T-GXAS 523-2023 污泥 糞大腸菌群的測(cè)定 酶底物法

GXASSludge—Determinationoffecalcoliforms—EnzymesubstratemI 2 2 3 4 5 6 6 6 7 9 本文件參照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》和HJ南寧市水安全工程技術(shù)研究中心、南寧市城鄉(xiāng)供水排水工程研究中心、廣西標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)本文件主要起草人：王莉莉、韋純忠、吳家勇、何東明、潘尚麗、管運(yùn)濤、蒙金燕、蔣嚴(yán)波、李世龍、曹珊、王紹艷、李洪、莫婉湫、申學(xué)安、凌威、羅皓百、吳章雁、朱高俊、冉琪、勞靜丹、1污泥糞大腸菌群的測(cè)定酶底物法本文件描述了使用酶底物法測(cè)定污泥中糞大腸菌群本方法檢出限為10MPN/g。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格GB/T24188城鎮(zhèn)污水處理廠污GB/T24600城鎮(zhèn)污水處理廠污泥處置土地改良用泥質(zhì)HJ1001水質(zhì)總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測(cè)定酶底物法GB24188、GB/T24600、HJ1001界3.1城鎮(zhèn)生活污水處理廠污泥經(jīng)過(guò)減量化、穩(wěn)定化、無(wú)害化3.2在103℃~105℃下烘干至恒重的污泥樣品。3.3糞大腸菌群菌值valuesoffecalco檢出一個(gè)糞大腸菌菌落形成單位的最小樣本量。2N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸鈉鹽（HEN-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸（HEPES）5.5無(wú)菌水：取適量實(shí)驗(yàn)用水，經(jīng)高壓蒸汽滅菌器（26.1采樣瓶：經(jīng)過(guò)滅菌處理的耐高壓塑6.4恒溫培養(yǎng)箱：允許溫度偏差44.5℃±0.5℃。36.8移液管：1mL±0.01mL、10mL±0.1mL。也可采用計(jì)量合格的可調(diào)式移液器。6.12刮板。6.13鑷子。注：采樣瓶（6.1）、樣品瓶（6.2）、移液管（6.8）、三角瓶（6.97.1.3系統(tǒng)采樣法：在污泥處置車(chē)間，污泥通過(guò)壓濾機(jī)、輸送帶等形式連續(xù)排出的移動(dòng)過(guò)程中，按一7.1.4污泥樣品應(yīng)采集瞬時(shí)樣品，采用系統(tǒng)采樣法連續(xù)采樣時(shí)，單獨(dú)采集，不應(yīng)混合采集。污泥樣品注1：若樣品為經(jīng)過(guò)氯消毒的污泥，在采樣），7.2.1將樣品置于無(wú)菌托盤(pán)（6.11）內(nèi)，用無(wú)菌注2：經(jīng)過(guò)石灰處理的樣品在稀釋均質(zhì)后，調(diào)整pH值至4定量盤(pán)背面，趕除孔內(nèi)氣泡，然后用程控定量封口機(jī)（6.5）封口，使每個(gè)孔格內(nèi)都有液體。觀察9定量盤(pán)顏色，若出現(xiàn)類(lèi)似或深于標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性比色盤(pán)（5.11）的顏色或者其他異色，在排查樣品、培養(yǎng)基（5.2）、無(wú)菌水（5.5）等因素后，終7.4培養(yǎng)將封口后的97孔定量盤(pán)放入恒溫培養(yǎng)箱（6.4）中，在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24h。7.5對(duì)照試驗(yàn)每次試驗(yàn)都用無(wú)菌水（5.5）按照步驟7.2～7.4進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室空白測(cè)定。若有陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)，該次樣克雷伯氏菌屬（Klebsiellatrevisan耐熱型）糞鏈球菌（Streptococcusfaecal性菌株應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)；陰性菌株應(yīng)呈現(xiàn)陰性反應(yīng)，否則，注：可先制備較高濃度菌懸液，釆用血球計(jì)數(shù)器在顯微鏡下對(duì)其濃度進(jìn)行初步測(cè)定，然后根據(jù)實(shí)際情況用無(wú)菌水），8.1.1計(jì)算原始（濕）污泥的糞大腸菌按照附錄B，從97孔定量盤(pán)法MPN表中査得每100mL稀釋樣品中糞大腸菌群的MPN值后（置信區(qū)間見(jiàn)5······························································MPN值——每100mL稀釋樣品中糞大腸菌群濃度，單位為最大可能數(shù)每一百毫升（MPN/100mLf——每100mL稀釋樣品代表的樣品實(shí)際接種量，單位為克每一百毫升（g/100mL）。8.1.2計(jì)算絕干污泥的糞大腸菌群··································································報(bào)告為糞大腸菌群未檢出或＜10MPN/g。通常報(bào)告原始（濕）污泥中糞大腸菌群濃度。對(duì)采用連續(xù)采樣······································································9精密度為0.44、0.39、0.43和0.27；再現(xiàn)性限為0.44、0.49、0.81和0.31；實(shí)驗(yàn)室間置信區(qū)間63家實(shí)驗(yàn)室6個(gè)實(shí)驗(yàn)組對(duì)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制的樣品（參考室內(nèi)的相對(duì)誤差范圍為0.912.8相對(duì)誤差最終值為1.9%±1.5％。注：微生物測(cè)定數(shù)據(jù)為偏態(tài)分布，上述精密度、準(zhǔn)確度均為對(duì)測(cè)定結(jié)果以10取對(duì)數(shù)后進(jìn)行計(jì)算。11.3宜選用市售商品化培養(yǎng)基。11.4定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)菌株或標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行質(zhì)量控制。11.5每20個(gè)樣品或每批次樣品(≤20個(gè)/批）測(cè)定一個(gè)平行雙樣，測(cè)定結(jié)果以算術(shù)平均值計(jì)。7A.1圖A.1給出了糞大腸菌群酶底物法陰性、陽(yáng)性結(jié)果參考圖，結(jié)果以實(shí)物比色判斷為準(zhǔn)。）；）；）；）；）；8A.2圖A.2