DNA指紋圖的建立及發(fā)展

精選資料可修改編輯1DNA指紋圖的建立及發(fā)展近百年來的研究認(rèn)為，任何遺傳分析都是以遺傳標(biāo)志為基礎(chǔ)的，而任何一個遺傳標(biāo)志的價值又在于其變異性(即多態(tài)性)的大小。有關(guān)遺傳多態(tài)性的研究對促進(jìn)人類學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)以及法醫(yī)學(xué)的發(fā)展，以及對闡明某些疾病的發(fā)病機理乃至協(xié)助診斷等方面都起了十分重要的作用。但以往的研究都是利用各種外部表現(xiàn)型、生理缺陷型、同工酶、多態(tài)蛋白等作為遺傳標(biāo)志，用間接分析來推論相應(yīng)的遺傳基因。70年代末，限制性內(nèi)切酶和重組體DNA技術(shù)的出現(xiàn)以及分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，使人們對遺傳標(biāo)志的研究轉(zhuǎn)向DNA分子本身。由于各種遺傳信息都蘊藏在DNA分子上，生物個體間的差異在本質(zhì)上是DNA分子的差異，因此DNA被認(rèn)為是最可靠的遺傳標(biāo)志。某些DNA序列的差異可通過限制性酶切片段長度的改變來反映，此即限制性片段長度多態(tài)性(restrictionfragmentlengthpolymorphisms,RFLP),其產(chǎn)生是由于點突變、DNA重排、插入或缺失引起的〔1〕。隨著對RFLP研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)了基因組中最有變異性的一類序列——高變異DNA序列，使DNA遺傳標(biāo)志的發(fā)展和應(yīng)用得到了一次飛躍。1980年，Wyman和White描述了第一個多等位性的具有高度多態(tài)性的人類DNA標(biāo)志。不久，在胰島素基因(Insulingene)的5′端區(qū)域、致癌基因(C-HarasIOncogene)的3′端分別發(fā)現(xiàn)了相同的高度可變的標(biāo)志(hypervariablemarker)。在α-球蛋白(α-globin)基因群周圍還發(fā)現(xiàn)了其它三個標(biāo)志〔2〕。1982年，Bell等〔3〕證實：這些高度多態(tài)性區(qū)域串聯(lián)著重復(fù)的短序列單位，重復(fù)單位數(shù)目的差異導(dǎo)致了這種高度的可變性，由于這些結(jié)構(gòu)特征，人們稱這些區(qū)域為小衛(wèi)星(minisatellite)或高度可變區(qū)域(hypervariable)或可變數(shù)目的串聯(lián)重復(fù)(variablenumberoftandemrepeats)。1985年，Jeffreys等〔4〕用肌紅蛋白基因第一內(nèi)含子中的串聯(lián)重復(fù)序列(重復(fù)單位含33bp)作探針，從人的基因文庫中篩選出8個含有串聯(lián)重復(fù)序列(小衛(wèi)星)的重組克隆。序列分析表明，這8個小衛(wèi)星重復(fù)單位的長度和序列不完全相同，但都有相同的核心序列(coresequence)即GGCCAGGA/GGG。他們先后用兩個多核心小衛(wèi)星(polycoreminisate-llite)33.6和33.15探針進(jìn)行southern雜交，在低嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交得到了包含10多條帶的雜交圖譜，不同個體雜交圖譜上帶的位置就象人的指紋一樣千差萬別，Jeffrey稱之為DNA指紋(DNAfingerprint)〔5〕，又名遺傳指紋(geneticfingerprint)。RFLPDNA指紋分析技術(shù)由于方法繁雜、周期長、實驗條件高等缺陷而無法大范圍推廣。1990年，Williams等〔6〕首次報道了AP-PCR技術(shù)，Welsh和McCelland〔7〕亦獨立地進(jìn)行了這方面的工作，從而使DNA指紋技術(shù)應(yīng)用更加廣泛。AP-PCR技術(shù)是采用隨意設(shè)計的1個或2個引物，對模板DNA進(jìn)行PCR擴增，一般先是在低嚴(yán)格條件，即在高M(jìn)g2+濃度(大于傳統(tǒng)PCRMg2+濃度1.5mmol/L)、較低退火溫度(36℃～50我國楊建廠等〔8〕利用PCR的原理成功地建立了一種全新的DNA指紋檢測技術(shù)，稱之為隨機引物PCR人DNA指紋檢測技術(shù)(arbitrarilyprimedPCRhumanDNAfingerprinting,APHDP)，此外還開發(fā)出處理DNA指紋數(shù)據(jù)應(yīng)用軟件，應(yīng)用于個人識別、遺傳素質(zhì)與疾病的相關(guān)特征研究等。