）Ca2+氨芐青霉素（5）將大腸桿菌M加入待測(cè)水體，檢測(cè)待測(cè)水體是否發(fā)出綠色熒光若待測(cè)水體未發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明待測(cè)水體未被毒物污染；若待測(cè)水體發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明待測(cè)水體被毒物污染【分析】PCR技術(shù)：（1）概念：PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。（2）原理：DNA雙鏈復(fù)制。（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對(duì)引物。（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、ATP、一對(duì)引物、耐高溫的DNA聚合酶。（5）過(guò)程：高溫變性：DNA解旋過(guò)程（PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開(kāi)不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動(dòng)解開(kāi)）；低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；中溫延伸：合成子鏈。【解答】解：（1）基因中啟動(dòng)子的作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。（2）將所需的啟動(dòng)子插入質(zhì)粒的P區(qū)，P區(qū)有XhoⅠ、EcoRⅠ和BamHⅠ四種限制酶，由于啟動(dòng)子S內(nèi)部有EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，故不能選擇EcoRⅠ，為使啟動(dòng)子正確插入到質(zhì)粒上，需使用雙酶切的方法，故選用XhoⅠ、BamHⅠ兩種限制酶。根據(jù)啟動(dòng)子到終止子的方向，則引物Ⅰ上添加X(jué)hoⅠ限制酶的識(shí)別序列，引物Ⅱ上添加BamHⅠ限制酶的識(shí)別序列。（3）限制酶切割DNA產(chǎn)生黏性末端，需兩條鏈都有識(shí)別位點(diǎn)（即識(shí)別片段兩條鏈序列成倒序），故推測(cè)該序列進(jìn)行剪切的XhoⅠ識(shí)別的核苷酸序列（6個(gè)核苷酸）最可能為5'一CTCGAG—3'或3'一GAGCTC一5'。（4）用Ca2+處理農(nóng)桿菌，可使其成為感受態(tài)細(xì)胞，以便吸收周?chē)h(huán)境中的DNA分子。氨芐青霉素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，可使用添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)入載體的菌株。（5）毒物能誘導(dǎo)毒物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子S表達(dá)，若大腸桿菌M質(zhì)粒中的毒物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子S表達(dá)，可使大腸桿菌M的綠色熒光蛋白基因表達(dá)產(chǎn)生綠色熒光蛋白而發(fā)出綠色熒光，將大腸桿菌M加入待測(cè)水體，檢測(cè)加入待測(cè)水體是否發(fā)出綠色熒光來(lái)檢測(cè)水體是否被毒物污染。預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論：若待測(cè)水體未發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明待測(cè)水體未被毒物污染；若待測(cè)水體發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明待測(cè)水體被毒物污染。故答案為：（1）RNA聚合酶（2）XhoⅠ、BamHⅠ（3）5'一CTCGAG—3'（4）Ca2+氨芐青霉素（5）將大腸桿菌M加入待測(cè)水體，檢測(cè)待測(cè)水體是否發(fā)出綠色熒光若待測(cè)水體未發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明待測(cè)水體未被毒物污染；若待測(cè)水體發(fā)出綠色熒光，說(shuō)明待測(cè)水體被毒物污染【點(diǎn)評(píng)】本題主要考查的是基因工程的操作的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中。10．轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以改善作物品質(zhì)、提高作物產(chǎn)量，減少農(nóng)藥使用量，在解決糧食需求和保障農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展等方面發(fā)揮重要作用。但是轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在種子公司轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專(zhuān)利保護(hù)問(wèn)題，還存在外源基因通過(guò)花粉和種子等途徑在種群之間漂移擴(kuò)散、帶來(lái)生態(tài)安全隱患以及人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性擔(dān)憂(yōu)的問(wèn)題?？茖W(xué)家采用葉綠體轉(zhuǎn)基因、“終結(jié)者”種子、“外源基因清除”技術(shù)試圖解決上述問(wèn)題。（1）轉(zhuǎn)基因技術(shù)能按照人們的愿望，賦予生物新的遺傳特性（或性狀），創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，轉(zhuǎn)基因技術(shù)是在DNA分子水平上進(jìn)行的設(shè)計(jì)和施工，其核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體。（2）“終結(jié)者”種子技術(shù)是通過(guò)植入“終結(jié)者基因”，阻滯種子胚胎后期發(fā)育，最后得到成熟但不育的種子?！敖K結(jié)者”種子技術(shù)在一定程度上解決了轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在的轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專(zhuān)利保護(hù)（或外源基因通過(guò)種子擴(kuò)散，帶來(lái)生態(tài)安全隱患）問(wèn)題，但危害到了農(nóng)民自行留種的權(quán)利，也不能消除人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性的擔(dān)憂(yōu)。