醫(yī)院培訓(xùn)課件：《老化富含脂滴小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)卒中的反應(yīng)受損-文獻(xiàn)解讀》

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Interpretation

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老化富含脂滴小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)卒中的反應(yīng)受損2.PharmacotherapiesforCentralPost-StrokePain:ASystematicReviewandNetworkMeta-Analysis中樞性卒中后疼痛的藥物治療：一篇系統(tǒng)綜述及網(wǎng)狀meta分析

ArticleNO.1Agedlipid-ladenmicrogliadisplayimpaired

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期刊：EMBOmolecularmedicine影響因子：14.26JCR分區(qū)：Q1中科院：1區(qū)1西班牙巴塞羅那生物醫(yī)學(xué)研究所神經(jīng)科學(xué)和實(shí)驗(yàn)治療系，高級(jí)科學(xué)研究委員會(huì)。2西班牙巴塞羅那IDIBAPS生物醫(yī)學(xué)研究所。IDIBAPS生物醫(yī)學(xué)研究所成立于1996年，是一個(gè)卓越的生物醫(yī)學(xué)研究中心，致力于解決我們環(huán)境中最常見的疾病。它是一個(gè)由加泰羅尼亞政府、巴塞羅那醫(yī)院、巴塞羅那大學(xué)醫(yī)學(xué)與健康科學(xué)學(xué)院和巴塞羅那CSIC生物醫(yī)學(xué)研究所組成的聯(lián)盟。IDIPAPS是一個(gè)CERCA（加泰羅尼亞研究中心）附屬中心，于2009年首次被認(rèn)證為衛(wèi)生研究所。大約1500名專業(yè)人員組織成一百個(gè)研究小組。該研究所進(jìn)行轉(zhuǎn)化研究，即專注于確?；颊叽才詥栴}并在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行相關(guān)研究，確保實(shí)驗(yàn)室取得的進(jìn)展及時(shí)應(yīng)用于患者。它每年發(fā)表1200多篇文章，是領(lǐng)先的生物醫(yī)學(xué)研究所。（來自官網(wǎng)）01Introduction年齡是不可調(diào)節(jié)的卒中風(fēng)險(xiǎn)因素，老年認(rèn)卒中結(jié)局更差有證據(jù)支持惡化的炎癥反應(yīng)及神經(jīng)免疫反應(yīng)的改變可能導(dǎo)致了老年個(gè)體患腦血管疾病后更糟糕的神經(jīng)系統(tǒng)損傷促炎癥因子及固有免疫反應(yīng)因子的表達(dá)在老年個(gè)體中上調(diào)，而軸突及突觸結(jié)構(gòu)及活性相關(guān)的基因表達(dá)下調(diào)隨年齡增長，小膠質(zhì)細(xì)胞功能會(huì)逐漸減弱，氧化應(yīng)激，炎癥因子表達(dá)，異常脂類聚集，溶酶體貯積逐漸增多小膠質(zhì)細(xì)胞生存依賴于克隆刺激因子1受體，CSF1R，對(duì)其抑制可造成小膠質(zhì)細(xì)胞耗竭，去除抑制后，再次導(dǎo)入小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)獲得相應(yīng)改善本研究假設(shè)重塑老年個(gè)體小膠質(zhì)細(xì)胞表型可改善卒中結(jié)局，旨在調(diào)查年輕小鼠與老年小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)卒中反應(yīng)，以及小膠質(zhì)細(xì)胞耗竭后再恢復(fù)是否可以改善卒中結(jié)局02Methods&Materials人腦卒中發(fā)作后1,34,5,6,18,140天后死亡9名患者小鼠沒有將不同性別小鼠混合在一起，每組性別相同Stat1-/-及Stat+/+小鼠是基因敲除的，需要公司提供嵌合鼠，骨髓細(xì)胞移植形成幼鼠（3-4個(gè)月）老年鼠（21-22個(gè)月）02Methods&Materials腦梗死模型制作臨時(shí)結(jié)扎右側(cè)頸動(dòng)脈45分鐘，模擬大腦中動(dòng)脈堵塞，多普勒檢測血流動(dòng)力學(xué)假手術(shù)組嵌合體小鼠制作耗竭小膠質(zhì)細(xì)胞：CSF1R抑制劑PLX5622骨髓細(xì)胞移植：在移植前3,7,5,3天，腹腔注射白消安移植骨髓造血，后尾靜脈注射骨髓細(xì)胞，至少