2DNA指紋技術(shù)所用的探針自DNA指紋技術(shù)建立以來，這一技術(shù)迅速在動植物的進(jìn)化關(guān)系、親緣關(guān)系分析以及法醫(yī)學(xué)方面得到廣泛應(yīng)用。也正是由于DNA指紋技術(shù)在核酸分析中顯示出了強大的生命力，因而許多學(xué)者圍繞此技術(shù)所用的探針作了大量的工作，除Jeffrey等〔5〕的探針外，用人工化學(xué)合成或從生物組織中提取后再擴增的辦法生產(chǎn)出了一批高水平的探針。迄今，在DNA指紋技術(shù)中所用的探針大概有probe33.15、33.6〔5〕、bacteriophageMB〔9〕、pigrepetitireclonep83、PGB725、poly(GT)containing18.1、(GTG)5/(CAC)5〔10，11〕、(CAC/TA)4及(GT)12等。同時，在探針的標(biāo)志上也有了很大的發(fā)展，根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)可大致分為小衛(wèi)星探針和簡單重復(fù)序列探針，簡單重復(fù)序列包括微衛(wèi)星探針(microsatelliteprobe)和寡聚核苷酸探針。小衛(wèi)星探針的核心序列為33bp，常定位在人常染色體前的末端(proterminal)區(qū)域，微衛(wèi)星探針則在10～20bp之間，而寡聚核苷酸探針在10bp以下，普遍散布在人類整條染色體上，或者在基因間區(qū)域或者位于內(nèi)含子內(nèi)。1988年，我國伍新堯等〔12〕根據(jù)DNA指紋是人基因組中重復(fù)序列的RFLP的原理和人與鼠的髓鞘堿性蛋白(MBP)基因cDNA同源序列性高于90%的事實，選用鼠MBPcDNA3′端的一段序列(非表達(dá)區(qū)高度重序列，與人基因組中該類重復(fù)序列幾乎完全同源)，長度為0.81kb的片段作探針，檢測用HaeⅢ酶解的人DNA限制性片段(RF)，在人群中可分出22條譜帶，受檢的30例無血緣關(guān)系的個體之間沒有兩個人的譜帶是完全相同的，顯示這一方法的高度個體特異性，這是國內(nèi)首次用自已的力量找到DNA指紋的探針。3DNA指紋的應(yīng)用3.1法醫(yī)學(xué)方面同以往的血型測定法相比，DNA指紋技術(shù)在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域上具有無可比擬的優(yōu)越性。已成為鑒定犯罪、親子鑒定和確定個體間親緣關(guān)系的工具〔5，13〕。隨后，國內(nèi)學(xué)者李伯齡〔14〕、姜先華〔15〕、伍新堯等〔12〕也先后對此項技術(shù)進(jìn)行了研究，并應(yīng)用于實際案件的鑒定中，解決了過去無法解決的疑難案例，如微量血痕、部分腐敗的碎尸塊的個人認(rèn)定等。3.2在動植物科學(xué)中的應(yīng)用3.2.1生物種群學(xué)研究利用DNA指紋圖可以估算連鎖不平衡，比較等位基因的頻率，還能估計不同個體之間的重組率，在種群學(xué)研究上有助于建立某一個體在種群中的地位和關(guān)系，特別是對真菌的種群研究，有很多真菌可以通過有性和無性的方式繁殖，但是何時以何種方式繁殖，程度如何，并不清楚，而利用DNA指紋圖就能區(qū)分以有性和無性方式產(chǎn)生的后代，并能確定某一區(qū)域真菌的自然分布〔1，16〕。3.2.2測定物種之間的遺傳距離、物種分類鑒定Jeffreys等〔5〕認(rèn)為在一個群體的不同成員間拷貝數(shù)的串聯(lián)重復(fù)序列(VNTR)由于多態(tài)性程度高，在遺傳分析中尤其適合作為多態(tài)性標(biāo)志，簡單重復(fù)的不穩(wěn)定性可導(dǎo)致VNTR長度的迅速變化，根據(jù)家族中或育種群體中VNTR的分離重組頻率，可以測定出遺傳距離，可用統(tǒng)計學(xué)公式確定個體間的親緣關(guān)系：D=2Nab/(Na+Nb),，D值越大，親緣關(guān)系越近，遺傳距離就越小；D值越小，親緣關(guān)系越遠(yuǎn)，遺傳距離就越大。為此，運用DNA指紋技術(shù)可檢測不同物種、同種及同種不同個體的親緣關(guān)系，用于物種分類鑒定，也可用于雜交后代親本決定，雜交后代群體分開，檢測近等基因系(或同類系)種的多態(tài)性，并對檢測基因進(jìn)行定位。