（3）“外源基因清除”技術(shù)將“外源基因清除”調(diào)控組件與基因表達(dá)載體的必備組件重組后構(gòu)建出新的基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中表達(dá)，待外源基因完成相應(yīng)的功能后，“外源基因清除”調(diào)控組件將全部外源基因從花粉、種子和果實(shí)等特定器官中徹底清除?！巴庠椿蚯宄闭{(diào)控組件由“特定器官特異啟動(dòng)子、重組酶（FLP）基因和融合識(shí)別位點(diǎn)（LF）”構(gòu)成，LF是利用噬菌體的Cre/LoxP系統(tǒng)和酵母的FLP/FRT系統(tǒng)創(chuàng)造出的融合識(shí)別位點(diǎn)。FLP基因在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間和空間表達(dá)后，重組酶FLP可識(shí)別融合識(shí)別位點(diǎn)LF并在L與F之間完成切割，從而將兩個(gè)融合識(shí)別位點(diǎn)之間的序列在特定時(shí)期從特定植物器官的細(xì)胞基因組中全部清除。其技術(shù)原理如圖所示：圖中基因表達(dá)載體的必備組件包括啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子。通過(guò)插入不同的特定器官特異啟動(dòng)子，以決定在不同器官中表達(dá)重組酶，從而將相應(yīng)器官中的某些基因序列從基因組中徹底清除，按需獲得不含外基因的種子、果實(shí)等。請(qǐng)?jiān)诖痤}卡方框中填寫(xiě)重組酶發(fā)揮清除作用后剩余的序列組合?！究键c(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．【專(zhuān)題】圖文信息類(lèi)簡(jiǎn)答題；基因工程．【答案】（1）遺傳特性（或性狀）構(gòu)建基因表達(dá)載體（2）轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專(zhuān)利保護(hù)（或外源基因通過(guò)種子擴(kuò)散，帶來(lái)生態(tài)安全隱患）（3）啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子特定器官特異啟動(dòng)子【分析】基因工程是指按照人們的愿望，通過(guò)轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫作重組DNA技術(shù)?！窘獯稹拷猓海?）基因工程是指按照人們的愿望，通過(guò)轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫作重組DNA技術(shù)，其核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體。（2）“終結(jié)者”種子技術(shù)是通過(guò)植入“終結(jié)者基因”，阻滯種子胚胎后期發(fā)育，最后得到成熟但不育的種子，故就不能通過(guò)該種子擴(kuò)散，避免了生態(tài)安全隱患問(wèn)題。（3）基因表達(dá)載體的必備組件包括啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子，特定基因只能在特定器官中表達(dá)，因此清除不同器官中的外源基因時(shí)需要插入不同的特定器官特異啟動(dòng)子。由題圖可知，特異啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)FLP基因表達(dá)產(chǎn)生重組酶，重組酶可以將“外源基因清除“調(diào)控組件將全部外源基因從花粉、種子和果實(shí)等特定器官中徹底清除，故剩余的序列為L(zhǎng)﹣F﹣植物基因組。故答案為：（1）遺傳特性（或性狀）構(gòu)建基因表達(dá)載體（2）轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專(zhuān)利保護(hù)（或外源基因通過(guò)種子擴(kuò)散，帶來(lái)生態(tài)安全隱患）（3）啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子特定器官特異啟動(dòng)子【點(diǎn)評(píng)】本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生理解識(shí)記有關(guān)技術(shù)的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能將教材中的知識(shí)結(jié)合題中信息進(jìn)行遷移應(yīng)用。

考點(diǎn)卡片1．微生物的純培養(yǎng)【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】（1）由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體，稱(chēng)為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過(guò)程就是純培養(yǎng)。微生物的純培養(yǎng)步驟有配置培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離、培養(yǎng)等。（2）微生物常見(jiàn)的接種的方法：A、平板劃線(xiàn)法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基，通過(guò)分區(qū)劃線(xiàn)稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。B、稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木悍謩e涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落?！久}方向】下列有關(guān)微生物的純培養(yǎng)、分離及計(jì)數(shù)的敘述，正確的是（）A．培養(yǎng)基配方中都含有碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽及瓊脂等成分B．用纖維素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇分離出尿素分解菌C．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的樣品活菌數(shù)目往往與實(shí)際數(shù)目多D．平板劃線(xiàn)法通過(guò)連續(xù)劃線(xiàn)將聚集的菌種分散，但不宜用于計(jì)數(shù)分析：微生物常見(jiàn)的接種的方法：（1）平板劃線(xiàn)法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基，通過(guò)分區(qū)劃線(xiàn)稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。（2）稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木悍謩e涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。