8周后用于研究只是為了證明腦中耗竭小膠質(zhì)細(xì)胞后再次重建并非來源于外周而是中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織及細(xì)胞學(xué)檢查心臟鹽水灌注后取腦切片熒光染色：Plin2綠色、Iba-1紅色、DAPI藍(lán)色-細(xì)胞核

電鏡掃描水解分離免疫磁性物質(zhì)環(huán)境下培養(yǎng)、孵育流式細(xì)胞分離結(jié)合CD11b+、CD45的細(xì)胞,小膠質(zhì)細(xì)胞以CD11b+為主吞噬功能檢測：DAPI細(xì)胞核、BODIPY脂滴形態(tài)學(xué)檢查RNA測序，轉(zhuǎn)錄分析02Methods&Materials腦梗死預(yù)后相關(guān)評(píng)估神經(jīng)功能NeuroscoreGriptest：測前腿力量Rotarod：延遲掉落時(shí)間Cylindertest：按對(duì)側(cè)前臂接觸次數(shù)占所有接觸次數(shù)的比例計(jì)算MRI7.0T腦梗死損傷面積大小統(tǒng)計(jì)、分析及作圖t檢驗(yàn)，方差分析R、GraphPadPrism03Results腦缺血/再灌注改變小膠質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄表達(dá)譜和功能Figure1A對(duì)照組與梗死小鼠對(duì)比小膠質(zhì)細(xì)胞變化，活化增加，吞噬功能更強(qiáng)，綠色的是小膠質(zhì)細(xì)胞Figure1B梗死邊緣，電鏡掃描顯示小膠質(zhì)細(xì)胞包圍腫脹的突觸泡Figure1C卒中4天后流式細(xì)胞分離小膠質(zhì)細(xì)胞后獲得轉(zhuǎn)錄譜Figure1D主成分分析可以清晰區(qū)分兩組小膠質(zhì)細(xì)胞基因表達(dá)

03Results腦缺血/再灌注改變小膠質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄表達(dá)譜和功能Figure1E和FGO分析和GSEA分析表明卒中后會(huì)上調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞中與脂類聚集以及防御病毒的相關(guān)固有免疫反應(yīng)通路，如INF-α、β通路Figure1G其他生物過程高度富集了吞噬等相關(guān)功能基因，其表達(dá)上調(diào)Figure1H疾病相關(guān)小膠質(zhì)細(xì)胞在梗死后出現(xiàn)相關(guān)基因的上調(diào)及下調(diào)表達(dá)熱圖的特點(diǎn)是用顏色深淺表示數(shù)值大小，上調(diào)下調(diào)是和對(duì)照組相比，一定都是差異基因，分組可以看聚類和色調(diào)，這個(gè)很明顯

GSEA簡單理解根據(jù)差異倍數(shù)值將所有基因由大到小排序，看出上調(diào)下調(diào)趨勢03Results腦梗死可引起小膠質(zhì)細(xì)胞脂滴形成腦梗死引起I型干擾素反應(yīng)，同時(shí)伴隨炎癥因子反應(yīng)以及調(diào)節(jié)脂質(zhì)聚集基因上調(diào)Figure2A腦梗死后4天編碼脂滴形成相關(guān)蛋白的差異基因熱圖，上調(diào)用*表示，使用調(diào)整后P值Figure2B在人腦組織中，卒中也會(huì)增加Plin2及ISG15表達(dá)，后者是I型干擾素反應(yīng)通路中的基因，NA為未受影響組織Figure2CPLN2蛋白的WesternBlot結(jié)果，假手術(shù)組不分時(shí)間點(diǎn)，因?yàn)闆]有差異，在第4天時(shí)顯著表達(dá)Figure2D免疫熒光實(shí)驗(yàn)也表明，PLIN2為綠色，細(xì)胞核被DAPI染為藍(lán)色，iba-1（標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞）為紅色