Welsh等〔7〕對布氏疏螺旋體菌株的DNA指紋進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)這種lyme病的病原菌實際上是由三個不同的種群組成。羅超權(quán)等〔12〕運用AP-PCR鑒定弓形蟲蟲株，在國內(nèi)開創(chuàng)了運用DNA指紋技術(shù)作生物分類的先例。3.3在流行病學(xué)方面的運用由于DNA指紋具有以下幾個特點：①能反映基因組的變異性；②具有高度的變異性；③具有簡單的穩(wěn)定的遺傳性；④DNA指紋譜具有體細(xì)胞穩(wěn)定性。所以，它同一般的流行病學(xué)方法相比較而言，具有無比的優(yōu)越性，使其成為流行病調(diào)查的一種有效工具。JanDA等〔17〕，DeniseChevrel-Dellagi等〔18〕運用IS6110序列作探針對結(jié)核病分支桿菌株進(jìn)行DNA指紋分析，調(diào)查國際間結(jié)核病的種型、分析流行情況，改進(jìn)了控制結(jié)核病的方法。而ZhenHuaYang等〔19〕從67個病人中分離出結(jié)核病分支桿菌株進(jìn)行DNA指紋分析，發(fā)現(xiàn)分離到PTBN12型時易查明流行環(huán)節(jié)，從而為快速進(jìn)行疾病控制提供了一個有力證據(jù)。在我國，童笑梅等〔20〕采用隨機擴增多態(tài)DNA指紋圖技術(shù)對醫(yī)院內(nèi)感染的14例新生兒進(jìn)行病原流行病學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)患兒體內(nèi)攜帶的與醫(yī)務(wù)人員鼻中攜帶的華納葡萄球菌菌株的DNA指紋圖完全一致，從而證明此次感染的病原菌為華納葡萄球菌，傳染源是攜帶病菌的醫(yī)務(wù)人員。郭永建等〔21〕在6個月內(nèi)對121名產(chǎn)科新生兒中的30名檢出的31株銅綠假單胞菌進(jìn)行RAPD指紋圖譜分析和血清學(xué)分型，結(jié)果表明，銅綠假單胞菌在產(chǎn)科新生兒中暴發(fā)流行，0∶6/R∶1型為暴發(fā)流行性菌株，對醫(yī)院感染病原菌分型、精確確定傳染源、阻斷傳播途徑、控制和預(yù)防醫(yī)院感染具有重要的指導(dǎo)意義。3.4疾病診斷及治療鑒于DNA指紋所具有的上述特點，故DNA指紋廣泛應(yīng)用于一些疾病的診斷及治療。Morral〔22〕等發(fā)現(xiàn)CF基因9號外顯子側(cè)翼含有一小衛(wèi)星區(qū)，且此等位基因2.6帶常與△F508連鎖，相伴率為50.6%、41.6%，△F508是最主要的致病突變，可疑患者電泳圖只要發(fā)現(xiàn)2.6等位基因，就可對此病進(jìn)行初步診斷。現(xiàn)已在Wilson病、外周神經(jīng)纖維瘤、成人多束腎、多巴性肌緊張、Frecbreich共濟(jì)失調(diào)、Kallmunm綜合征性連鎖、視網(wǎng)膜病等基因內(nèi)或旁側(cè)發(fā)現(xiàn)有高度的小衛(wèi)星區(qū)域，從而可進(jìn)行基因診斷。OkamotoR〔23〕用DNA指紋法預(yù)測慢性粒cell性白血病骨髓移植術(shù)后復(fù)發(fā)，取得了成功。3.5腫瘤的研究腫瘤是多因素、多階段的變化過程，病因復(fù)雜、變化多樣，但歸根到底還是在DNA的變化上。一般說來，癌組織、轉(zhuǎn)移灶與正常組織或外周血細(xì)胞DNA指紋有差別，常見的是某條帶或幾條帶的缺失，某一條或某幾條帶密度降低，或者癌組織中出現(xiàn)新的帶。Thein等〔24〕用33.6和33.15為探針研究患者DNA指紋譜變化，發(fā)現(xiàn)胃腸腫瘤患者癌組織DNA指紋譜全有改變，并認(rèn)為體細(xì)胞突變還有種屬特異性。劉霜等〔25〕應(yīng)用RAPD(隨機擴增多態(tài)性DNA)分析技術(shù)對6例肝癌患者的癌組織與非癌組織進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)所有肝癌組織基因組DNA的RAPD指紋圖譜均存在差異，其中3例配對肝癌基因組中均存在一相同的0.9Kb的隨機擴增片段。楊建廠等〔8〕用APHDFF技術(shù)對28例確診為鼻咽癌病人血DNA指紋圖的檢測，發(fā)現(xiàn)有3條DNA片段出現(xiàn)的頻率明顯低于健康人群。王黛等〔26〕用LE11.8、MYO和Mb探針，經(jīng)Southern雜交法檢測12例兒童急性粒cell白血病患者的外周血或骨髓細(xì)胞的基因重排，結(jié)果發(fā)現(xiàn)初始或復(fù)發(fā)與完全緩解時的DNA指紋圖相比，譜帶有增加或減少，從而認(rèn)為急性粒細(xì)胞白血病患兒的白血病細(xì)胞存在基因重排。什么是DNA指紋

