馬人工授精技術(shù)規(guī)程（征求意見稿）

1T/XXXXXXX—XXXX馬人工授精技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了馬人工授精過程中精液采集、品質(zhì)檢查、精液稀釋、發(fā)情鑒定、輸精、妊娠鑒定等的技術(shù)方法和要求。本文件適用于馬的人工授精。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1人工授精artificialinsemination在人工條件下，利用器械將公馬的精液采出，經(jīng)過處理后（品質(zhì)檢查、稀釋、保存等），再用器械將合格精液輸送到母馬生殖道內(nèi)，使其受孕的一種配種方法。3.2種公馬stallion具有良好的體型外貌、完善的生長發(fā)育、肌肉強(qiáng)健、精液品質(zhì)高、符合品種特征的健康公馬。3.3母馬mare身體健康、發(fā)情周期規(guī)律、繁殖機(jī)能正常、達(dá)到適配年齡的未妊娠母馬。3.4發(fā)情鑒定estrusidentification綜合利用外部觀察法、直腸檢查法和試情法等多種方法確定母馬的發(fā)情狀態(tài)。4采精前準(zhǔn)備4.1采精場地應(yīng)設(shè)有采精室或固定采精場地，采精場地應(yīng)寬敞平坦、安全衛(wèi)生，配有清洗消毒設(shè)施、假畜臺(tái)。4.2設(shè)備器具假陰道外殼、內(nèi)胎應(yīng)依次用洗潔精、2%碳酸氫鈉溶液清洗，再用干凈紗布遮蓋晾干。采精前30min，用75%酒精棉球?qū)訇幍纼?nèi)胎壁、集精杯內(nèi)外璧由內(nèi)向外消毒。玻璃、金屬器械等耐高溫器械應(yīng)用溫水浸泡、洗凈晾干后，再用干凈紗布或白棉布包裹放置高壓滅菌鍋中消毒30min。玻璃器械應(yīng)用75%酒精浸泡消毒，待酒精揮發(fā)后方能使用；塑料及橡膠制品放置在距離紫外線燈下60cm處照射滅菌30min以上。凡與精液、馬生殖器（道）接觸的其他器具均應(yīng)徹底洗凈后嚴(yán)格消毒，再用稀釋液沖洗后使用。4.3臺(tái)馬選擇健康無病、性情溫順、營養(yǎng)中等膘情發(fā)情母馬為臺(tái)馬，保定并用繃帶布包扎馬尾并系于馬體左側(cè)，臺(tái)馬外陰部用0.1%高錳酸鉀溶液清洗消毒，用消毒紗布或毛巾擦干。4.4種公馬2種公馬陰莖及包皮宜用1%來蘇爾消毒液消毒，溫水沖洗干凈后用消毒紗布擦干。5采精5.1假陰道的安裝5.1.1安裝內(nèi)胎假陰道外殼兩端應(yīng)光滑，將內(nèi)胎放入外殼，使內(nèi)胎露出外殼兩端的部分等長，后將內(nèi)胎翻轉(zhuǎn)套在外殼上，內(nèi)胎平整無扭曲，用橡膠圈固定兩端。5.1.2注水在氣閥口向假陰道內(nèi)胎夾層灌入1500ml～3000ml溫水，水量宜為外殼與內(nèi)胎間容量1/3～1/2。5.1.3涂潤滑劑在假陰道入口前1/3段，用玻璃棒均勻涂抹5ml滅菌甘油。5.1.4充氣調(diào)壓內(nèi)腔充氣壓力視公馬陰莖的粗細(xì)、長短調(diào)整，內(nèi)胎呈“Y”或“X”字型，入口宜為較淺的漏斗狀。5.1.5測(cè)溫用水溫計(jì)伸入假陰道中間部位，測(cè)量溫度，宜為38℃~40℃。假陰道入口端用消毒紗布蓋好，裝入保溫箱內(nèi)備用。5.2采精采精員穿防護(hù)服，雙手清洗消毒后戴橡膠手套，右手持假陰道把柄并靠在右臂肘處，站于臺(tái)馬右后側(cè)，調(diào)整假陰道角度使之與公馬陰莖伸出方向一致，左手托住陰莖基部使其自然插入假陰道。