《水質(zhì) 六溴環(huán)十二烷的測定 高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法》（征求意見稿）

3T/GDAEMXXXX—2024水質(zhì)六溴環(huán)十二烷的測定高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法警告：實(shí)驗(yàn)中使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和有機(jī)溶劑均為有毒化合物，試劑配制和樣品前處理過程應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；操作時(shí)應(yīng)按要求佩戴防護(hù)器具，避免吸入呼吸道或接觸皮膚和衣物。1適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定水中六溴環(huán)十二烷的高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、地下水、廢水中α-六溴環(huán)十二烷、β-六溴環(huán)十二烷、γ-六溴環(huán)十二烷的測定。當(dāng)取樣量為1L，定容體積1.0ml，進(jìn)樣體積5.0μl時(shí)，α-六溴環(huán)十二烷、β-六溴環(huán)十二烷、γ-六溴環(huán)十二烷的方法檢出限1.6ng/L~1.7ng/L，測定下限6.4ng/L~6.8ng/L，詳見附錄A。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ91.1污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ91.2地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ164地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3方法原理在酸性（pH值≤4）條件下，樣品經(jīng)固相萃取柱富集凈化，用高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜分離檢測。根據(jù)保留時(shí)間和特征離子定性，同位素稀釋法定量。4試劑和材料除非另有說明，分析時(shí)均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實(shí)驗(yàn)用水為新制備的不含目標(biāo)化合物的純水。4.1甲醇（CH3OH）：色譜純。4.2正己烷（C6H14）：色譜純。4.3二氯甲烷（CH?Cl?)：色譜純。4.4甲酸（HCOOH）：色譜純。4.5乙酸銨（CH3COONH4）：優(yōu)級純。4.6甲醇-二氯甲烷混合溶液。甲醇（4.1）和二氯甲烷（4.3）按1:4的體積比進(jìn)行混合。4.7甲醇溶液。4T/GDAEMXXXX—2024用甲醇（4.1）和水按1:1的體積比進(jìn)行混合。4.8乙酸銨水溶液：c(CH3COONH4)=2mmol/L。稱取0.154g乙酸銨（4.5），用水溶解，定容至1000ml，混勻，臨用現(xiàn)配。4.9六溴環(huán)十二烷標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100μg/ml?？芍苯淤徺I市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，含3種六溴環(huán)十二烷(α-HBCD、β-HBCD、γ-HBCD），溶劑為甲醇，貯備液參照產(chǎn)品說明書保存。4.1013C12-六溴環(huán)十二烷標(biāo)準(zhǔn)貯備液（提取內(nèi)標(biāo)）：ρ=10μg/ml。可直接購買市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，含3種13C12-六溴環(huán)十二烷（13C12-α-HBCD、13C12-β-HBCD、13C12-γ-HBCD），溶劑為甲苯，貯備液參照產(chǎn)品說明書保存。4.11α-六溴環(huán)十二烷-d18標(biāo)準(zhǔn)貯備液（進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)）：ρ=50μg/ml?？芍苯淤徺I市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，α-六溴環(huán)十二烷-d18，溶劑為甲苯，貯備液參照產(chǎn)品說明書保存。4.12六溴環(huán)十二烷標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1μg/ml。取適量六溴環(huán)十二烷標(biāo)準(zhǔn)貯備液（4.9），用甲醇（4.1）稀釋，于-15℃以下冷凍、密封、避光保存，保存期為6個(gè)月。4.1313C12-六溴環(huán)十二烷標(biāo)準(zhǔn)使用液（提取內(nèi)標(biāo)）：ρ=1μg/ml。取適量13C12-六溴環(huán)十二烷標(biāo)準(zhǔn)貯備液（提取內(nèi)標(biāo)）（4.10），用甲醇（4.1）稀釋，于-15℃以下冷凍、密封、避光保存，保存期為6個(gè)月。4.14α-六溴環(huán)十二烷-d18標(biāo)準(zhǔn)使用液（進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)）：ρ=1μg/ml。取適量α-六溴環(huán)十二烷-d18標(biāo)準(zhǔn)貯備液（進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)）（4.11），用甲醇（4.1）稀釋，于-15℃以下冷凍、密封、避光保存，保存期為6個(gè)月。4.15固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物，規(guī)格為500mg/6ml，或其他等效萃取柱。4.16濾膜Ⅰ：石英砂或其他材質(zhì)等效濾膜，0.45μm。4.17濾膜Ⅱ：親水性聚四氟乙烯、聚醚砜或其他材質(zhì)等效濾膜，0.22μm。4.18氮?dú)猓杭兌取?9.99%。4.19氬氣：純度≥99.999%。