03Results腦梗死可引起小膠質(zhì)細(xì)胞脂滴形成Figure2E電鏡下腦梗死24小時(shí)后脂滴與溶酶體接觸Figure2F和G小膠質(zhì)細(xì)胞中脂滴的計(jì)量通過流式細(xì)胞術(shù)用Bodipy染色，腦梗死4天后Stat+/+小鼠Bodipy+CD45lowCD11b+小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)增加，Stat+/+存在I型INF反應(yīng)03Results老年鼠較幼鼠表現(xiàn)出更糟糕的神經(jīng)結(jié)局，老年鼠小膠質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)出對(duì)腦梗死惡化的固有免疫反應(yīng)Figure3A腦梗死后老年鼠的神經(jīng)評(píng)分（越高越差）及梗死面積均高于幼鼠Figure3B一共篩選出1980個(gè)差異基因，1153個(gè)基因在老年鼠中上調(diào)，GSEA分析提示大部分功能與年齡相關(guān)。圖B為一個(gè)基因-通路網(wǎng)狀圖（Cnetplot），包含了與幼鼠小膠質(zhì)細(xì)胞相比，老年鼠的GO分析相關(guān)固有免疫，抗原提呈等相關(guān)的基因

03Results老年鼠較幼鼠表現(xiàn)出更糟糕的神經(jīng)結(jié)局，老年鼠小膠質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)出對(duì)腦梗死惡化的固有免疫反應(yīng)

Figure3CC圖為固有免疫反應(yīng)INF-β通路的熱圖Figure3D&E老年卒中鼠涉及脂類聚集，吞噬，脂肪酸結(jié)合等的基因表達(dá)上調(diào)，過氧化物酶體脂類代謝及長鏈脂肪酸β氧化等基因表達(dá)下調(diào)Figure3F不論假手術(shù)組還是腦梗死組，不論性別，老年鼠與幼鼠相比Bodipy+小膠質(zhì)細(xì)胞均增加Figure3G取小鼠細(xì)胞進(jìn)行免疫磁吸方法分離后進(jìn)行培養(yǎng)，僅老年鼠小膠質(zhì)細(xì)胞被Bodipy+染色，可見體外培養(yǎng)不能去除脂滴，且富含脂滴的小膠質(zhì)細(xì)胞不含或包含很少的吞噬體03Results腦梗死后小膠質(zhì)細(xì)胞恢復(fù)會(huì)重建老化小膠質(zhì)細(xì)胞某些轉(zhuǎn)錄特征Figure4A分別用PLX5622或正常飲食飼養(yǎng)21天，以圖耗竭實(shí)驗(yàn)組小膠質(zhì)細(xì)胞，后喂養(yǎng)7天正常飲食，建立腦梗死模型，4天后取細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)分析Figure4B&C與老年鼠原始小膠質(zhì)細(xì)胞相比再生小膠質(zhì)細(xì)胞與其差異基因表達(dá)主要集中在I型干擾物反應(yīng)，抗病毒反應(yīng)等，抗病毒反應(yīng)相關(guān)基因下調(diào)表達(dá)03Results老年鼠小膠質(zhì)細(xì)胞恢復(fù)會(huì)阻止老化小膠質(zhì)細(xì)胞促進(jìn)腦梗死的I型干擾素固有免疫反應(yīng)的惡化Figure4D對(duì)卒中小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞差異基因進(jìn)行分析，繪制韋恩圖，old.vs.young排除年齡效應(yīng)，old-renewed.vs.old排除細(xì)胞重建的影響，左圖137個(gè)基因符合該條件，但沒有在兩個(gè)基因集中都上調(diào)或下調(diào)的基因，所以表明重建前后基因一定存在上調(diào)下調(diào)兩個(gè)方向的表達(dá)調(diào)節(jié)Figure4E選取了75個(gè)注釋的基因形成熱圖，發(fā)現(xiàn)之前小膠質(zhì)細(xì)胞所上調(diào)表達(dá)的基因，在再生的小膠質(zhì)細(xì)胞中均下調(diào)表達(dá)Figure4F這些基因都受I型干擾素通路調(diào)節(jié)，對(duì)其通路進(jìn)行分析03Results小膠質(zhì)細(xì)胞恢復(fù)會(huì)減少含脂滴小膠質(zhì)細(xì)胞這一年齡相關(guān)亞組的量Figure5A老年卒中鼠小膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)某些編碼脂類聚集的分子，甚至比幼鼠卒中后上調(diào)表達(dá)還明顯&表示老化小膠質(zhì)細(xì)胞較年輕膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)表達(dá)的基因，#表示老年小鼠再生小膠質(zhì)細(xì)胞下調(diào)I型INF反應(yīng)中年齡相關(guān)的基因Figure5B老年鼠小膠質(zhì)細(xì)胞重建會(huì)明顯下調(diào)I型INF反應(yīng)中脂滴形成相關(guān)基因的表達(dá)Figure5C&D與未進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞重建的老年鼠相比，再生小膠質(zhì)細(xì)胞Bodipy+細(xì)胞的比例明顯減少，假手術(shù)組也是如此與年輕小鼠相當(dāng)，C圖可見綠色減少

