細(xì)胞增殖多維檢測尋找做細(xì)胞增殖的你

關(guān)鍵詞：細(xì)胞增殖、EdU、CCK8、染料、抗體飛躍的載體干貨|細(xì)胞增殖多維檢測，尋找做細(xì)胞增殖的你當(dāng)我們做細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，包括：藥物篩選、病毒轉(zhuǎn)染、疾病模型、靶細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞增殖狀態(tài)的定性和定量，成為細(xì)胞學(xué)研究伙伴們地不二之選。當(dāng)我們需要對增殖細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)確定量，那么CCK8將會(huì)在電子耦合試劑存在的情況下，可以為線粒體內(nèi)的活性脫氫酶驗(yàn)明正身；當(dāng)我們需要觀察增殖細(xì)胞形態(tài)并定量，那么EdU代替大腕胸腺嘧啶出演武打戲的戲碼（合成DNA）,然后曝光在媒體的鎂光燈（免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)檢測）下，進(jìn)入我們的視野。當(dāng)然，對于研究細(xì)胞增殖，還有眾多的兄弟姊妹共同上陣，現(xiàn)在我們來對它們進(jìn)行一個(gè)詳細(xì)的比較吧。細(xì)胞增殖八種方法比較類型方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)直接計(jì)數(shù)法利用計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)儀得出細(xì)胞的數(shù)目簡單，省錢，試劑和儀器普通，結(jié)果準(zhǔn)確不適合樣品數(shù)量多的情況，不適合評估特定的亞群3H-TdR滲入法同位素3H標(biāo)記的TdR作為DNA合成的前體摻入DNA合成過程，從而被液體閃爍計(jì)數(shù)器檢測到。3H-TdR摻入法敏感性高，客觀性強(qiáng)，重復(fù)性好。需變性或酶切DNA才可以孵育抗體；變性條件可能破壞細(xì)胞、組織形態(tài)；實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣；有一定細(xì)胞毒性，不適合長期活體研究。Brdu檢測法BrdU代替胸腺嘧啶合成DNA，并用熒光標(biāo)記。經(jīng)抗原抗體反應(yīng)可放大信號，可結(jié)合其他標(biāo)記進(jìn)行同步研究。需變性或酶切DNA才可以孵育抗體;變性條件可能破壞細(xì)胞、組織形態(tài);實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣;有一定細(xì)胞毒性，不適合長期活體研究。EdU檢測法EdU代替胸腺嘧啶合成DNA，并用熒光標(biāo)記。利用Click反應(yīng)可以快速進(jìn)行檢測，不依賴于抗體，不需變性DNA，同樣適合多重標(biāo)記分析。步驟簡單具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，不適合長期活體研究。MTT檢測法活性脫氫酶將黃色的MTT分解成藍(lán)紫色的水不溶性的甲瓚，并沉積在活細(xì)胞中，死細(xì)胞無此功能。DMSO能溶解細(xì)胞中的甲瓚，在490nm波長處測定其光吸收值受藥物本身的顏色、培養(yǎng)基的顏色、血清的濃度使結(jié)果的變異較大價(jià)格便宜，使用廣泛。CCK-8檢測法MTT的升級版，細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。CCK-8生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養(yǎng)液加入有機(jī)溶劑溶解這個(gè)步驟，因此可以減少一定的誤差。重復(fù)性優(yōu)于MTT；對細(xì)胞毒性??；為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用。CCK-8價(jià)格相對于MTT，比較昂貴CFSE檢測法一種可穿透細(xì)胞膜的熒光染料，可以不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上，是一種良好的細(xì)胞標(biāo)記物。熒光信號強(qiáng)，細(xì)胞毒性低。通常用于長時(shí)程追蹤細(xì)胞的增殖狀況（或者細(xì)胞示蹤），并且兼容活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。最終的數(shù)據(jù)采集，需要借助流式細(xì)胞儀。而數(shù)據(jù)分析，也需要使用特殊的帶有增殖分析功能的軟件來擬合曲線。核抗原Ki‐67染色法Ki-67染色，研究人員可以評估處于細(xì)胞周期所有活躍期的總增殖細(xì)胞的百分比。類似石蠟切片、冰凍切片等已經(jīng)失去活性的樣本，就只能利用免疫染色的方法來觀察活躍增殖分子標(biāo)記對固定細(xì)胞進(jìn)行觀察。細(xì)胞增殖會(huì)產(chǎn)生諸多重要改變，包括DNA的合成、細(xì)胞代謝增加、增殖特異性蛋白的表達(dá)等?；谛乱淮鶤bFluor?熒光染色技術(shù)，Abbkine開發(fā)出能直接從DNA水平精準(zhǔn)檢測細(xì)胞增殖狀態(tài)的EdU試劑盒（貨號KTA2030和KTA2031）；同時(shí)，還開發(fā)出通過細(xì)胞代謝水平實(shí)現(xiàn)高通量檢測細(xì)胞增殖狀態(tài)的CCK8試劑盒(貨號KTA1020和KTC011001)?