解答：A、培養(yǎng)基配方中一般都含有碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽等成分，瓊脂是制作固體培養(yǎng)基所需要的凝固劑，A錯(cuò)誤；B、用纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基可以選擇分離出纖維素分解菌，用尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以選擇分離出尿素分解菌，B錯(cuò)誤；C、利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀(guān)察到的是一個(gè)菌落，所以統(tǒng)計(jì)結(jié)果比活菌實(shí)際數(shù)目低，C錯(cuò)誤；D、平板劃線(xiàn)法通過(guò)連續(xù)劃線(xiàn)將聚集的菌種分散，但平板劃線(xiàn)法不能對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，D正確。故選：D。點(diǎn)評(píng)：本題主要考查的是培養(yǎng)基的配制、微生物的純培養(yǎng)以及微生物的數(shù)量測(cè)定的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)基礎(chǔ)知識(shí)的理解掌握，難度適中?！窘忸}思路點(diǎn)撥】掌握微生物的純培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)是解題的關(guān)鍵。2．微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)：1．分離菌株的思路（1）自然界中目的菌株的篩選①依據(jù)：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。②實(shí)例：PCR技術(shù)過(guò)程中用到的耐高溫的TaqDNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來(lái)的Taq細(xì)菌中提取出來(lái)的。（2）實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選①原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度．pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。②方法：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法（1）稀釋涂布平板法（間接）①當(dāng)樣品的稀釋庋足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。②通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來(lái)推測(cè)樣品中大約含有的活菌數(shù)。（2）利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)3．分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。4．實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長(zhǎng)的菌落→鑒定?！久}方向】自生固氮菌是土壤中能獨(dú)立固定空氣中氮?dú)獾募?xì)菌，科研人員進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測(cè)定的研究，部分實(shí)驗(yàn)流程如圖所示。下列敘述正確的是（）A.培養(yǎng)自生固氮菌時(shí)，可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，接種完成后培養(yǎng)皿應(yīng)倒置B.該純化培養(yǎng)的方法是稀釋涂布平板法，統(tǒng)計(jì)細(xì)菌數(shù)量時(shí)通常會(huì)低于真實(shí)值C.步驟①獲取土壤一般來(lái)自深層土壤，為防止其他雜菌污染可對(duì)獲取土壤滅菌處理D.若④的平板上菌落平均數(shù)為58個(gè)，則每克土壤中含有的固氮菌約5.8×105個(gè)分析：培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)；分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因?yàn)樗鼈儊?lái)源于動(dòng)物原料，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。在提供上述幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的要求。解答：A、培養(yǎng)自生固氮菌時(shí)，一般不需要添加氮源，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基含有氮源，A錯(cuò)誤；B、該純化培養(yǎng)的方法是稀釋涂布平板法，由于多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)長(zhǎng)出來(lái)的是單個(gè)菌落，因此統(tǒng)計(jì)細(xì)菌數(shù)量時(shí)通常會(huì)低于真實(shí)值，B正確；C、步驟①獲取土壤一般來(lái)自淺層土壤，對(duì)土壤滅菌處理時(shí)也殺死了固氮菌，C錯(cuò)誤；D、10g土壤加到90mL無(wú)菌水后，稀釋了10倍，在④中相當(dāng)于稀釋了104倍，若在④的平板上統(tǒng)計(jì)的菌落的平均數(shù)量為58個(gè)，則每克土壤中含有的固氮菌為58÷0.1×104＝5.8×106個(gè)，D錯(cuò)誤。故選：B。點(diǎn)評(píng)：本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，難度適中?！窘忸}思路點(diǎn)撥】掌握稀釋涂布平板法的相關(guān)步驟，結(jié)合題干進(jìn)行分析解答3．植物體細(xì)胞雜交技術(shù)及應(yīng)用【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】（1）植物體細(xì)胞雜交技術(shù)：將不同來(lái)源的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。（2）去除植物細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體的方法：酶解法（纖維素酶和果膠酶處理）。（3）誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法：物理法：電融合法、離心法；化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+_高pH融合法。