5儀器和設(shè)備5.1采樣瓶：棕色玻璃瓶，2.5L。5.2樣品瓶：棕色玻璃瓶。5.3高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI），具備流動(dòng)相梯度洗脫和質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測功能。5.4色譜柱：10cm（柱長）×2.1mm（內(nèi)徑）×2.7μm（粒徑）的C18液相色譜柱，或其他性能相近的色譜柱。5.5固相萃取裝置：自動(dòng)或手動(dòng)，流速可調(diào)節(jié)。5.6濃縮裝置：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、氮吹濃縮儀或其他性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。5T/GDAEMXXXX—20245.7離心管：聚丙烯材質(zhì)。5.8渦旋混合器：轉(zhuǎn)速不少于1500r/min。5.9超聲波清洗機(jī)：頻率≥20kHz。5.10離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不少于6000r/min。5.11一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。6樣品6.1樣品采集和保存按照HJ91.1、HJ91.2和HJ164的相關(guān)規(guī)定采集和運(yùn)輸樣品，用采樣瓶（5.1）采集樣品，樣品應(yīng)充滿采樣瓶（5.1），于4℃以下冷藏、密封、避光保存。6.2試樣的制備6.2.1樣品預(yù)處理樣品恢復(fù)至室溫，充分混勻，量取1L樣品，用濾膜Ⅰ（4.16）過濾。過濾后的濾液用甲酸（4.4）調(diào)節(jié)pH≤4，全部用于固相萃?。?.2.2）。過濾后的濾膜Ⅰ放入50ml離心管（5.7）中，加入15ml正己烷（4.2）渦旋振蕩1min，超聲振蕩10min后，6000r/min離心5min，將上層清液轉(zhuǎn)至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，殘?jiān)?5ml正己烷（4.2）按上述方法再提取一次，所得上清液合并至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，在40℃水浴條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，加入5ml甲醇（4.1）溶解，超聲振蕩1min，合并至過濾后的濾液中，加入20μl13C12-六溴環(huán)十二烷標(biāo)準(zhǔn)使用液（提取內(nèi)標(biāo)）（4.13），待固相萃?。?.2.2）。6.2.2固相萃取將固相萃取柱（4.15）固定在固相萃取裝置（5.5）上，依次用5ml二氯甲烷（4.3）、5ml甲醇（4.1）和5ml實(shí)驗(yàn)用水進(jìn)行活化，活化過程中應(yīng)確保固相萃取柱中的填料不露出液面。在濾液中加入50ml甲醇（4.1），并以10ml/min（約3～4滴/秒）的流速通過固相萃取柱，上樣完畢后，用實(shí)驗(yàn)用水沖洗樣品瓶1~2次，洗滌液一并轉(zhuǎn)移至柱上。用10ml甲醇溶液（4.7）淋洗固相萃取柱，然后抽真空干燥固相萃取柱或用氮?dú)猓?.19）吹至近干。再用10ml甲醇-二氯甲烷混合溶液（4.6）以2ml/min（約1滴/秒）的流速洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。洗脫液經(jīng)濃縮裝置（5.6）于40℃濃縮至近干，用甲醇（4.1）定容至1.0ml，加入20μlα-六溴環(huán)十二烷-d18標(biāo)準(zhǔn)使用液（進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)4.14混勻，經(jīng)濾膜Ⅱ（4.17）過濾，置于樣品瓶（5.2）中，待測。30d內(nèi)完成分析。6.3空白試樣的制備用實(shí)驗(yàn)用水代替樣品，按照與試樣的制備（6.2）相同的步驟制備實(shí)驗(yàn)室空白試樣。7分析步驟7.1儀器參考分析條件7.1.1液相色譜參考條件流動(dòng)相A：乙酸銨水溶液（4.8）；流動(dòng)相B：甲醇（4.1）；柱溫：40℃;進(jìn)樣體積：5μl；6T/GDAEMXXXX—2024流速：0.3ml/min；梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序055165857.1.2質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子模式；監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。多反應(yīng)監(jiān)測條件見表2。表2質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測條件β-六溴環(huán)十二烷α-六溴環(huán)十二烷-d18α-六溴環(huán)十二烷-d18α-六溴環(huán)十二烷-d18α-六溴環(huán)十二烷-d18—7T/GDAEMXXXX—20247.1.3儀器調(diào)諧按照儀器使用說明書調(diào)諧儀器并確認(rèn)儀器性能，儀器性能正常后測定樣品。7.2校準(zhǔn)7.2.1標(biāo)準(zhǔn)系列的配制分別移取適量六溴環(huán)十二烷標(biāo)準(zhǔn)使用液（4.12逐級稀釋，用甲醇（4.1）配制至少5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度依次為2.0ng/ml、5.0ng/ml、20.0ng/ml、50.0ng/ml和100ng/ml（此為參考濃度）。分別取1.0ml制備好的標(biāo)準(zhǔn)系列于進(jìn)樣瓶（5.2）中，加入20μl13C12-六溴環(huán)十二烷標(biāo)準(zhǔn)使用液（提取內(nèi)標(biāo)）（4.13）和20μlα-六溴環(huán)十二烷-d18標(biāo)準(zhǔn)使用液（進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)）（4.14），混勻，待測。