；谝陨显恚覀儜?yīng)廣大客戶的需要，我們還開發(fā)出細(xì)胞增殖檢測雞尾酒套裝(貨號KTD103-CN)，包含經(jīng)專利設(shè)計(jì)的細(xì)胞毒性陽性對照品，可完美解決目前增殖檢測結(jié)果的非標(biāo)準(zhǔn)化問題。Fig.1HEK293andL929cellsinthepositivecontrolgroupwereinducedbycytotoxicityinducerfor30min,whilethecontrolgroupwasnotgivenanytreatment.EnhancedCellCountingKit-8(CCK-8)wasusedtodetectthecytotoxicityofHEK293andL929cellsaftercytotoxicityinduction.Fig.2CellProliferationEdUImageKit(GreenFluorescence)wasusedtodetectthecytotoxicityofHEK293cellsaftercytotoxicityinduction.功能合并后的細(xì)胞增殖檢測雞尾酒套裝的優(yōu)勢如下亮點(diǎn)1.細(xì)胞增殖研究的標(biāo)準(zhǔn)化解決方案：經(jīng)專利設(shè)計(jì)的細(xì)胞毒性陽性對照品，可完美解決目前增殖檢測結(jié)果的非標(biāo)準(zhǔn)化問題；2.通用型凋亡檢測套裝：可直接準(zhǔn)確地檢測細(xì)胞增殖狀態(tài)，也可選擇高通量檢測，覆蓋了絕大多數(shù)細(xì)胞增殖/毒性檢測的需求。如圖所示，細(xì)胞增殖檢測雞尾酒套裝組分設(shè)計(jì)巧妙，可見一斑：上述兩大類方法，均是在活細(xì)胞、活組織中進(jìn)行的。但如果面對的是類似石蠟切片、冰凍切片等已經(jīng)失去活性的樣本，就只能利用免疫染色的方法來觀察活躍增殖分子標(biāo)記了。目前最受歡迎和認(rèn)可的增殖標(biāo)記是Ki-67（貨號ABM40064）（標(biāo)準(zhǔn)命名MKI67，markerofproliferationKi-67），這個(gè)分子標(biāo)記同時(shí)也是多種癌癥病理診斷指標(biāo)之一，下圖為下圖為人子宮癌組織的Ki-67免疫組化染色。在胞漿胞核和質(zhì)膜上均有表達(dá)。此外，PCNA（proliferatingcellnuclearantigen,貨號A01040）也是常用的活躍增殖標(biāo)記。它在細(xì)胞核中穩(wěn)定表達(dá)，也常常運(yùn)用于WB細(xì)胞核內(nèi)參抗體。值得一提的是，CFSE染料（5(6)-CFDA,SE，貨號BMD00066）也是檢測細(xì)胞增殖的良好標(biāo)記物，它進(jìn)入細(xì)胞后，可以不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上。當(dāng)細(xì)胞分裂時(shí)，CFSE標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一。在一個(gè)增殖的細(xì)胞群中，各連續(xù)代細(xì)胞的熒光強(qiáng)度呈對遞減，利用流式細(xì)胞儀在488nm激發(fā)光和熒光檢測通道可對其進(jìn)行分析。相關(guān)產(chǎn)品推薦：產(chǎn)品名稱應(yīng)用貨號規(guī)格【CCK8】細(xì)胞增殖/毒性檢測試劑盒細(xì)胞增殖/毒性檢測KTA1020200T/1000T/10000T乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測試劑盒細(xì)胞增殖/毒性檢測KTA103096T/480T細(xì)胞增殖成像分析試劑盒（EdU法）(綠色熒光)細(xì)胞增殖/毒性檢測KTA203050T/100T/500T細(xì)胞增殖成像分析試劑盒（EdU法）(橘紅色熒光)細(xì)胞增殖/毒性分析KTA203150T/100T/500TPCNA小鼠單克隆抗體(1D7)IF,IHC-P,WBA0104050μL/200μL/200μL×5細(xì)胞增殖標(biāo)志物Ki67單克隆抗體IHC-P,IFABM4006430μL/100μL/200μL5(6)-CFDA,SE細(xì)胞增殖體外檢測/體內(nèi)示蹤BMD0006650mg/100mg歡迎廣大“因粉”多多關(guān)注Abbkine公眾號，還會(huì)有更多科研驚喜等著大家喲。同時(shí)，Abbkine的技術(shù)專家為了給廣大讀者提供學(xué)習(xí)生物知識(shí)的平臺(tái)，經(jīng)過不懈努力，將多種高端生物實(shí)驗(yàn)的干貨整理出來，后期陸續(xù)在微信公眾號中刊登，請廣大熱愛科學(xué)的讀者持續(xù)關(guān)注Abbkine公眾號。Abbkine專注于蛋白學(xué)和細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域，致力于創(chuàng)新和研發(fā)各類抗體、蛋白質(zhì)、分析試劑與試劑盒，以期成為生命科學(xué)研究發(fā)展、藥物研發(fā)等領(lǐng)域的關(guān)鍵推動(dòng)者。我們?yōu)槟峁┑鞍缀兔庖哐芯坑脩糇钕矏鄣漠a(chǎn)品，從免疫學(xué)基礎(chǔ)產(chǎn)品，如蛋白提取定量，到免