03Results小膠質(zhì)細(xì)胞恢復(fù)會(huì)減少含脂滴小膠質(zhì)細(xì)胞這一年齡相關(guān)亞組的量Figure5E&F熒光及電鏡檢查也提示再生小膠質(zhì)細(xì)胞中含脂滴細(xì)胞數(shù)量減少，但F中順時(shí)針應(yīng)該是bacd03Results小膠質(zhì)細(xì)胞恢復(fù)會(huì)改善卒中后神經(jīng)系統(tǒng)功能Figure6A圖A為實(shí)驗(yàn)過程的流程，訓(xùn)練1周，喂食/耗竭2周，恢復(fù)正常飲食1周后建立腦梗死模型，4天、7天、14天進(jìn)行核磁檢查，神經(jīng)功能評(píng)估包括Neuroscore，Griptest，Rotarod，Cylindertest

03Results小膠質(zhì)細(xì)胞恢復(fù)會(huì)改善卒中后神經(jīng)系統(tǒng)功能

Figure6B神經(jīng)功能評(píng)分、Rotarod，無差異；Griptest在14天時(shí)重建后可明顯改善Figure6CCylindertest，無明顯差異，也沒有明顯減少損傷面積04Discussion老年人不良的卒中結(jié)局與其大腦老化相關(guān)，再次本實(shí)驗(yàn)表明功能失調(diào)的小膠質(zhì)細(xì)胞可以導(dǎo)致老年鼠較差的卒中結(jié)局其潛在機(jī)制可能與惡化的I型干擾素通路相關(guān)，其與小膠質(zhì)細(xì)胞年齡依賴的脂滴聚集相關(guān)更新老年鼠中小膠質(zhì)細(xì)胞后可增加其整體適應(yīng)度，減少含脂滴小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量卒中后老年鼠中再生的小膠質(zhì)細(xì)胞可減弱固有免疫反應(yīng)，減少脂滴聚集，并且可以改善運(yùn)動(dòng)功能卒中后會(huì)引起固有免疫反應(yīng)對(duì)損傷組織清除，某些脂類聚集相關(guān)蛋白如Plin2表達(dá)增加，卒中后的急性脂滴聚集可減少游離脂肪酸等氧化應(yīng)激產(chǎn)生有毒物質(zhì)，起到一定的保護(hù)作用。ArticleNO.2PharmacotherapiesforCentralPost-StrokePain:ASystematicReviewandNetworkMeta-Analysis期刊：Oxidativemedicineandcellularlongevity影響因子：7.31JCR分區(qū)：Q2中科院：2區(qū)四川華西醫(yī)院雅安醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科、檢驗(yàn)科川北醫(yī)學(xué)院01Introduction卒中后疼痛：卒中后中樞痛（CPSP）、復(fù)雜性區(qū)域疼痛綜合征（CRPS）、卒中后肩痛（PSSP）、痙攣性疼痛、卒中后頭痛卒中病人發(fā)生CPSP為11%，其中31%在1個(gè)月發(fā)生，阻礙康復(fù)進(jìn)程藥物治療主要有抗癲癇、抗抑郁，阿片類，止痛，類固醇類，IASP（國際疼痛研究協(xié)會(huì)）推薦三環(huán)類抗抑郁藥，加巴噴丁，普瑞巴林及去甲腎上腺素再攝取抑制劑作為一線用藥之前有很多系統(tǒng)綜述的結(jié)論莫衷一是，且涵蓋藥物種類樣本量較少，目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)很少是頭對(duì)頭實(shí)驗(yàn