《浦北陳皮中毒死蜱和克百威快速檢測膠體金免疫層析法》

T/CAI***-2023ICS65.100CCSG23T/CAI1xx-2023浦北陳皮中毒死蜱和克百威快速檢測膠體金免疫層析法（征求意見稿）2023-XX-XX發(fā)布2023-XX-XX實施中國農(nóng)業(yè)國際合作促進會發(fā)布浦北陳皮中毒死蜱和克百威快速檢測膠體金免疫層析法范圍本文件規(guī)定了浦北陳皮中毒死蜱和克百威快速檢測膠體金免疫層析法的原理、試劑與材料、儀器與設備、分析步驟、結果判定、性能指標等。本文件適用于浦北陳皮及其原材料中克百威和毒死蜱的快速測定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法食藥監(jiān)辦科[2017]43號食品快速檢測方法評價技術規(guī)范術語和定義以下列術語和定義適用于本文件。浦北陳皮pubeichenpi在欽州市浦北縣行政區(qū)域內(nèi)栽培的茶枝柑（Citrusreticulata‘Chachi’）的果皮經(jīng)曬干或烘干，并在區(qū)域范圍內(nèi)貯存陳化三年以上的果皮產(chǎn)品。按采收加工時間可分為：柑青皮（青皮）、微紅皮（二紅皮）和大紅皮（紅皮）。原理本產(chǎn)品檢測過程中方法應用了競爭法免疫層析原理，在層析過程待測液中的待測物與金標抗體結合，抑制了金標抗體與硝酸纖維素膜上的競爭抗原（T線）的結合，從而影響T線顯色試劑與材料試劑除另有說明外，所有試劑均應為分析純，實驗室用水應符合GB/T6682中二級水的要求。材料檢測卡克百威快速檢測卡。樣品稀釋液應由膠體金免疫層析試紙條配套提供，或按照其說明書配制。參考物質(zhì)克百威和毒死蜱參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度≥98%。表1克百威參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子質(zhì)量克百威Carbofuran1563-66-2C12H15NO3221.252毒死蜱Chlorpyrifos2921-88-2C9H11Cl3NO3PS350.586標準溶液配制標準儲備液（1000mg/L）應準確稱取毒死蜱、克百威標準品各約10mg（精確至0.1mg），用甲醇溶解，定容至10mL，避光-18℃及以下條件保存，有效期12個月。標準中間液（10mg/L）應準確吸取0.1mL標準儲備溶液（5.3.1），用甲醇稀釋，定容至10mL，避光-18℃及以下條件保存，有效期1個月。標準工作液（1mg/L）應準確吸取0.1mL標準中間液（5.3.2），用甲醇稀釋，定容至10mL，0℃～5℃冷藏避光保存，有效期2～3周。儀器與設備所需設備儀器應如下：電子天平：感量為0.01g；移液器：20μL~200μL、100μL~1000μL；渦旋儀。分析步驟試樣制備陳皮樣品取樣部位應按GB2763的規(guī)定執(zhí)行，選取一定量的有代表性樣本，剪成約1cm×1cm的碎片，備用。試樣提取應稱取1±0.1g樣本于50mL離心管中；加入3mL樣品稀釋液，劇烈振蕩3min；離心管內(nèi)混合液即為待測液。注：若混合液不易吸取，應置于離心機中離心1min。測定步驟將待測液100μL（膠頭滴管約3滴）加入檢測卡的加樣孔中，加樣同時開始計時；在室溫（20℃～25℃）反應5min后判讀結果。注1：測定步驟建議按照試紙條說明書。注2：結果判定建議使用讀數(shù)儀，讀數(shù)儀的具體使用參照儀器使用說明書。質(zhì)控試驗試驗方式每批樣品應同時進行空白試驗和加標質(zhì)控試驗。空白試驗應稱取空白試樣，按照7.2和7.3步驟與樣品同法操作。加標質(zhì)控試驗應準確稱取空白試樣2g（精確至0.05g）放入離心管中，加入40μL克百威和毒死蜱標準工作液（4.2.3），使試樣中克百威和毒死蜱濃度為0.02mg/kg，按照6.2和6.3步驟與樣品同法操作。結果判定讀數(shù)儀測定將待判讀檢測卡插入儀器，選擇對應項目和批號進行檢測，根據(jù)儀器顯示結果進行判讀。儀器使用方法詳見儀器使用說明書。目視判定應通過對比質(zhì)控線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進行結果判定。目視判定示意圖見圖1。判定方式陰性結果T線顯色比C線顯色深或一樣深，表示樣品中待檢測物質(zhì)濃度低于檢測限，或不含待檢測物質(zhì)。陽性結果T線顯色比C線顯色淺，或T線無顯色，則表示樣品中待檢測物質(zhì)濃度高于檢測限。無效質(zhì)控C線未顯色，表明操作過程不正確或檢測卡已失效，檢測結果無效。圖1目視判定示意圖質(zhì)控試驗要求空白試驗測定結果應為陰性，加標質(zhì)控試驗測定結果應為陽性。結果確認當檢測結果為陽性時，應按照GB2763指定方法標準進行確證。性能指標檢出限：0.02mg/kg。靈敏度：≥95%。特異性：≥90%。假陰性率：≤5%。假陽性率：≤10%注：性能指標計算方法見附錄A。其他本方法所述試劑、試紙條信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不做限定。方法使用者應使用經(jīng)過驗證的滿足本方法規(guī)定的各項性能指標的試劑、試紙條。

附錄A（規(guī)范性）快速檢測方法性能指標計算A.1快速檢測方法各個性能指標計算見表A.1。表A.1快速檢測方法性能指標計算表樣品情況a檢測結果b總數(shù)陽性陰性陽性N11N12N1=N11+N12陰性N21N22N2=N21+N22總數(shù)N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異（Χ2）Χ2=(∣N12-N21∣-1)2/（N12+N21），自由度（df）=1靈敏度（p+，%）p+=N11/N1.特異性（p-，%）p-=N22/N2.假陰性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-靈敏度假陽性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特異性相對準確度，%c(N11+N22)/(N1.+N2.)a由參比方法檢驗得到的結果或者樣品中實際的公議值結果；b由待確認方法檢驗得到的