（4）植物體細(xì)胞雜交的原理原生質(zhì)體融合的過(guò)程利用了細(xì)胞膜的流動(dòng)性，雜種細(xì)胞發(fā)育成雜種植株利用了植物細(xì)胞的全能性。（5）植物體細(xì)胞雜交的意義打破生殖隔離，克服了遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種?！久}方向】擬矮牽牛的原生質(zhì)體在X培養(yǎng)基（A）上只能形成小細(xì)胞團(tuán)，不能形成植株，在含放線(xiàn)菌素﹣D的X培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)結(jié)果相同；矮牽牛的原生質(zhì)體在A上能分化成植株，但在B上不能生長(zhǎng)。在A、B上利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)均可培養(yǎng)出可育雜種矮牽牛。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（）A．酶解法制備原生質(zhì)體時(shí)，應(yīng)在等滲或稍微高滲溶液中進(jìn)行B．只有雜種細(xì)胞能在B上形成植株C．獲得的雜種矮牽牛可育，說(shuō)明擬矮牽牛和矮牽牛屬于同一物種D．植物體細(xì)胞雜交技術(shù)應(yīng)用的原理是細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性分析：植物體細(xì)胞雜交的具體過(guò)程：解答：A、酶解法去壁制備原生質(zhì)體應(yīng)在等滲或略高滲透壓的溶液中進(jìn)行，防止原生質(zhì)體在低滲溶液中會(huì)吸水漲破，A正確；B、根據(jù)題干信息“擬矮牽牛的原生質(zhì)體在X培養(yǎng)基（A）上只能形成小細(xì)胞團(tuán)，不能形成植株，在含放線(xiàn)菌素﹣D的X培養(yǎng)基（B）上培養(yǎng)結(jié)果相同；矮牽牛的原生質(zhì)體在A上能分化成植株，但在B上不能生長(zhǎng)”，說(shuō)明只有雜種細(xì)胞能在含放線(xiàn)菌素﹣D的X培養(yǎng)基上形成植株，B正確；C、通過(guò)植物體細(xì)胞雜交獲得的雜種矮牽牛，不論擬矮牽牛和矮牽牛是否屬于同一物種，雜種矮牽牛都可育，C錯(cuò)誤；D、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)利用了細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性的原理，D正確。故選：C。點(diǎn)評(píng)：本題考查植物體細(xì)胞雜交的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記植物體細(xì)胞雜交的具體過(guò)程及意義，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)?！窘忸}思路點(diǎn)撥】4．單克隆抗體及其應(yīng)用【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】1、抗體：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體．從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差．2、單克隆抗體的制備（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞（2）獲得雜交瘤細(xì)胞①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體．（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取3、單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)．（2）用于治療疾病和運(yùn)載藥物．5．動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】體細(xì)胞核移植過(guò)程（以克隆高產(chǎn)奶牛為例）：【命題方向】如圖為核移植實(shí)驗(yàn)過(guò)程示意圖，根據(jù)圖示分析，下列敘述錯(cuò)誤的是（）A．胚胎和動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)均需提供95%的O2和5%的CO2B．核移植技術(shù)的基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)C．受體動(dòng)物超數(shù)排卵后為胚胎提供了相同的生理環(huán)境D．成年動(dòng)物細(xì)胞核移植成功率比胚胎細(xì)胞核移植成功率低分析：1、將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱(chēng)為克隆動(dòng)物。原理是動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。2、體細(xì)胞核移植過(guò)程（以克隆高產(chǎn)奶牛為例）：解答：A、胚胎和動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)均需提供95%的空氣（有利于細(xì)胞呼吸，進(jìn)行正常代謝活動(dòng)）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的pH），A錯(cuò)誤；B、體細(xì)胞核移植需要對(duì)移植后的動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，因此基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，B正確；C、受體動(dòng)物進(jìn)行同期發(fā)情處理后為胚胎提供了相同的生理環(huán)境，C錯(cuò)誤；D、由于分化程度不同，即胚胎細(xì)胞的分化程度低于體細(xì)胞，因此成年動(dòng)物細(xì)胞核移植成功率比胚胎細(xì)胞核移植成功率低，D正確。故選：AC。點(diǎn)評(píng)：本題考查細(xì)胞核移植技術(shù)，要求考生識(shí)記細(xì)胞核移植技術(shù)的概念、過(guò)程、類(lèi)型及應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題?！窘忸}思路點(diǎn)撥】掌握動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)的相關(guān)知識(shí)是解題的關(guān)鍵。6．體外受精和胚胎移植【知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)識(shí)】胚胎移植（1）胚胎移植是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎，或者通過(guò)體外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同種的、生理