7.2.2標(biāo)準(zhǔn)系列的測定按照儀器參考條件（7.1），由低濃度到高濃度依次進(jìn)樣分析。目標(biāo)化合物、提取內(nèi)標(biāo)及進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)的總離子流色譜圖見圖1。1——α-六溴環(huán)十二烷；2——β-六溴環(huán)十二烷；3——γ-六溴環(huán)十二烷；4——13C12-α-六溴環(huán)十二烷（進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)5——13C12-β-六溴環(huán)十二烷（進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)）；6——13C12-γ-六溴環(huán)十二烷（進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)）；7——α-六溴環(huán)十二烷-d18。圖1目標(biāo)化合物、提取內(nèi)標(biāo)及進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)的總離子流色譜圖7.2.3平均相對響應(yīng)因子計(jì)算目標(biāo)化合物i的相對響應(yīng)因子按照公式（1）計(jì)算：RRFs,（1）式中：RRFs,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i的相對響應(yīng)因子；As,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i定量離子的峰面積；Aes,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)定量離子的峰面積；ρes,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，ng/ml；ρs,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度，ng/ml。8T/GDAEMXXXX—2024目標(biāo)化合物i的平均相對響應(yīng)因子按照公式（2）計(jì)算： 式中：RRFs,i——標(biāo)準(zhǔn)系列中目標(biāo)化合物i的平均相對響應(yīng)因子；RRFs,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i的相對響應(yīng)因子；n——標(biāo)準(zhǔn)系列點(diǎn)數(shù)。目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的相對響應(yīng)因子按照公式（3）計(jì)算：RRFes,（3）式中：RRFes,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的相對響應(yīng)因子；Aes,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)定量離子的峰面積；Ais,j——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)定量離子的峰面積；ρis,j——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，ng/ml；ρes,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，ng/ml。目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的平均相對響應(yīng)因子按照公式（4）計(jì)算： 式中：RRFes,i——目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的平均相對響應(yīng)因子；RRFes,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i的相對響應(yīng)因子；n——標(biāo)準(zhǔn)系列點(diǎn)數(shù)。7.3試樣測定按照與標(biāo)準(zhǔn)系列的測定（7.2.2）相同的儀器條件測定試樣（6.3）。7.4空白試驗(yàn)按照與試樣測定（7.3）相同的儀器條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室空白試樣（6.3.3）的測定。8結(jié)果計(jì)算與表示8.1定性分析根據(jù)保留時(shí)間與離子豐度比定性分析。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，試樣中目標(biāo)化合物保留時(shí)間和標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物保留時(shí)間比較，相差±0.2min以內(nèi)。樣品中各目標(biāo)化合物定性離子的相對豐度（Ksam,i）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性離子的相對豐度（Kstd,i）進(jìn)行比較，所得偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定樣品中存在該目標(biāo)化合物。Ksam,i和Kstd,i分別按照公式（5）和公式（6）計(jì)算。9T/GDAEMXXXX—2024式中：Ksam,j——試樣中目標(biāo)化合物i定性離子的相對豐度，%；Asam2,i——試樣中目標(biāo)化合物i定性離子的峰面積；Asam1,i——試樣中目標(biāo)化合物i定量離子的峰面積。式中：Kstd,i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物i定性離子的相對豐度，%；Astd2,i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物i定性離子的峰面積；Astd1,i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物i定量離子的峰面積。