人體包含有100萬億個細(xì)胞，它們組成各種器官和組織。染色體是遺傳物質(zhì)，存在于細(xì)胞核內(nèi)。每個人體細(xì)胞內(nèi)含有23對染色體，它們大小各異。遺傳信息貯存于染色體內(nèi)的DNA分子中，也就是說，基因的化學(xué)本質(zhì)是有遺傳效應(yīng)的DNA片段。每個DNA分子含有很多個基因，基因的復(fù)制就是通過DNA的復(fù)制來完成的。DNA通常以雙螺旋型的雙鏈存在，它的基本組成單元是四個堿基，即腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)。DNA雙鏈通過氫鍵按A—T、G—C的互補配對方式絞結(jié)在一起。上述四種堿基在DNA長鏈中的不同排列組合，構(gòu)成了一系列密碼，在受精卵到個體形成的整個過程中起到調(diào)控作用，從而使得人類個體之間的特征千變?nèi)f化，互相區(qū)別。

人類基因組DNA中貯存著可供正常生存和遺傳的信息，這些信息以基因、密碼的形成排列組合在DNA分子之中，其中能夠制造蛋白質(zhì)的基因約有8萬個。DNA由以堿基、核糖和磷酸構(gòu)成的核苷酸長鏈組成，核苷酸排列方式叫序列，即一級結(jié)構(gòu)。DNA序列中存在三種類型：單拷貝序列、中等程度重復(fù)序列和高度重復(fù)序列。重復(fù)序列就是一種序列在DNA分子中重復(fù)出現(xiàn)幾百次、幾千次、幾萬次甚至百萬次，它們約占DNA總序列的3～4％。每個重復(fù)序列在300個核苷酸長度之內(nèi)，由于高度重復(fù)序列經(jīng)超離心后，以衛(wèi)星帶出現(xiàn)在主要DNA帶的鄰近處，所以也被稱為“衛(wèi)星DNA”。衛(wèi)星DNA中的重復(fù)序列單元則稱為“小衛(wèi)星DNA”。

“小衛(wèi)星DNA”具有高度的可變性，不同個體彼此不同。但“小衛(wèi)星DNA”中有一小段序列則在所有個體中都一樣，稱為“核心序列”。如果把核心序列串聯(lián)起來作為分子探針，與不同個體的DNA進(jìn)行分子雜交，就會呈現(xiàn)出各自特有的雜交圖譜，它們與人的指紋一樣，具有專一性和特征性，因人而異，因此被稱作“DNA指紋”(DNAfingerprint)。