公馬射精完畢后，將假陰道的集精杯端放低并打開活塞放氣，充分排精后，緩慢將假陰道豎起并移開，將精液及時(shí)送至處理室。6精液品質(zhì)檢查6.1外觀檢查精液品質(zhì)檢查在20℃~25℃室溫條件下進(jìn)行。取下集精杯，用4層無菌紗布或?qū)Ｓ脼V網(wǎng)過濾，讀取精液量，正常射精量應(yīng)在40ml～70ml之間。檢查色澤、氣味，正常新鮮精液應(yīng)為淡乳白色或灰白色，有特殊腥味。異常精液應(yīng)廢棄6.2顯微鏡檢查6.2.1活率檢查時(shí)顯微鏡載物臺(tái)溫度應(yīng)保持37℃~38℃,用移液器取原精液，滴在潔凈的載玻片上加蓋玻片，在顯微鏡下放大400倍對(duì)精液樣品進(jìn)行觀察，每個(gè)演片不少于3個(gè)視野，上下調(diào)節(jié)旋鈕，觀察不同層次內(nèi)的精子運(yùn)動(dòng)情況，求其活力的平均值。視野中估算直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)所占全部精子的百分?jǐn)?shù)，直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子為100%者評(píng)為1.0，90%者為0.9，以此類推。新鮮精液活率≤0.7時(shí)應(yīng)廢棄。6.2.2密度用移液器取原精液，滴在潔凈的載玻片上加蓋玻片，顯微鏡放大100倍觀察。視野內(nèi)精子彼此之間空隙小于一個(gè)精子的長度，評(píng)為“密”；視野內(nèi)精子彼此之間空隙約為一個(gè)精子的長度，評(píng)為“中”；視野內(nèi)精子彼此之間空隙大于一個(gè)精子的長度，評(píng)為“稀”。精子密度≤1×109/ml應(yīng)廢棄。6.2.3畸形率3T/XXXXXXX—XXXX用移液器取原精液，滴在潔凈的載玻片上加蓋玻片，顯微鏡放大200倍～400倍觀察畸形精子數(shù)，計(jì)算畸形精子的百分率。精子畸形率≥10%時(shí)應(yīng)廢棄。6.2.4存活時(shí)間在15℃~20℃常溫保存狀態(tài)下，精子存活時(shí)間應(yīng)在48h以上，精子活率≥0.7；在超低溫環(huán)境下，精子可長期保存，解凍后活率≥0.35?；盥十惓?yīng)廢棄。6.3數(shù)據(jù)記錄精液品質(zhì)檢查相關(guān)數(shù)據(jù)應(yīng)準(zhǔn)確記錄，記錄表參照附錄A.7精液稀釋7.1稀釋液的選擇可選用商品專用稀釋液，或自配稀釋液，自配稀釋液現(xiàn)配現(xiàn)用。7.2稀釋倍數(shù)根據(jù)精液密度及活率確定適合的稀釋倍數(shù)，稀釋倍數(shù)宜為2倍～4倍。精液稀釋后，每ml精子數(shù)不少于5000千萬。7.3稀釋方法原精存放時(shí)間不應(yīng)超過20min，品質(zhì)檢查后應(yīng)盡快稀釋。精液等溫稀釋，稀釋液的溫度根據(jù)精液溫度來調(diào)節(jié)，二者溫差不超過1℃。稀釋時(shí)，將稀釋液沿量杯內(nèi)壁緩慢加入到精液中，用玻璃棒輕拌混合均勻。8母馬發(fā)情期鑒定8.1外部觀察母馬發(fā)情期表現(xiàn)為經(jīng)常嘶叫，眼光銳利，精神緊張不安，叉腿弓腰，尾根舉起，愿意接受爬跨，陰唇表現(xiàn)節(jié)奏性收縮，陰蒂外露，排尿或有排尿線，陰道黏液有時(shí)流出陰門，黏著在尾毛上。8.2直腸檢查卵泡發(fā)育一瑞卵巢增大并下沉，卵泡直徑4cm～6cm。