表3相對離子豐度的最大允許偏差Kstd,iKsam,i最大允許偏差Kstd,i＞50%20%＜Kstd,i≤50%Kstd,i≤10%8.2結(jié)果計(jì)算8.2.1試樣中提取內(nèi)標(biāo)質(zhì)量的計(jì)算試樣中目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度按照公式（7）計(jì)算。ρes,i=（7）式中：ρes,i——試樣中目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，ng/ml；Aes,i——試樣中目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)定量離子的峰面積；Ais——試樣中進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)定量離子的峰面積；ρis,i——試樣中進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，ng/ml；RRFes,i——目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的平均相對響應(yīng)因子。試樣中目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量按照公式（8）計(jì)算。mes,i=ρes,i×Vc式中：mes,i——試樣中目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量，ng；ρes,i——試樣中目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度，ng/ml；Vc——試樣定容體積，ml。8.2.2試樣中目標(biāo)化合物質(zhì)量濃度的計(jì)算T/GDAEMXXXX—2024試樣中目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度按照公式（9）計(jì)算。ρc,i=（9）式中：ρc,i——試樣中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度，ng/ml；Ac,i——試樣中目標(biāo)化合物i定量離子的峰面積；Aes,i——試樣中目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)定量離子的峰面積；ρes,i——試樣中目標(biāo)化合物i對應(yīng)提取內(nèi)標(biāo)添加的質(zhì)量濃度，ng/ml；RRFs,i——目標(biāo)化合物i的平均相對響應(yīng)因子。8.2.3樣品中目標(biāo)化合物質(zhì)量濃度的計(jì)算樣品中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度按照公式（10）計(jì)算。（10）式中：ρi——樣品中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度，ng/L；ρc,i——試樣中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度，ng/ml；Vc——試樣定容體積，ml；V——取樣體積，L。8.3結(jié)果表示測定結(jié)果最多保留3位有效數(shù)字，小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)的保留與方法檢出限一致。9精密度和正確度9.1精密度6家實(shí)驗(yàn)室分別對4.0ng/L、20.0ng/L、90.0ng/L的空白加標(biāo)進(jìn)行6次重復(fù)測定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.8%～17%、6.0%～20%、6.3%～15%；實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為13.8%～18.4%、5.3%～11.7%、5.4%～10.8%；重復(fù)性限分別為1.2ng/L～1.3ng/L、7.2ng/L～8.4ng/L、17.3ng/L~20.7ng/L；再現(xiàn)性限分別為1.8ng/L～2.2ng/L、8.4ng/L～8.5ng/L、20.1ng/L～25.9ng/L。6家實(shí)驗(yàn)室分別對加標(biāo)濃度為20.0ng/L的地下水、地表水和廢水加標(biāo)樣品重復(fù)測定6次，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為6.9%～14%、5.3%～17%、7.7%～18%；實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為14.1%～16.4%、9.3%~14.5%、8.8%～12.0%；重復(fù)性限分別為1.0ng/L～1.1ng/L、3.9ng/L～5.4ng/L、22.6ng/L～30.5ng/L；再現(xiàn)性限分別為1.6ng/L～1.9ng/L、6.7ng/L～8.8ng/L、29.0ng/L～35.7ng/L。精密度結(jié)果統(tǒng)計(jì)參見附錄B中表B.1。9.2正確度6家實(shí)驗(yàn)室分別對4.0ng/L、20.0ng/L、90.0ng/L的空白加標(biāo)樣品及20.0ng/L的地下水、地表水、廢水加標(biāo)樣品進(jìn)行6次重復(fù)測定，加標(biāo)回收率范圍分別為64.6%～118%、64.3%～123%、67.1%～142%、66.7%～128%、73.5%～136%、73.5%～123%；加標(biāo)回收率最終值分別為87.5%±24.2%～94.4%±34.7%、T/GDAEMXXXX—202479.5%±18.6%～85.5%±9.0%、78.7%±30.9%～80.8%±25.3%、82.7%±25.7%～86.9%±31.5%、80.0%±12.4%～84.2%±14.1%、90.2%±37.0%～90.7%±38.7%。加標(biāo)回收率范圍分別為71.7%～117%、73.3%～123%、59.2%～142%、53.3%～128%、48.3%～136%、49.2%～123%；加標(biāo)回收率最終值分別為88.5%±13.3%～96.9%±33.3%、95