二、DNA指紋的特點

概括起來說，DNA指紋具有以下三大特點：

1、多位點性高分辨率的DNA指紋圖通常由15～30條帶組成，看上去就像掛號信上的條碼簽一樣。DNA指紋區(qū)中的絕大多數(shù)區(qū)帶是獨立遺傳的。因此，一個DNA指紋探針能同時檢測基因組中數(shù)十個位點的變異性。

2、簡單的遺傳方式DNA指紋圖中的區(qū)帶是可以遺傳的，這不同于人的指紋。DNA指紋區(qū)帶遵循簡單的孟德爾遺傳方式。后代圖中的每一條帶都可以在雙親之一的圖中找到，只有0.004的可能性，使子女中的一條帶不能在其父母中的圖中找到(基因自發(fā)突變的結(jié)果)。同一個體無病變的不同組織產(chǎn)生的DNA指紋圖完全相同，并能在培養(yǎng)的細(xì)胞株中維持下去。需要說明的是，同卵雙胞胎的DNA指紋圖完全相同。

3、高度變異性不同的個體或群體有不同的DNA指紋圖。一般選用任何一種識別四個堿基的內(nèi)切酶，這種變異性就能表現(xiàn)出來。英國遺傳學(xué)家杰弗里斯對白種人研究表明，兩個隨機個體具有完全相同的DNA指紋圖的概率，為三千億分之一(即3×10-11)。兩個同胞個體具有相同圖譜的概率也僅僅為二百萬分之一(即2×10-6)。

三、DNA指紋術(shù)的工作原理

一般要通過以下幾點來完成：

1、將送檢的各種生物學(xué)檢樣，如毛發(fā)、血痕、精斑、人體組織或白骨等，把其中所含的DNA提取出來。

2、選用與探針配對的限制性核酸內(nèi)切酶，在長鏈DNA位置上加以切割，使分子量很大的DNA長鏈切短成許多長度不同的小片段。

3、在膠板尺寸較長的凝膠電泳儀中，對酶解完全后的DNA片段進(jìn)行電泳，各酶切片段就會按其長度大小在電場中進(jìn)行分離。

4、先用堿性溶液使凝膠板中分離開的雙鏈DNA片段變性為單鏈片段，然后將凝膠板夾在尼龍膜中，使這些單鏈DNA片段印潰(blot-ting)，轉(zhuǎn)移并永久性地固定在尼龍膜上。

5、讓放射性DNA探針與尼龍膜上的單鏈DNA片段進(jìn)行分子雜交。

6、用放射性膠片與尼龍薄膜疊放，尼龍膜上的放射性探針便會發(fā)出X射線使膠片曝光，從而使雜交有探針的長度不同的DNA片段位置顯影在膠片上。這樣的特征DNA片段條狀圖譜，便是所謂的DNA指紋。

四、DNA指紋術(shù)的應(yīng)用

由于DNA指紋提供了豐富的個體特異性遺傳標(biāo)記，因而在法醫(yī)學(xué)鑒定中具有重要意義。其主要應(yīng)用有以下幾個方面：

1、在刑事案件中的應(yīng)用在法醫(yī)學(xué)上，如果確定某人是嫌疑犯，則可提取其血樣或毛發(fā)的DNA，做出DNA指紋，然后由犯罪現(xiàn)場殘留的血、精液、唾液、痰液、毛發(fā)、骨骼或其他肉體成分提取的DNA指紋相對照。若兩者一樣，則稱其指紋相配，證明該嫌疑犯就是作案的罪犯，反之則否。通常進(jìn)行上述指紋相配的簽定叫“配型”工作。

在DNA指紋術(shù)見諸報道的第二年，即1986年的秋天，英國累斯特遠(yuǎn)郊的警察拘捕了一名涉嫌先后奸殺兩名少女的嫌疑犯。警方向杰弗里斯教授提供了從兩名受害人身上采集到的精斑和陰道拭子。經(jīng)過DNA指紋術(shù)分析后，杰弗里斯提出的鑒定報告是兩名受害人處的精斑均來自同一人，但決非是已被拘捕的青年的。此后，警方用去了50萬英磅的辦案經(jīng)費，借助DNA指紋術(shù)將真正的罪犯抓捕歸案。