卵巢壁簿，觸診彈性強(qiáng)、波動(dòng)明顯。排卵窩被充滿，無洼陷感。觸摸卵巢，母馬有疼痛感，抬起一側(cè)后肢。8.3超聲波檢查使用B超儀檢查卵泡發(fā)育情況，卵泡直徑4cm左右，卵泡壁呈現(xiàn)增厚。9輸精9.1輸精前準(zhǔn)備9.1.1輸精用品準(zhǔn)備橡膠輸精導(dǎo)管或一次性塑料輸精導(dǎo)管。橡膠導(dǎo)管每次輸精前用稀釋液或生理鹽水潤洗內(nèi)管，每次用后應(yīng)立即用自來水沖洗內(nèi)外，然后用蒸餾水沖洗后晾干，再用75%酒精沖洗，酒精完全揮發(fā)后備用。9.1.2輸精人員將手和手臂徹底洗凈后，用1%～2%的來蘇兒液或1%的新潔爾滅液浸泡消毒，再用無菌蒸餾水或2%碳酸氫鈉液沖凈至無味，戴無菌手套。9.1.3輸精母馬4將發(fā)情母馬保定在保定欄內(nèi)，尾部用繃帶從尾根部纏繞約30cm后束在一起，用繩子將尾部拉向左前方。外陰部用消毒液沖洗后用紙巾擦干。9.1.4精液準(zhǔn)備若使用冷凍精液應(yīng)先解凍，加入20℃左右解凍液后混合均勻，輸精前精液應(yīng)升溫至25℃~30℃。用注射器吸取20ml～30ml稀釋好的精液，連接可視輸精槍，用溫毛巾包好注射器。9.2輸精方法9.2.1子宮角細(xì)管輸精將已裝入細(xì)管精液的輸精器緩緩插入陰道內(nèi)，中指通過子宮頸口，另一只手握住輸精器向前推送，使輸精器槍頭在中指下進(jìn)入子宮內(nèi)，推不動(dòng)即停止推送并固定，將陰道內(nèi)的手臂取出五指并攏伸入直腸深處，此時(shí)手掌向下可以感覺到輸精器及馬子宮分叉處。另一只手將輸精器前端先斜向上，使輸精器進(jìn)入排卵側(cè)子宮體內(nèi)使其和輸精器成直線，然后將輸精器前端緩慢導(dǎo)入此側(cè)子宮角內(nèi)輸精。9.2.2子宮體輸精將連接有精液玻璃注射器的輸精膠管插入陰道內(nèi)。四指握住輸精膠管將輸精膠管推送到馬子宮頸口至子宮體分叉處，另一只手握住玻璃注射器，利用下巴或前胸向前推送，將精液推送至子宮內(nèi)。9.3輸精次數(shù)卵泡發(fā)育至四期時(shí)開始輸精，一個(gè)發(fā)情期輸精次數(shù)應(yīng)在3次以內(nèi)。宜在排卵前和排卵后各輸精一次，早、晚輸精。輸精間隔時(shí)間36h～48h。9.4數(shù)據(jù)記錄輸精信息應(yīng)記錄并保存。10妊娠鑒定10.1外部觀察妊娠母馬外部表現(xiàn)發(fā)情周期停止，食欲增進(jìn)，被毛光澤，性情溫順，不愿合群。10.2直腸檢查妊娠14d～16d，馬子宮角收縮呈圓柱狀，角壁肥厚，用手觸捏有實(shí)心感，略有彈性，一側(cè)卵巢有黃體存在。妊娠17d～24d，馬子宮角收縮，更加硬化，輕捏尖端捏不扁，實(shí)心感較強(qiáng)。在子宮角的基部，胚泡向下突出明顯，如鴿蛋大小。妊娠25d～30d，子宮角收縮，堅(jiān)硬，胎泡體積大如雞蛋。妊娠30d～40d，胎泡增長速度較快，胎泡如拳頭大，觸之柔軟，波動(dòng)明顯。妊娠40d～50d，胎泡直徑達(dá)10cm～12cm，孕角由于重量增加而稍下沉，此時(shí)胎泡處子宮明顯變薄，其形態(tài)與充滿尿液的膀胱相似。妊娠60d～70d，胎泡增長迅速，縱徑大于橫徑，平均直徑達(dá)12cm～16cm，兩側(cè)卵巢下降并彼此向體軸中線靠近。妊娠80d～90d，胎泡直徑近25cm，如籃球大，兩個(gè)子宮角幾乎完全被胎兒所占據(jù)下沉，摸不到全部子宮和胎兒，子宮頸增粗，前移，牽拉有沉重感。妊娠90d以后，胎泡完全沉入腹腔，直腸檢