)（非安慰劑對(duì)照）因此本文進(jìn)行網(wǎng)狀meta分析，進(jìn)行比較各種藥物間效果差異，以求得最優(yōu)解02MethodsStudySourceMedline，Embase，Cochrane，Webofscience直到2022/5/30閱讀之前相關(guān)meta分析納入文獻(xiàn)列表，以免漏查SelectionCriteria納入標(biāo)準(zhǔn)RCT缺血性卒中，顱內(nèi)出血成年患者，有CPSP，并未限制診斷標(biāo)準(zhǔn)以及發(fā)病時(shí)間，因?yàn)楹芏喽际歉鶕?jù)經(jīng)驗(yàn)診斷，發(fā)病時(shí)間也很少提及RCT研究藥物效果是，應(yīng)至少包括如下藥物之一：抗癲癇、止痛藥、類固醇、依那西普、帕米磷酸鹽、納洛酮等，對(duì)照組為安慰劑或者常規(guī)關(guān)懷RCT需評(píng)估疼痛程度變化以及副作用排除標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)不充分，不足以職稱進(jìn)一步分析以如下形式發(fā)表：會(huì)議摘要，新聞報(bào)道等OutcomeMeasurementVAS視覺模擬量表10/100NRS0~10，小于3分疼痛控制LikertScales有4/5/7個(gè)等級(jí)三種量表，比如比較同意，同意，非常同意。。。02MethodsDataExtractionCharacteristics：name、year、samplesizebaselineparameters：meanage、sex、administrationdetailsofinterventionsandcontrols：drugtype、doseoutcomemeasures：namesofscales02MethodsRiskofBiasAssessmentRoB2.0

02MethodsDataSynthesis基于頻率學(xué)的方法不是貝葉斯P-score網(wǎng)狀meta不提供p值，就看落沒落在95%CI里3個(gè)假設(shè)異質(zhì)性/同質(zhì)性：與傳統(tǒng)直接比較Meta分析相同，一般用Q統(tǒng)計(jì)量檢驗(yàn)法，若檢驗(yàn)結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可認(rèn)為納入研究具有同質(zhì)性。本文采用隨機(jī)效應(yīng)模型相似性：包括臨床相似性和方法學(xué)相似性。臨床相似性指Avs.C和Bvs.C的兩組試驗(yàn)中研究對(duì)象、干預(yù)措施和結(jié)局測量等的相似性，方法學(xué)相似性指兩組試驗(yàn)的質(zhì)量相似性。目前相似性假設(shè)沒有公認(rèn)的方法來檢驗(yàn)，只能通過比較試驗(yàn)特征進(jìn)行主觀判斷，或者通過敏感性分析、亞組分析以及Meta回歸來識(shí)別。一致性：既有直接比較結(jié)果又有間接比較結(jié)果，或同時(shí)有多個(gè)間接比較結(jié)果(如：Avs.B可以通過Avs.C和Bvs.C獲得，亦可通過Avs.D和Bvs.D獲得)，在決定是否合并這些結(jié)果時(shí)，則需要進(jìn)行第3個(gè)水平的一致性檢驗(yàn)。03ResultsCharacteristicsofIncludedRCTs檢索了1758個(gè)文獻(xiàn)，最終納入13個(gè)RCT，572名患者03ResultsRiskofBiasAssessment