2、在親子鑒定中的應(yīng)用自從杰弗里斯等人于1985年首次對一起移民糾紛中的母子關(guān)系作出肯定鑒定以來，用DNA指紋術(shù)進(jìn)行親子鑒定已有近10年的歷史了。代表性的報道有：在一起無名尸的鑒定過程中，專家們將提取到的腐尸殘血中的DNA，和假定受害人雙親的DNA進(jìn)行DNA指紋鑒定后，成功地對這具無名尸的人身作出了鑒定。在常規(guī)血清學(xué)檢驗不能對親子關(guān)系作出肯定結(jié)論的情況下，采用DNA指紋術(shù)便可輕易地作出結(jié)論。

3、空難事故受難者殘骸鑒定通常在空難受害者殘骸的鑒定過程中，單純依靠法醫(yī)學(xué)和常規(guī)法血清學(xué)檢驗，是很難對所有遇難人員的殘骸加以區(qū)分的。因此，在常規(guī)手段行不通時，再采用DNA指紋術(shù)實為一種最佳選擇。

4、人種、性別鑒定英國內(nèi)政部中央研究局研究表明，DNA指紋術(shù)可在相當(dāng)大程度上用于人種鑒定，并測出白種人和非洲黑人的DNA多態(tài)片段及它在特定范圍內(nèi)的出現(xiàn)頻率，具有種屬代表性。有人對長達(dá)20年的陳舊血跡中的降解DNA進(jìn)行了性別鑒定，并在人、獸的區(qū)分鑒定中取得成功。

5、其它方面的應(yīng)用鑒別雙胞胎是異卵雙生還是同卵雙生，只需比較一下兩者的DNA指紋圖即可。

DNA指紋術(shù)也可用于器官移植的配型試驗，以便篩選出最佳供體。

腫瘤細(xì)胞DNA指紋，因其染色體丟失或異常的擴增而與正常體細(xì)胞不同。因此，腫瘤DNA指紋的改變可用作腫瘤發(fā)生和發(fā)展的標(biāo)志。

在盜殺和偷捕野生動物的案件中，用不同的DNA指紋術(shù)，對遺棄在野外的殘余動物組織、市場上出售的動物組織，以及盜獵者冰箱中的動物組織進(jìn)行分析，可對被盜殺的動物進(jìn)行鑒定。

DNA指紋術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域很廣泛，尤其在司法鑒定中有著獨特而權(quán)威的應(yīng)用。

五、DNA指紋術(shù)論戰(zhàn)風(fēng)暴

自從1985年英國遺傳學(xué)家杰費里斯發(fā)現(xiàn)DNA指紋以來，DNA指紋術(shù)已被廣泛應(yīng)用于解決那些根據(jù)表型遺傳標(biāo)記無法解決的醫(yī)學(xué)、人類學(xué)、社會學(xué)和法律學(xué)問題。最令人刮目相看的是它風(fēng)靡法醫(yī)學(xué)界，并正開始改變法醫(yī)學(xué)的面貌。

由于DNA指紋術(shù)直接用于法醫(yī)學(xué)，涉及對罪犯的判別和刑罰這樣性命悠關(guān)的大事，所以法院法官對此不敢貿(mào)然采用贊同或否定的態(tài)度。他們對DNA指紋術(shù)的可靠程度不夠了解，有較多顧慮。

其實，這是科學(xué)界對該技術(shù)爭議不決的一種反映。在歐美科學(xué)界(主要在生物醫(yī)學(xué)界)，爭論雙方都有有影響的科學(xué)家參加。支持者認(rèn)為，DNA指紋完全可以推廣應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)而不會發(fā)生任何偏差，力主大膽應(yīng)用。懷疑者提出一些目前尚難準(zhǔn)確回答的疑問。歸納起來有以下幾個問題分歧較大：

1、關(guān)于DNA指紋配型的機率。

2、從事DNA指紋鑒定的實驗質(zhì)量控制。

過去各家對相配機率(即多少人中可以出現(xiàn)一對相配DNA指紋)的估計，缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和足夠準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，所以估計數(shù)字相差甚殊，由五百萬分之一到1014分之一不等。有一段時間不少人估計，大約50億人口中有兩個人的DNA指紋完全相同，故認(rèn)為在當(dāng)今世界總?cè)丝?0億的情況下，應(yīng)用DNA指紋鑒定罪犯是可靠的。一些權(quán)威的群體遺傳學(xué)家認(rèn)為，DNA指紋術(shù)研究者計算出來的頻率離實際值太遠(yuǎn)，沒有考慮人口亞結(jié)構(gòu)的存在。人口亞結(jié)構(gòu)即人